УДК 619:615.285
DOI 10.33861/2071-8020-2020-6-33-34
Семикрасова А.Н., Петрова И.В., Жилина К.В., Попов Д.В. Федеральное государственное бюджетное научное
учреждение «Научноисследовательский институт пушного звероводства и кролиководства
имени В.А. Афанасьева», Московская область, Раменский район, пос. Родники
Введение. По результатам мониторинговых исследований в звероводческих хозяйствах Российской Федерации выявлено, что в структуре заболеваний соболей 60% приходится на энтерит. При лабораторном исследовании биоматериала от этих животных установлена бактериальная этиология - у 28%, вирусная - у 15%, из-за погрешностей в кормлении - 17%. Так как энтерит приносит большой экономический ущерб, в связи с гибелью соболей, установить этиологию его возникновения и изучить его клинические и патоморфологические проявления является актуальной задачей.
Диагностика вирусных болезней, как и других инфекционных болезней, предполагает учёт комплекса признаков, характеризующих эпизоотические параметры болезни, клиническую и патологоанатомическую картину, применение серологических и других лабораторных методов для постановки диагноза. В свете этого факта целью нашей работы стало исследование вирусного энтерита, с перспективой разработки специфической профилактики этого заболевания.
Материалы и методы исследований. Работа проведена в отделе биотехнологии ФГБНУ «Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева» и в звероводческих хозяйствах Российской Федерации, неблагополучных по энтериту соболей.
Материал от соболей, павших от парвовирусного энтерита, подвергнут патологоанатомическому и гистологическому исследованиям.
Для гистологического исследования патологический материал фиксирован в 10%-ном растворе нейтрального формалина. Гистологические препараты приготовлены с использованием системы для микрото-мирования микротом KD-3358 и окрашены гематоксилин-эозином.
Общий анализ крови проведен на анализаторе крови Mindrey.
Гемагглютинирующая активность возбудителя изучена в РГА с эритроцитами свиньи по методике, предложенной Сулимовым А.А. (1988). В качестве положительного контроля использовали культуральный вирус парвовирусного энтерита норок шт. Береговой, в качестве отрицательного - кал от здорового животного.
ДНК выделяли из клинических образцов набором К-Сорб («Синтол», г. Москва). Для выявления ДНК парвовируса плотоядных ставили ПЦР в реальном времени согласно методике, описанной Streck A.F., Ruster D., Truyen U., Homeier T. [3]. Амплификацию проводили в реакционной смеси объемом 25 мкл с использованием набора реагентов «2,5*ре-акционная смесь для ПЦР-РВ» («Синтол»). В состав реакционной смеси входило по 5 пмоль каждого праймера и 5 пмоль зонда. ПЦР-РВ проводили в амплификаторе ДТ-96 («ДНК-Технология») в режиме 95°С - 90 сек (1 цикл), 95°С - 20 сек, 58°С - 40 сек (45 циклов). Значение пороговых циклов в ПЦР и концентрации вирусной ДНК определялось автоматически с помощью программы RealTime_PCRv.7.7 («ДНК-Технология»), на основе математического анализа формы кривой амплификации (метод геометрический, Cp). Праймеры и зонды синтезированы в фирме «Синтол» (г. Москва).
Для дифференциальной диагностики патологический материал подвергнут микробиологическому исследованию.
Результаты исследований и их обсуждение. Проведены мониторинговые исследования в зверохозяйствах Российской Федерации по выявлению вирусного энтерита у соболей. С этой целью производится сбор патологический материала от зверей, павших с клиническими признаками энтерита (вялость, взъерошенность волоса, каловые массы жидкой консистенции, со слизистыми трубками, состоящими из десквамированного эпителия и кишечного содержимого). Биоматериал от больных животных исследован патоморфологически, бактериологически, серологически и гематологически. По результатам лабораторных исследований была сформирована опытная группа - 1-4 проба (с высокими титрами антигена, большой концентрацией ДНК парвовируса в биоматериале и отсутствием патогенной микрофлоры) и контрольная - здоровые животные (табл. 1).
Таблица 1 Результаты лабораторного исследования биоматериала от соболей
| № пробы | Результат РГА (титр) | Концентрация ДНК парвовируса в биоматериале |
|---|---|---|
| 1 | 1:128 | 1,2Ч107 |
| 2 | 1:128 | 2,8Ч105 |
| 3 | 1:128 | 3,1Ч106 |
| 4 | 1:128 | 5,1Ч106 |
| 5* | 0 | Отр. |
| 6* | 0 | Отр. |
| 7* | 0 | Отр. |
| 8* | 0 | Отр. |
Примечание: * - номер контрольной группы животных
У зверей опытной и контрольной групп был проведен общий анализ крови (табл. 2)
Таблица 2 Результаты лабораторного исследования биоматериала от соболей
| № пробы | Эритроциты, Ч1012/л | Гемоглобин, г/л | Лейкоциты, Ч109/л |
|---|---|---|---|
| 1 | 12,1 | 165 | 12,4 |
| 2 | 10,3 | 161 | 12,8 |
| 3 | 11,3 | 163 | 13,5 |
| 4 | 11,2 | 169 | 14,8 |
| 5* | 9,0 | 164 | 5,4 |
| 6* | 9,2 | 162 | 5,0 |
| 7* | 9,4 | 170 | 6,0 |
| 8* | 9,1 | 158 | 5,8 |
Примечание: * - контрольная группа животных
В пробах крови определяли лейкоциты, эритроциты и гемоглобин. Из представленной таблицы 2 видно, что у больных животных отмечается лейкоцитоз.
При проведении патологоанатомического вскрытия животных опытной группы установлено, что заболевание парвовирусным энтеритом не вызывает патологических изменений в желудке, что является дифференцирующим признаком. В кишечнике отмечено истончение и катарально-геморрагическое воспаление стенок, резкое увеличение лимфоузлов, желчный пузырь переполнен желчью, селезенка увеличена, темно-красного цвета с точечными кровоизлияниями под капсулой.
При диагностике энтеритов важное значение имеет гистологическое исследование кишечника. Оно позволяет выделить дегенеративную и регенеративную стадию болезни. Дегенеративная стадия характеризуется десквамацией и некрозом покровного эпителия слизистой оболочки тонкого отдела кишечника, атрофией ворсинок (рисунок 1).
Рис. 1. Тонкий отдел кишечника соболя, больного энтеритом, окраска гаматоксилин-эозином (ок. х10 об. х10)
Крипты расширены, в просвете обнаруживаются увеличенные в 2-3 раза отдельные клетки покровного эпителия - баллонирующие клетки (характерный признак вирусного энтерита норок) (рисунок 2).
Рис. 2. Тонкий отдел кишечника соболя, больного энтеритом, окраска гаматоксилин-эозином (ок. х10 об. х40)
Выявлено разрыхление подслизистой оболочки тощей кишки, набухание эндотелия мелких сосудов. Ворсинки собственно слизистой оболочки укорочены, утолщены за счет инфильтрации лимфатическими клетками. В ободочной кишке собственно слизистая резко инфильтрирована лимфоплазмацитами, в апикальных частях ворсинок очаговый некробиоз эпителиальных клеток и их десквамация. Просвет крипт расширен, в них видна пролиферация и уплотнение эпителиальных клеток, которые отслаиваются и в свободном состоянии находятся в просвете.
Выводы:
1. Наиболее информативным при постановке диагноза на парвовирус у соболя является постановка РГА с эритроцитами свиньи и RT-PCR.
2. При проведении патологоанатомического исследования дифференцирующим признаком парвовирусного энтерита у соболей является отсутствие изменений в желудке.
3. При проведении гистологического исследования характерным признаком парвовирусного энтерита является выявление баллониру-ющих клеток в тонком отделе кишечника.
Список литературы:
Резюме. За многолетнюю практику разведения пушных зверей была отмечена высокая резистентность соболей к инфекционным заболеваниям при клеточном содержании. Но в последние годы в звероводческих хозяйствах все чаще стали появляться локальные эпизоотии у соболей, проявляющиеся энтеритами. При лабораторном исследовании патологического материала от больных животных и проведении ПЦР и РГА был установлен парвовирусный энтерит. Возбудителем этого заболевания является вирус, относящийся к семейству Parvoviridae, геном которого представлен одноцепочечной ДНК. Структура вириона делает все парвовирусы очень стабильными во внешней среде. Парвовирусы плотоядных проникают практически во все клетки организма, а репродуцируются только в наиболее митотически активных тканях, которыми и является постоянно репродуцирующийся эпителий кишечника. Для парвовирусов характерны, с одной стороны, высокая (до 98,5%) степень идентичности геномов и, с другой стороны, выраженная антигенная вариабельность и геномный полиморфизм. Это свидетельствует о возможности межвидовой передачи и поражения побочных (случайных) хозяев, которые могут служить резервуаром для рекомбинации и селекции штаммов с новыми антигенными свойствами и видовым тропизмом. С 2017 года сотрудниками Научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева проводятся мониторинговые исследования в различных зверохозяйствах Российской Федерации, где разводится соболь и из патологического материала от соболей, павших с клиническими признаками энтерита, методом ПЦР часто выделяется ДНК парвовируса. Так как совокупность полученных данных позволяет предположить опасность заболевания для уникального российского соболя парво-вирусным энтеритом, изучение морфофункциональных изменений у соболей является актуальной задачей.
Ключевые слова: соболь, парвовирус, энтерит, гистология, патологоанатомические изменения, баллонирующие клетки, РГА, ПЦР, гематологические исследования, диагностика, кишечник.
Сведения об авторах:
Петрова Ирина Владимировна, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник ФГБНУ «Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева»; 140143, Московская обл., Раменский район, пос. Родники, ул. Трудовая, 6; тел.: 8-495-7442642; e-mail: niipzk@mail.ru.
Жилина Ксения Владимировна, младший научный сотрудник ФГБНУ «Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева»; 140143, Московская обл., Раменский район, пос. Родники, ул. Трудовая, 6; тел.: 8-495-7442642; e-mail: niipzk@mail.ru.
Попов Дмитрий Владимирович, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник, заведующий отделом биотехнологии ФГБНУ «Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева»; 140143, Московская обл., Раменский район, пос. Родники, ул. Трудовая, 6; тел.: 8-495-7442642; e-mail: niipzk@mail.ru.
Ответственный за переписку с редакцией: Семикрасова Алла Николаевна, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник ФГБНУ «Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева»; 140143, Московская обл., Раменский район, пос. Родники, ул. Трудовая, 6; тел.: 8-495-7442642; e-mail: niipzk@mail.ru.
http://vetkuban.com/num6_202011.html