Морфофункциональные изменения в органах и тканях соболей при парвовирусном энтерите

УДК 619:615.285
DOI 10.33861/2071-8020-2020-6-33-34

Семикрасова А.Н., Петрова И.В., Жилина К.В., Попов Д.В. Федеральное государственное бюджетное научное
учреждение «Научноисследовательский институт пушного звероводства и кролиководства
имени В.А. Афанасьева», Московская область, Раменский район, пос. Родники

Введение. По результатам мониторинговых исследований в звероводческих хозяйствах Российской Федерации выявлено, что в структуре заболеваний соболей 60% приходится на энтерит. При лабораторном исследовании биоматериала от этих животных установлена бактериальная этиология - у 28%, вирусная - у 15%, из-за погрешностей в кормлении - 17%. Так как энтерит приносит большой экономический ущерб, в связи с гибелью соболей, установить этиологию его возникновения и изучить его клинические и патоморфологические проявления является актуальной задачей.

Диагностика вирусных болезней, как и других инфекционных болезней, предполагает учёт комплекса признаков, характеризующих эпизоотические параметры болезни, клиническую и патологоанатомическую картину, применение серологических и других лабораторных методов для постановки диагноза. В свете этого факта целью нашей работы стало исследование вирусного энтерита, с перспективой разработки специфической профилактики этого заболевания.

Материалы и методы исследований. Работа проведена в отделе биотехнологии ФГБНУ «Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева» и в звероводческих хозяйствах Российской Федерации, неблагополучных по энтериту соболей.

Материал от соболей, павших от парвовирусного энтерита, подвергнут патологоанатомическому и гистологическому исследованиям.

Для гистологического исследования патологический материал фиксирован в 10%-ном растворе нейтрального формалина. Гистологические препараты приготовлены с использованием системы для микрото-мирования микротом KD-3358 и окрашены гематоксилин-эозином.

Общий анализ крови проведен на анализаторе крови Mindrey.

Гемагглютинирующая активность возбудителя изучена в РГА с эритроцитами свиньи по методике, предложенной Сулимовым А.А. (1988). В качестве положительного контроля использовали культуральный вирус парвовирусного энтерита норок шт. Береговой, в качестве отрицательного - кал от здорового животного.

ДНК выделяли из клинических образцов набором К-Сорб («Синтол», г. Москва). Для выявления ДНК парвовируса плотоядных ставили ПЦР в реальном времени согласно методике, описанной Streck A.F., Ruster D., Truyen U., Homeier T. [3]. Амплификацию проводили в реакционной смеси объемом 25 мкл с использованием набора реагентов «2,5*ре-акционная смесь для ПЦР-РВ» («Синтол»). В состав реакционной смеси входило по 5 пмоль каждого праймера и 5 пмоль зонда. ПЦР-РВ проводили в амплификаторе ДТ-96 («ДНК-Технология») в режиме 95°С - 90 сек (1 цикл), 95°С - 20 сек, 58°С - 40 сек (45 циклов). Значение пороговых циклов в ПЦР и концентрации вирусной ДНК определялось автоматически с помощью программы RealTime_PCRv.7.7 («ДНК-Технология»), на основе математического анализа формы кривой амплификации (метод геометрический, Cp). Праймеры и зонды синтезированы в фирме «Синтол» (г. Москва).

Для дифференциальной диагностики патологический материал подвергнут микробиологическому исследованию.

Результаты исследований и их обсуждение. Проведены мониторинговые исследования в зверохозяйствах Российской Федерации по выявлению вирусного энтерита у соболей. С этой целью производится сбор патологический материала от зверей, павших с клиническими признаками энтерита (вялость, взъерошенность волоса, каловые массы жидкой консистенции, со слизистыми трубками, состоящими из десквамированного эпителия и кишечного содержимого). Биоматериал от больных животных исследован патоморфологически, бактериологически, серологически и гематологически. По результатам лабораторных исследований была сформирована опытная группа - 1-4 проба (с высокими титрами антигена, большой концентрацией ДНК парвовируса в биоматериале и отсутствием патогенной микрофлоры) и контрольная - здоровые животные (табл. 1).

Таблица 1 Результаты лабораторного исследования биоматериала от соболей

№ пробы	Результат РГА (титр)	Концентрация ДНК парвовируса в биоматериале
1	1:128	1,2Ч107
2	1:128	2,8Ч105
3	1:128	3,1Ч106
4	1:128	5,1Ч106
5*	0	Отр.
6*	0	Отр.
7*	0	Отр.
8*	0	Отр.

Примечание: * - номер контрольной группы животных

У зверей опытной и контрольной групп был проведен общий ана­лиз крови (табл. 2)

Таблица 2 Результаты лабораторного исследования биоматериала от соболей

№ пробы	Эритроциты, Ч1012/л	Гемоглобин, г/л	Лейкоциты, Ч109/л
1	12,1	165	12,4
2	10,3	161	12,8
3	11,3	163	13,5
4	11,2	169	14,8
5*	9,0	164	5,4
6*	9,2	162	5,0
7*	9,4	170	6,0
8*	9,1	158	5,8

Примечание: * - контрольная группа животных

В пробах крови определяли лейкоциты, эритроциты и гемоглобин. Из представленной таблицы 2 видно, что у больных животных отмечается лейкоцитоз.

При проведении патологоанатомического вскрытия животных опытной группы установлено, что заболевание парвовирусным энтеритом не вызывает патологических изменений в желудке, что является дифференцирующим признаком. В кишечнике отмечено истончение и катарально-геморрагическое воспаление стенок, резкое увеличение лимфоузлов, желчный пузырь переполнен желчью, селезенка увеличена, темно-красного цвета с точечными кровоизлияниями под капсулой.

При диагностике энтеритов важное значение имеет гистологическое исследование кишечника. Оно позволяет выделить дегенеративную и регенеративную стадию болезни. Дегенеративная стадия характеризуется десквамацией и некрозом покровного эпителия слизистой оболочки тонкого отдела кишечника, атрофией ворсинок (рисунок 1).

Рис. 1. Тонкий отдел кишечника соболя, больного энтеритом, окраска гаматоксилин-эозином (ок. х10 об. х10)

Крипты расширены, в просвете обнаруживаются увеличенные в 2-3 раза отдельные клетки покровного эпителия - баллонирующие клетки (характерный признак вирусного энтерита норок) (рисунок 2).

Рис. 2. Тонкий отдел кишечника соболя, больного энтеритом, окраска гаматоксилин-эозином (ок. х10 об. х40)

Выявлено разрыхление подслизистой оболочки тощей кишки, набухание эндотелия мелких сосудов. Ворсинки собственно слизистой оболочки укорочены, утолщены за счет инфильтрации лимфатическими клетками. В ободочной кишке собственно слизистая резко инфильтрирована лимфоплазмацитами, в апикальных частях ворсинок очаговый некробиоз эпителиальных клеток и их десквамация. Просвет крипт расширен, в них видна пролиферация и уплотнение эпителиальных клеток, которые отслаиваются и в свободном состоянии находятся в просвете.

Выводы:

1. Наиболее информативным при постановке диагноза на парвовирус у соболя является постановка РГА с эритроцитами свиньи и RT-PCR.

2. При проведении патологоанатомического исследования дифференцирующим признаком парвовирусного энтерита у соболей является отсутствие изменений в желудке.

3. При проведении гистологического исследования характерным признаком парвовирусного энтерита является выявление баллониру-ющих клеток в тонком отделе кишечника.

Список литературы:

1. Уласов В.И. Ветеринарные проблемы пушного звероводства// Ветеринария. - 2008. - № 5. - с. 3.
2. Власов Н.А., Уласов В.И. Парвовирусы плотоядных и вызываемые ими болезни. - Ульяновск. - 2000. - 35 с.
3. Семикрасова А.Н. Изучение этиологии энтерита клеточных соболей/ А.Н. Семикрасова, И.В. Петрова, Л.Е. Гришина, Г.Ю. Косовский// Кролиководство и звероводство. - 2018. - № 6. - С. 16-19.
4. Семикрасова А.Н. Парвовирусный энтерит соболей/ А.Н. Семикрасова, И.В. Петрова, К.В. Жилина, Л.Е. Гришина, Г.Ю. Косовский// Естественные и технические науки. - № 10. - 2019. - с. 85-86.

Резюме. За многолетнюю практику разведения пушных зверей была отмечена высокая резистентность соболей к инфекционным заболеваниям при клеточном содержании. Но в последние годы в звероводческих хозяйствах все чаще стали появляться локальные эпизоотии у соболей, проявляющиеся энтеритами. При лабораторном исследовании патологического материала от больных животных и проведении ПЦР и РГА был установлен парвовирусный энтерит. Возбудителем этого заболевания является вирус, относящийся к семейству Parvoviridae, геном которого представлен одноцепочечной ДНК. Структура вириона делает все парвовирусы очень стабильными во внешней среде. Парвовирусы плотоядных проникают практически во все клетки организма, а репродуцируются только в наиболее митотически активных тканях, которыми и является постоянно репродуцирующийся эпителий кишечника. Для парвовирусов характерны, с одной стороны, высокая (до 98,5%) степень идентичности геномов и, с другой стороны, выраженная антигенная вариабельность и геномный полиморфизм. Это свидетельствует о возможности межвидовой передачи и поражения побочных (случайных) хозяев, которые могут служить резервуаром для рекомбинации и селекции штаммов с новыми антигенными свойствами и видовым тропизмом. С 2017 года сотрудниками Научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева проводятся мониторинговые исследования в различных зверохозяйствах Российской Федерации, где разводится соболь и из патологического материала от соболей, павших с клиническими признаками энтерита, методом ПЦР часто выделяется ДНК парвовируса. Так как совокупность полученных данных позволяет предположить опасность заболевания для уникального российского соболя парво-вирусным энтеритом, изучение морфофункциональных изменений у соболей является актуальной задачей.

Ключевые слова: соболь, парвовирус, энтерит, гистология, патологоанатомические изменения, баллонирующие клетки, РГА, ПЦР, гематологические исследования, диагностика, кишечник.

Сведения об авторах:

Петрова Ирина Владимировна, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник ФГБНУ «Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева»; 140143, Московская обл., Раменский район, пос. Родники, ул. Трудовая, 6; тел.: 8-495-7442642; e-mail: niipzk@mail.ru.

Жилина Ксения Владимировна, младший научный сотрудник ФГБНУ «Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева»; 140143, Московская обл., Раменский район, пос. Родники, ул. Трудовая, 6; тел.: 8-495-7442642; e-mail: niipzk@mail.ru.

Попов Дмитрий Владимирович, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник, заведующий отделом биотехнологии ФГБНУ «Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева»; 140143, Московская обл., Раменский район, пос. Родники, ул. Трудовая, 6; тел.: 8-495-7442642; e-mail: niipzk@mail.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Семикрасова Алла Николаевна, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник ФГБНУ «Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева»; 140143, Московская обл., Раменский район, пос. Родники, ул. Трудовая, 6; тел.: 8-495-7442642; e-mail: niipzk@mail.ru.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей