rus eng
Архив номеров / Номер 6, 2020 год Распечатать

Распространение и основные биологические свойства изолятов Pseudomonas Aeruginosa, выделенных в свиноводческих хозяйствах Краснодарского края

УДК 619:579.8411
DOI 10.33861/2071-8020-2020-6-17-22

Скориков А.В. Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего образования «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии», г. Краснодар

Введение. Одной из основных особенностей свиноводческих хозяйств региона является промышленная технология ведения отрасли. Концентрация поголовья на ограниченных площадях, интенсивная технологии содержания животных, накопление условно-патогенной микрофлоры, в том числе и синегнойной палочки во внешней среде, которая в условиях стрессового воздействия оказывает значительное патогенное влияние, особенно в ассоциации с другими микроорганизмами на организм поросят, молодняка свиней, а также свиноматок в послеродовом периоде [2, 5, 8]. Синегнойная инфекция кроме эпизоотологического, имеет и эпидемиологическое значение, Pseudomonas aeruginosa вызывает инфекционные осложнения в хирургических, ожоговых и урологических стационарах [6, 14]. У хряков-производителей вследствие инфицирования Pseudomonas aeruginosa происходит снижение активности спермиев и увеличение микробной загрязненности спермы, что приводит к воспалительным процессам половых органов свиноматок и рождению мертворожденных поросят [11]. В подсосный период выращивания, Pseudomonas aeruginosa вызывает остропротекающую инфекцию [4].

Изучение распространенности синегнойной палочки и изучение основных биологических свойств Pseudomonas aeruginosa продолжает оставаться актуальным, несмотря на то обстоятельство, что в 1862 г. A. Lucke описал раневую инфекцию и увязал наличие синегнойного пигмента с содержанием в ранах палочковидных бактерий и культура синегнойной палочки выделена C. Gessard еще в 1882 г, а в 1889 году A. Charrin обосновал патогенность синегнойной палочки для животных [15].

Бактерии Pseudomonas aeruginosa являются широко распространенными микроорганизмами, в качестве источника энергии используют органические природные соединения, в первую очередь углерод и кислород. Pseudomonas aeruginosa сохраняет свои жизнеспособные свойства при ограничении или отсутствии источников питания, а наличие значительного количества факторов вирулентности в огромной степени определяет её патогенные свойства для организма животных [10]. Значительная часть факторов вирулентности связана со специфическим строением клеточной стенки бактерии липополисахарид, пили и жгутики, «непилевые» адгезины, другая часть представлена внеклеточными продуктами жизнедеятельности данного микроорганизма (экзотоксин А, гемолизины, эластазы, пиоцианин, пиовердин), а также феномен уровня кворума (Quorum Sensing) [3,14].

Целью представленной работы является анализ распространения и изучение основных биологических свойств штаммов Pseudomonas aeruginosa, выделенных из диагностического материала в свиноводческих хозяйствах региона.

Материалы и методы исследования. Изучение и анализ эпизоотической ситуации по распространенности заболевания свиней псев-домонозом проводили на основании данных статистической ветеринарной отчетности Департамента ветеринарии Краснодарского края за период с 1990 по 2019 г. в соответствии с методическим указаниям И.А. Бакулова [1], С.Н. Дудникова [7]. Исследования диагностического материала проводили от свиней различных технологических групп, клинически больных, с признаками расстройства желудочнокишечного тракта и патологией репродуктивной системы. Бактериологические исследования проводились в соответствии Методическими рекомендациями по выделению и диагностике псевдомоноза сельскохозяйственных животных и птиц[9] , подвижность микроорганизмов определяли при помощи препаратов «висячая капля» и на ПЖА, ферментативно-биохимические свойства изучали на средах Гисса и с использованием систем индикации микроорганизмов (СИБ) АО НПО «Микроген» в г. Нижний Новгород «ИмБио», тест-систем NEFERM test (фирмы Erba Lachema, Чехия) и OXY test (Р1_1УД LACHEMA, Чехия, активность продуцирования синегнойной палочкой цитохромоксидазы определяли по методикам описанным в определителе бактерий [12]. Серотиповую принадлежность Pseudomonas aeruginosa в реакции агглютинации с типоспецифическими сыворотками ГИСК им Тарасевича и экспериментальной партии агглютинирующих сывороток изготовленных на ФГУП «Армавирская биофабрика». Статистическая обработка результатов проводилась с использованием пакета прикладных программ Microsoft Office Excel 2010.

Результаты исследований и их обсуждение. В нозологической структуре инфекционной патологии свиней за период с 1991 по 2019 год в регионе заболевание псевдомонозом составляло 9,9% и ежегодно регистрировалось в виде энзоотических вспышек. В период с 1991 по 2012 год заболело 28,0 тыс. голов, из которых пало 33,0% животных. Максимальное распространение заболевание отмечалось в 1999 году, зарегистрировано 42 неблагополучных пункта по псевдо-монозу, в которых заболело 2,1 тыс. голов, из них пало 0,5 тыс. животных, заболеваемость и смертность, соответственно, составили 140,1 и 32,5 на 100,0 тыс. голов. Наибольшая тяжесть протекания эпизоотического процесса отмечалась в 1995 году, когда в 19 неблагополучных пунктах заболело 4,8 тыс. голов и пало 1,6 тыс. голов, при этом заболеваемость и смертность составили 272,0 и 92,8 на 100,0 тыс. поголовья в крае. В дальнейшем отмечались спорадические случаи заболевания свиней, вызванного Pseudomonas aeruginosa [1].

В ходе проведения исследований по изучению этиологической роли P. aeruginosa в возникновении инфекционных заболеваний свиней было установлено, что данный возбудитель выделялся в 67% случаев. Всего выделен 571 изолят P. aeruginosa, в том числе из спермы хряков-производителей, из кормов, из абортированных плодов, из смывов из влагалища свиноматок, находившихся в послеродовом периоде, а также из патологического и диагностического материала от павших и клинически больных поросят (табл. 1).

Таблица 1 Количество изолятов P.aeruginosa выделенных в свиноводческих хозяйствах

№ п/п

Объекты выделений

Количество культур

%

1.

Сперма хряков- производителей

15

2,6

2.

Корма

10

1,8

3.

Абортплоды

6

1,1

4.

Смывы из влагалища свиноматок

6

1,1

5.

Патологический материал

534

93,5

Итого

571

100

В виде монокультуры P. aeruginosa выделена в 84 случаях (14,7%), в ассоциации с другими микроорганизмами - в 487 случаях (85,2%). Наибольший удельный вес выделенной синегнойной палочки отмечался в ассоциации с E. coli (47,8%), E. faecalis (21,4%), E. facium (8,8%), Proteus spp. (5,7%), K. pneumoniae (5,5%), S. bovis (4,9%), от 0,2 до 2,5% с S. choleraesuis, S. agalactiae, S. suis, S. pneumonia, S. aureus (табл. 2).

Таблица 2 Видовой состав бактерий выделенных из диагностического и патологического материала от свиней в ассоциации с P. aeruginosa (n=487)

№ п/п

Вид бактерий

Количество изолятов

Абсолютное

в %

1.

Escherichia coli

233

47,8

2.

Klebsiella pneumoniae

27

5,5

3.

Streptococcus bovis

24

4,9

4.

Streptococcus pneumoniae

12

2,5

5.

Streptococcus suis

6

1,2

6.

Streptococcus agalactiae

5

1,0

7.

Escherichia faeclis

104

21,4

8.

Escherichia facium

43

8,8

9.

Staphylococcus aureus

7

1,4

10.

Proteus spp.

25

5,7

11.

Salmonella choleraesuis

1

0,2

При изучении морфологических свойств колоний P. aeruginosa отмечено, что плоские неправильной S-формы высевали в 50-73% случаев, округлой гладкой R-формы - в 35% случаев, складчатые колонии - в 17% случаев, карликовых и мукоидных форм выделено не было.

При изучении культуральных, тинкториальных, биохимических свойств P. aeruginosa выделенных 571 изолятов установили, что все изучаемые изоляты синегнойной палочки 100% подвижностью и окрашивались по Грамму отрицательно, обладали термофильными свойствами, 571 изолят давал рост при 42°С с образованием бактерий, при t 4°С рост синегнойной палочки отсутствовал как через 24, так и 48 часов (табл. 3). На селективной питательной среде с W-це-тилперидинием хлорида колонии изолятов в 79,9% случаев росли с образованием водорастворимого пигмента пиоцианина фенотази-нового ряда, при росте на МПБ проба с хлороформам была в 100% случаев положительной, аналогичные результаты были получены при росте колоний на среде Симмонса. У изолятов синегнойной палочки, выращиваемых на МПА, отмечалось окрашивание среды пиоциани-ном (рисунок 1), на МПА с 5% дефибринированной кровью барана в 80-83% случаев отмечался гемолиз.

Таблица 3 Морфологические, тинкториальные и культуральные свойства изолятов P. aeruginosa, выделенные из биоматериала и кормов в свиноводческих хозяйствах

№ п/п

Изучаемые показатели и тесты

Патологический материал n=534, %

Абортплоды n=6, %

Смывы из влагалища n=6, %

Сперма хряков n = 15,%

Корма n = 10, %

1.

Подвижность в висячей капле

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

2.

Окраска по Граму

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

3.

Рост при t 42°С

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

4.

Рост при t 4°С

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

5.

Рост в МПБ через 24 ч, пленка

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

6.

Рост в МПБ через 48 ч, пленка

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

7.

Рост на селективной среде (ЦПХ), С N-цетилперидинием хлорида

427

79,4

5

80

5

80

12

80

8

80

8.

Рост на агаре Симмонса

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

9.

Гемолиз на МПА с 5% дефибринированной крови

443

83

5

81

5

82

12

80

8

80

10.

Редукция глюкозы через

48 ч:

в анаэробных условиях в аэробных условиях

 

0

534

 

0

100

 

0

6

 

0

100

 

0

6

 

0

100

 

0

15

 

0

100

 

0

10

 

0

100

11.

Каталаза

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

12.

Гидролиз желатина

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

13.

Хлороформ тест

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

14.

Наличие:

 

 

 

 

 

цитохромоксидаза

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

аргининдигидролаза

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

орнитин-декарбоксилаза

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

лизин-декарбоксилаза

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

15.

Продуцирование пигментов:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

пиоцианина:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

через 24 ч

243

45,5

2

40,0

2

40,0

8

51,0

4

40,0

через 48 ч

339

63,4

3

50,0

3

50,0

9

60,0

5

50,0

флюоресцина:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

через 24 ч

37

7,0

1

16,0

1

15,0

3

20,0

2

20,0

через 48 ч

104

19,5

2

34,0

2

34,0

4

27,0

3

30,0

пиоцианин и флюоресцин:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

через 24 ч

37

7,0

1

10,0

1

10,0

1

7,0

1

10,0

через 48 ч

65

12,1

1

16,0

1

16,0

2

14,0

1

10,0

пиорубина:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

через 24 ч

2

0,4

0

0

0

0

0

0

1

10,0

через 48 ч

10

1,8

0

0

0

0

0

0

1

10,0

Отсутствие пигментообразования

16

3,0

0

0

0

0

0

0

0

0

Рис. 1. Рост Pseudomonas aeruginosa на МПА

Рис. 2. Рост Pseudomonas aeruginosa на МПБ

Усвоение глюкозы через 48 часов культивирования изолятов P. aeruginosa отмечалась в 100% случаев, 100% колоний из изолятов обладали с водой каталазной активностью и осуществляли 100% гидролиз желатина. Все выделенные изоляты давали положительный тест на цитохромоксидазу, в то же время тесты на орнитин и лизин декарбоксилазу были отрицательные, продуцирования изолятами вышеперечисленных ферментов не установлено. При культивировании изоля-тов в МПБ (рисунок 2) через 24 часа пиоцианин продуцировал 45,5% изолятов, полученных из патологического материала, и 63,4% после 48-часового культивирования; у изолятов, полученных из абортплодов эти показатели были, соответственно, в 40 и 50% случаев, из смывов влагалища - 40 и 50%, из спермы хряков - 51 и 60%, из кормов - 40 и 50%. Пигментообразование флюоресцина через 24 ч культивирования находилась в пределах 7-20%, через 48 ч - от 19,5 до 34,0%, пиоцианина в сочетании с флюоресцином соответствовало - 7-10% через 24 ч культивирования и 10-16% после 48 ч культивирования, пигмент пиорубин - 0,4-10% изолятов (рисунок 3, 4, 5).

Таблица 4 Биохимические свойства изолятов P.aeruginosa, выделенных из биоматериала и кормов

№ п/п

Наиме­нование теста

Патологи­ческий материал n=534, %

Аборт- плоды n=6, %

Смывы из влагалища свино­маток n=6, %

Сперма хряков n=15, %

Корма n=10, %

1.

Глюкоза

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

2.

Лактоза

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

3.

Сахароза

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

4.

Манит

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

5.

Арабиноза

272

51

0

0

0

0

0

0

4

40

6.

Фруктоза

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

7.

Инозит

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

8.

Фосфатаза

270

51

0

0

0

0

0

0

6

60

9.

Ксилоза

514

96

5

83

5

83

13

87

9

90

10.

Целло­-биоза

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

11.

Галактоза

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

12.

Эскулин

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

13.

Трегилоза

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

14.

Индол

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

15.

Серо­водород

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

16.

Мальтоза

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

17.

Мочевина

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

18.

Пептонизация молока

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

19.

Желатин

534

100

6

100

6

100

15

100

10

100

Биохимическая активность изолятов P. aeruginosa показала, что изучаемые изоляты синегнойной палочки обладают низко выраженными биохимическими свойствами. Изоляты ассимилировали глюкозу и арабинозу, галактозу до образования кислоты, разлагали мочевину, обладали протеолитическими свойствами, разжижали желатин и пептонизировали молоко в течение 72 ч, 51% изолятов, выделенных из патологического материала, и 60% из кормов проявляли фосфатоз-ную активность, не образовывали индол и H2S (табл. 4).

Рис. 3. Рост Pseudomonas aeruginosa на среде ЭНДО

Рис. 4. Окрашивание среды пиацианином в сине-зеленый цвет

Рис. 5. Окрашивание среды пиомеланином в черный и красный цвет

Серогрупповую принадлежность отобранных 59 изолятов P. aeruginosa, выделенных из диагностического, патологического материала от свиней и кормов, провели с использованием экспериментальной партии агглютинирующих сывороток, изготовленных ФГУП «Армавирская биофабрика», включающие в наборе 4 поливалентные сыворотки: I (1, 9, 10, 17, 19), II (2, 5, 16, 18, 20), III (3, 12, 13, 14, 15), IV (4, 6, 7, 8, 11) и групповые: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20.

Для серологической типизации были отобраны 59 изолятов P. aeruginosa, выделенных из патологического материала, спермы хряков, смывов из влагалища и кормов, имевших характерный для S-форм колоний рост, округлой выпуклой формы, с неровной поверхностью и неровными краями. К положительному результату РА относили агглютинацию интенсивностью в 3 и 4 креста, сомнительному - 1-2, к отрицательному - отсутствие агглютинации.

Результаты серотипирования показали, что из 59 изолятов агглютинировало с одной сывороткой 36 изолятов (61,0%), одновременно с двумя сыворотками 12 (20,3%), одновременно с тремя сыворотками 4 (6,7%), самоагглютинировано 7 (11,9%). Культуры P. aeruginosa, выделенные из патологического материала от свиней, нами были отнесены к серологическим типам: 01, 03, 04, 05, 06, 09, 010, 011, 013, 014, 016, 018, 019, 020; из спермы - к 08, 09; из абортплодов - к 019, из смывов влагалища - к 03; из кормов - к 03, 013, 014, 016.

Исследования по определению токсигенных свойств экзотоксина А, провели на 25 изолятах P. aeruginosa, отобранных по культурально-морфологическим свойствам, выделенных из патологического материала, абортплодов, смывов из влагалища свиноматок в послеродовом периоде, спермы хряков-производителей, кормов. Учет результатов проводился через 12, 24 и 48 ч после введения фильтрата надосадочной жидкости 4-суточных культур синегнойной палочки, выращенных в бульоне Хоттингера, и вводимых внутрибрюшинно в дозах 0,5 мл и 0,2 мл подкожно белым беспородным мышам живой массой 18-20 г.

При подкожном заражении через 12 ч пало 14,0% лабораторных животных, через 24 ч гибель белых мышей составила 64,0%, через 48 ч пало 14,0%. При внутрибрюшинном заражении гибель лабораторных животных, через 12, 24 и 48 ч составила, соответственно, 12,0%, 74,0% и 8,0%. Всего за 48 ч наблюдений за зараженными лабораторными животными было установлено, что от 92,0 до 94,0% исследуемых культур продуцируют экзотоксин А (табл. 5).

Таблица 5 Результаты определения токсигенности изолятов синегнойной палочки

№ п/п

Место введения

Количество павших белых мышей, гол (%)

Количество живых белых мышей, гол (%)

через 12 ч

через 24 ч

через 48 ч

через 48 ч.

1.

Подкожное введение, n=50

7(14%)

32(64%)

7(14%)

4(8%)

2.

Внутрибрюшинное введение, n=50

6(12%)

37(74%)

4(8%)

3(6%)

Изучение токсигенных свойств изолятов P. aeruginosa в зависимости от объектов выделения показало, что при подкожном заражении белых мышей (табл. 6) наименьшую токсичность показали изоляты, выделенные из кормов, через 12 ч после введения фильтрата надосадочной жидкости гибели лабораторных животных не отмечалось, и только через 24 и 48 ч после заражения пало, соответственно, 6% и 29%. Наиболее высокую токсичность проявили штаммы, выделенные из патологического материала от свиней, которые вызывали гибель 44% белых мышей через 12 ч и 59% через 24 ч после заражения, изоляты, выделенные из спермы хряков-производителей, вызывали гибель 28% лабораторных животных через 12 ч и 13% через 24 и 48 ч после заражения, что свидетельствует о высокой токсичности данных изолятов. К среднетоксичным относятся изоляты синегнойной палочки, выделенные из абортплодов и смывов из влагалища свиноматок в послеродовой период, они вызывают гибель от 14 до 29% лабораторных животных через 12-48 ч после заражения.

Таблица 6 Результаты определения токсигенности изолятов синегнойной палочки выделенных из диагностического и патологического материала в свиноводческих хозяйствах, (n=25)

№ п/п

Предмет выде­ления

Количество павших белых мышей в зависимости от способа заражения

подкожное

внутрибрюшинное

12 часов

24 часа

48 часов

12 часов

24 часа

48 часов

n

%

n

%

n

%

n

%

n

%

n

%

1.

Патоло­гический материла

3

44

19

59

0

0

3

50

21

58

0

0

2.

Аборт-плоды

1

14

4

13

2

29

1

17

4

11

0

0

3.

Смывы из влага­лища свино­маток

1

14

3

9

2

29

0

0

4

11

0

0

4.

Сперма хряков- произво­дителей

2

28

4

13

1

13

2

33

6

15

1

25

5.

Корма

0

0

2

6

2

29

0

0

2

5

3

75

Итого (n=93)

7

100

32

100

7

100

6

100

37

100

4

100

Из данных таблицы 6 при внутрибрюшинном заражении наибольшую токсигенность через 12 ч после введения фильтрата синегнойной палочки, выделенные из патологического материала 50% и спермы хряков-производителей, среднюю токсигенность проявили штаммы синегнойной палочки выделенные из абортплодов 17% и 11% пало лабораторных животных через 12 и 24 ч после внутрибрюшинного заражения и слаботоксигенные штаммы, вызывавшие гибель 5% лабораторных животных через 48 часов после заражения, нами были выделены из кормов.

Протеолитическая активность изолятов P. aeruginosa, выделенных и отобранных для исследований из патологического материала от павших поросят и молодняка свиней, абортплодов, спермы хряков-производителей, смывов из влагалища свиноматок в послеродовом периоде и кормов, была различна (табл. 7). При изучении протеолитических свойств 571 изолята P. aeruginosa, выделенных из патологического и диагностического материала от животных и кормов, было установлено, что плазмокоагулирующими свойствами обладали 444 (77,8%) изолята, из них у 273 (47,9%) изолятов отмечалась положительная реакция, в то же время 127 (22,2%) изолятов плазмокоакулирующими свойствами не обладали. Лицетиназной и фибринолизгеновой активностью изучаемые изоляты P. aeruginosa не обладали.

Таблица 7 Протеолитическая активность изолятов синегнойной палочки выделенные из патологического и диагностического материала в свиноводческих хозяйствах (n=571)

№ п/п

Патологическая активность

Результаты определения

Количество положительных

Количество отрицательных

n

%

n

%

1.

Плазмокоагуляционная через 30 мин

0

0

571

0

через 1 ч

0

0

571

0

через 2 ч

0

0

571

0

через 4 ч

273

47,9

298

52,1

через 24 ч

444

77,8

127

22,2

2.

Лецитиназная

0

0

350

0

3.

Фибринолизгеновая

0

0

350

0

Изоляты синегнойной палочки, выделенные из спермы хряков-производителей, проявляли наибольшую плазмокоагулирующую активность 60% через 4 ч и 100% через 24 ч с начала учета реакции штаммы, выделенные из патологического материала, абортплодов и смывов из влагалища свиноматок, активность плазмокоагуляции проявили на уровне 80%, изоляты, полученные из кормов, - на уровне 60% (табл. 8).

Таблица 8 Плазмокоагулирующая активность изолятов синегнойной палочки выделенных из патологического и диагностического материала (n=25)

№ п/п

Материал выделенных изолятов

Результаты учета плазмокоагулирующей активности, через

30 минут

1 час

2 часа

4 часа

24 часа

n

%

n

%

n

%

n

%

n

%

1.

Патологический материал

0

0

0

0

0

0

3

60

4

80

2.

Абортплоды

0

0

0

0

0

0

2

40

4

80

3.

Смывы из влагалища свиноматок

0

0

0

0

0

0

3

60

4

80

4.

Сперма хряков- производителей

0

0

0

0

0

0

3

60

5

100

5.

Корма

0

0

0

0

0

0

2

40

3

40

Оценка слизеобразования колоний синегнойной палочки на МПА и агаре Хоттингера показала, что после 24 ч культивирования наиболее интенсивное образование слизи проявилось у изолятов синегнойной палочки культивируемых на агаре Хоттингера (85,5%), на МПА образование слизи отмечено у 75% колоний или на 10,1% меньше (табл. 9).

Таблица 9 Слизеобразующая способность изолятов синегнойной палочки, n=571

№ п/п

Наименование среды

Результаты изучения

n

%

n

%

1.

Агар Хоттингера

488

85.5

83

14,5

2.

Мясопептонный агар

431

75,4

140

26,4

Адгезивная активность изолятов P. aerugunosa, выделенных из кормов, диагностического и патологического материала от свиней, в реакции гемагглютинации представлена в таблице 10.

Таблица 10 Определение адгезивных свойств изолятов P. aeruginosa, n=571

№ п/ п

Время учета актив­ности фимбий

Результаты изучения

+

++

+++

Итого

положит.

отрицат.

n

%

n

%

n

%

n

%

n

%

1.

1/ 40С

103

18,0

71

12,5

315

55,2

489

85,6

82

14,4

2.

1 200С

159

27,8

56

9,8

279

480

489

85,6

82

14,4

3.

2/ 40С

65

11,4

126

22,1

364

63,8

555

47,1

16

2,9

4.

2/ 200С

96

16,9

134

23,5

325

56,9

555

97,1

16

2,9

5.

5/ 40С

0

0

0

0

571

100

571

100

0

0

6.

5/ 200С

0

0

9

1,5

562

98,4

562

100

0

0

Учет специфических адгезивных свойств пилей, называемых Cup-фимбриями (от англ. Chaperone-usher pathway), к эритроцитам кролика через 1, 2, 5 мин при температуре 4 и 20°С показал, что гемагглю-тинационная активность фимбрий проявилась через 1 минуту у 85,6% изолятов синегнойной палочки, через 2 мин у 97,1% изолятов и через 5 мин 100% изолятов проявили адгезивную активность.

Выводы.

  1. В нозологической структуре инфекционной патологии свиней за период с 1991 по 2019 год в регионе заболевания свиней, вызываемые Pseudomonas aeruginosa, регистрировались на уровне 9,9% в виде энзоотических вспышек.
  2. В виде монокультуры P. aeruginosa выделялась в 14,7% случаев, в ассоциации с другими микроорганизмами выделена в 85,2%. Наибольший удельный вес выделенния синегнойной палочки отмечался в ассоциации с E. coli (47,8%), E. faecalis (21,4%), E. facium (8,8%).
  3. Изоляты синегнойной палочки обладали 100% подвижностью, окрашивались по Грамму отрицательно, обладали термофильными свойствами.
  4. На селективной питательной среде с W-цетилперидинием хлорида колонии P. aeruginosa в 79,9% случаев образовали водорастворимый пигмент фенотазинового ряда, пиоцианин. Обладали каталазной активностью и осуществляли 100% гидролиз желатина, давали положительный тест на цитохромоксидазу и отрицательные тесты на орнитин и лизиндекарбоксилазу, продуцировали пиорубин, ассимилировали глюкозу и арабинозу, галактозу до образования кислоты, различали мочевину, проявляли фосфатозную активность, не образовывали индол и H2S.
  5. Слизеобразование колоний синегнойной палочки наиболее интенсивно проявляется на агаре Хоттингера.
  6. Изоляты P. aeruginosa обладали плазмокоагулирующими и адгезивными свойствами, лицетиназную и фибринолизиновую активность не проявляли.

Список литературы:

  1. Бакулов И.А. Методические указания по эпизоотологическому исследованию. - М.: Колос, 1982. - 17 с.
  2. Болоцкий И.А. Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза сельскохозяйственных животных. - М., 2003. - 31 с.
  3. Бондаренко В.М. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры/ В.М. Бондаренко, В.Г. Петровская// Вестник РАМН. - 1997. - № 3. - С. 7-10.
  4. Васильев А.К. Распространение псевдомоноза свиней в Краснодарском крае и воспроизведение заболевания на поросятах. - Ставрополь, 2003. - С. 154-155.
  5. Гаффаров X.3. Инфекционные болезни свиней и современные средства борьбы с ними/ X.3. Гаффаров, Е.А. Романов// М.: «Аквариум», 2004. - 200 с.
  6. Гельфанд Б.Р. Этиологическая и нозологическая структура госпитальных инфекций в отделении реанимации хирургического профиля/ Б.Р. Гельфанд, Б.З. Белоцерковский, Т.В. Попов// Инфекции в хирургии. - 2003. - Т. 1. - № 4. - С. 2-10.
  7. Дудников С.А. Количественная эпизоотология: Основы прикладной эпидемиологии и биостатистики. - Владимир, 2004. - 460 с.
  8. Инфекционные болезни свиней: учеб. пособие. - Ростов н/Д: Феникс, 2007. - 195 с.
  9. Методические рекомендации по выделению и диагностике псевдомоно-за сельскохозяйственных животных и птиц/ ГУВ МСХ СССР № 432-3 от 14.11. 1988 г.
  10. Новгородова А.Ю. Экологические аспекты бактерий рода Рseudomonas на территории Украины. - 2014. - С. 248-251.
  11. Ралка И.П. Роль условно-патогенной микрофлоры в патологии размножения свиней. - Вестник ветеринарии. - 1998. - № 9(3). - С.27-29.
  12. Сидоров М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов: справочник/ М.А. Сидоров, Д.И. Скородумов, В.Б. Федотов. - М.: Колос, 1995. - 319 с.
  13. Скориков А.В. Нозологический профиль инфекционных заболеваний свиней в Краснодарском крае/ А.В. Скориков, П.Н. Смирнов, Е.Н. Новикова// Инновации и продовольственная безопасность. - 2020. - № 2(28). - С. 64-69.
  14. Bitsori M., Maraki S., Koukouraki S., Galanakis E. Pseudomonas aeruginosa urinary tract infection in children: risk factors and outcomes. - J. Urol. - 2012 (187(1). - P. 260-264.
  15. Pitt T. L., Duerden B.I. Pseudomonas, Burkholderia, and related genera. In Microbiology and microbial infections. Oxford University Press Inc., New York, 1998. V. 2. P. 1109-1138.

Резюме. Бактерии рода Pseudomonas aeruginosa являются широко распространенными микроорганизмами на свиноводческих предприятиях региона, и из-за факторов вирулентности и патогенных свойств, в этиологическом аспекте представляет значительную угрозу для организма различных половозрастных групп свиней. В виде монокультуры P. aeruginosa выделена в 14,7% случаев, в ассоциации с другими микроорганизмами P. aeruginosa в 85,2% и наибольший удельный вес синегнойной палочки проявился в ассоциации с E.coli 47,8%, E. faecalis 21,4%, E. facium 8,8%, микроорганизмами, вызывающими у поросят в подсосный и отъемный периоды клинику желудочно-кишечных заболеваний. Особенностью эпизоотического проявления псевдомоноза свиней в условия промышленного свиноводства, являются энзоотические вспышки. На селективных питательных средах у колоний изолятов в 79,9 % случаев рост сопровождается образованием водорастворимого пигмента фенотазинового ряда пиоци-анина, на МПА с 5% дефибринированной кровью в 80-83% случаев, колонии синегнойной палочки вызывают зоны гемолиза. Биохимическая активность культур P. aeruginosa показала, низко выраженные биохимические свойства, они ассимилировали глюкозу и арабинозу, галактозу до образования кислоты, разлагали мочевину, обладали протеолитическими свойствами, разжижали желатин и пептонизировали молоко в течение 72 часов, проявляли фосфатозную активность, не образовывали индол и H2S, культуры продуцирующие экзотоксин А, при внутрибрюшинном заражении лабораторных животных максимально проявляют токсигенные свойства. Изоляты синегнойной палочки проявляют плазмокоагулирующую и агезивную активность. Полученные результаты изучения основных биологических свойств изолятов P. aeruginosa, могут быть использованы, при проведении диагностических исследований и проведении противоэпизоотических мероприятий в регионе.

Ключевые слова: синегнойная палочка, изоляты, диагностические исследования, селективные среды, биологические, биохимические, адгезивные, протеолитические, токсигенные, свойства, ассоциации, пигменты, пиоцианин, псев-домоноз, лабораторные животные, свиньи, этиология, желудочно-кишечные заболевания, регион, свиноводческие хозяйства, эпизоотическое проявление, противоэпизоотические мероприятия.

Сведения об авторе: Скориков Александр Владимирович, кандидат биологических наук, заместитель директора по научной работе Краснодарского НИВИ - обособленного структурного подразделения ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я линия, 1; тел.: 8-861-2216220; e-mail: knivi@list.ru - ответственный за переписку с редакцией.

 

   
2011 © Ветеринария Кубани Разработка сайта - Интернет-Имидж