Распространение и основные биологические свойства изолятов Pseudomonas Aeruginosa, выделенных в свиноводческих хозяйствах Краснодарского края

УДК 619:579.8411
DOI 10.33861/2071-8020-2020-6-17-22

Скориков А.В. Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего образования «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии», г. Краснодар

Введение. Одной из основных особенностей свиноводческих хозяйств региона является промышленная технология ведения отрасли. Концентрация поголовья на ограниченных площадях, интенсивная технологии содержания животных, накопление условно-патогенной микрофлоры, в том числе и синегнойной палочки во внешней среде, которая в условиях стрессового воздействия оказывает значительное патогенное влияние, особенно в ассоциации с другими микроорганизмами на организм поросят, молодняка свиней, а также свиноматок в послеродовом периоде [2, 5, 8]. Синегнойная инфекция кроме эпизоотологического, имеет и эпидемиологическое значение, Pseudomonas aeruginosa вызывает инфекционные осложнения в хирургических, ожоговых и урологических стационарах [6, 14]. У хряков-производителей вследствие инфицирования Pseudomonas aeruginosa происходит снижение активности спермиев и увеличение микробной загрязненности спермы, что приводит к воспалительным процессам половых органов свиноматок и рождению мертворожденных поросят [11]. В подсосный период выращивания, Pseudomonas aeruginosa вызывает остропротекающую инфекцию [4].

Изучение распространенности синегнойной палочки и изучение основных биологических свойств Pseudomonas aeruginosa продолжает оставаться актуальным, несмотря на то обстоятельство, что в 1862 г. A. Lucke описал раневую инфекцию и увязал наличие синегнойного пигмента с содержанием в ранах палочковидных бактерий и культура синегнойной палочки выделена C. Gessard еще в 1882 г, а в 1889 году A. Charrin обосновал патогенность синегнойной палочки для животных [15].

Бактерии Pseudomonas aeruginosa являются широко распространенными микроорганизмами, в качестве источника энергии используют органические природные соединения, в первую очередь углерод и кислород. Pseudomonas aeruginosa сохраняет свои жизнеспособные свойства при ограничении или отсутствии источников питания, а наличие значительного количества факторов вирулентности в огромной степени определяет её патогенные свойства для организма животных [10]. Значительная часть факторов вирулентности связана со специфическим строением клеточной стенки бактерии липополисахарид, пили и жгутики, «непилевые» адгезины, другая часть представлена внеклеточными продуктами жизнедеятельности данного микроорганизма (экзотоксин А, гемолизины, эластазы, пиоцианин, пиовердин), а также феномен уровня кворума (Quorum Sensing) [3,14].

Целью представленной работы является анализ распространения и изучение основных биологических свойств штаммов Pseudomonas aeruginosa, выделенных из диагностического материала в свиноводческих хозяйствах региона.

Материалы и методы исследования. Изучение и анализ эпизоотической ситуации по распространенности заболевания свиней псев-домонозом проводили на основании данных статистической ветеринарной отчетности Департамента ветеринарии Краснодарского края за период с 1990 по 2019 г. в соответствии с методическим указаниям И.А. Бакулова [1], С.Н. Дудникова [7]. Исследования диагностического материала проводили от свиней различных технологических групп, клинически больных, с признаками расстройства желудочнокишечного тракта и патологией репродуктивной системы. Бактериологические исследования проводились в соответствии Методическими рекомендациями по выделению и диагностике псевдомоноза сельскохозяйственных животных и птиц[9] , подвижность микроорганизмов определяли при помощи препаратов «висячая капля» и на ПЖА, ферментативно-биохимические свойства изучали на средах Гисса и с использованием систем индикации микроорганизмов (СИБ) АО НПО «Микроген» в г. Нижний Новгород «ИмБио», тест-систем NEFERM test (фирмы Erba Lachema, Чехия) и OXY test (Р1_1УД LACHEMA, Чехия, активность продуцирования синегнойной палочкой цитохромоксидазы определяли по методикам описанным в определителе бактерий [12]. Серотиповую принадлежность Pseudomonas aeruginosa в реакции агглютинации с типоспецифическими сыворотками ГИСК им Тарасевича и экспериментальной партии агглютинирующих сывороток изготовленных на ФГУП «Армавирская биофабрика». Статистическая обработка результатов проводилась с использованием пакета прикладных программ Microsoft Office Excel 2010.

Результаты исследований и их обсуждение. В нозологической структуре инфекционной патологии свиней за период с 1991 по 2019 год в регионе заболевание псевдомонозом составляло 9,9% и ежегодно регистрировалось в виде энзоотических вспышек. В период с 1991 по 2012 год заболело 28,0 тыс. голов, из которых пало 33,0% животных. Максимальное распространение заболевание отмечалось в 1999 году, зарегистрировано 42 неблагополучных пункта по псевдо-монозу, в которых заболело 2,1 тыс. голов, из них пало 0,5 тыс. животных, заболеваемость и смертность, соответственно, составили 140,1 и 32,5 на 100,0 тыс. голов. Наибольшая тяжесть протекания эпизоотического процесса отмечалась в 1995 году, когда в 19 неблагополучных пунктах заболело 4,8 тыс. голов и пало 1,6 тыс. голов, при этом заболеваемость и смертность составили 272,0 и 92,8 на 100,0 тыс. поголовья в крае. В дальнейшем отмечались спорадические случаи заболевания свиней, вызванного Pseudomonas aeruginosa [1].

В ходе проведения исследований по изучению этиологической роли P. aeruginosa в возникновении инфекционных заболеваний свиней было установлено, что данный возбудитель выделялся в 67% случаев. Всего выделен 571 изолят P. aeruginosa, в том числе из спермы хряков-производителей, из кормов, из абортированных плодов, из смывов из влагалища свиноматок, находившихся в послеродовом периоде, а также из патологического и диагностического материала от павших и клинически больных поросят (табл. 1).

Таблица 1 Количество изолятов P.aeruginosa выделенных в свиноводческих хозяйствах

№ п/п	Объекты выделений	Количество культур	%
1.	Сперма хряков- производителей	15	2,6
2.	Корма	10	1,8
3.	Абортплоды	6	1,1
4.	Смывы из влагалища свиноматок	6	1,1
5.	Патологический материал	534	93,5
Итого		571	100

В виде монокультуры P. aeruginosa выделена в 84 случаях (14,7%), в ассоциации с другими микроорганизмами - в 487 случаях (85,2%). Наибольший удельный вес выделенной синегнойной палочки отмечался в ассоциации с E. coli (47,8%), E. faecalis (21,4%), E. facium (8,8%), Proteus spp. (5,7%), K. pneumoniae (5,5%), S. bovis (4,9%), от 0,2 до 2,5% с S. choleraesuis, S. agalactiae, S. suis, S. pneumonia, S. aureus (табл. 2).

Таблица 2 Видовой состав бактерий выделенных из диагностического и патологического материала от свиней в ассоциации с P. aeruginosa (n=487)

№ п/п	Вид бактерий	Количество изолятов
		Абсолютное	в %
1.	Escherichia coli	233	47,8
2.	Klebsiella pneumoniae	27	5,5
3.	Streptococcus bovis	24	4,9
4.	Streptococcus pneumoniae	12	2,5
5.	Streptococcus suis	6	1,2
6.	Streptococcus agalactiae	5	1,0
7.	Escherichia faeclis	104	21,4
8.	Escherichia facium	43	8,8
9.	Staphylococcus aureus	7	1,4
10.	Proteus spp.	25	5,7
11.	Salmonella choleraesuis	1	0,2

При изучении морфологических свойств колоний P. aeruginosa отмечено, что плоские неправильной S-формы высевали в 50-73% случаев, округлой гладкой R-формы - в 35% случаев, складчатые колонии - в 17% случаев, карликовых и мукоидных форм выделено не было.

При изучении культуральных, тинкториальных, биохимических свойств P. aeruginosa выделенных 571 изолятов установили, что все изучаемые изоляты синегнойной палочки 100% подвижностью и окрашивались по Грамму отрицательно, обладали термофильными свойствами, 571 изолят давал рост при 42°С с образованием бактерий, при t 4°С рост синегнойной палочки отсутствовал как через 24, так и 48 часов (табл. 3). На селективной питательной среде с W-це-тилперидинием хлорида колонии изолятов в 79,9% случаев росли с образованием водорастворимого пигмента пиоцианина фенотази-нового ряда, при росте на МПБ проба с хлороформам была в 100% случаев положительной, аналогичные результаты были получены при росте колоний на среде Симмонса. У изолятов синегнойной палочки, выращиваемых на МПА, отмечалось окрашивание среды пиоциани-ном (рисунок 1), на МПА с 5% дефибринированной кровью барана в 80-83% случаев отмечался гемолиз.

Таблица 3 Морфологические, тинкториальные и культуральные свойства изолятов P. aeruginosa, выделенные из биоматериала и кормов в свиноводческих хозяйствах

№ п/п	Изучаемые показатели и тесты	Патологический материал n=534, %		Абортплоды n=6, %		Смывы из влагалища n=6, %		Сперма хряков n = 15,%		Корма n = 10, %
1.	Подвижность в висячей капле	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
2.	Окраска по Граму	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
3.	Рост при t 42°С	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
4.	Рост при t 4°С	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
5.	Рост в МПБ через 24 ч, пленка	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
6.	Рост в МПБ через 48 ч, пленка	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
7.	Рост на селективной среде (ЦПХ), С N-цетилперидинием хлорида	427	79,4	5	80	5	80	12	80	8	80
8.	Рост на агаре Симмонса	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
9.	Гемолиз на МПА с 5% дефибринированной крови	443	83	5	81	5	82	12	80	8	80
10.	Редукция глюкозы через 48 ч: в анаэробных условиях в аэробных условиях	0 534	0 100	0 6	0 100	0 6	0 100	0 15	0 100	0 10	0 100
11.	Каталаза	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
12.	Гидролиз желатина	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
13.	Хлороформ тест	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
14.	Наличие:
	цитохромоксидаза	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
	аргининдигидролаза	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
	орнитин-декарбоксилаза	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
	лизин-декарбоксилаза	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
15.	Продуцирование пигментов:
	пиоцианина:
	через 24 ч	243	45,5	2	40,0	2	40,0	8	51,0	4	40,0
	через 48 ч	339	63,4	3	50,0	3	50,0	9	60,0	5	50,0
	флюоресцина:
	через 24 ч	37	7,0	1	16,0	1	15,0	3	20,0	2	20,0
	через 48 ч	104	19,5	2	34,0	2	34,0	4	27,0	3	30,0
	пиоцианин и флюоресцин:
	через 24 ч	37	7,0	1	10,0	1	10,0	1	7,0	1	10,0
	через 48 ч	65	12,1	1	16,0	1	16,0	2	14,0	1	10,0
	пиорубина:
	через 24 ч	2	0,4	0	0	0	0	0	0	1	10,0
	через 48 ч	10	1,8	0	0	0	0	0	0	1	10,0
	Отсутствие пигментообразования	16	3,0	0	0	0	0	0	0	0	0

Рис. 1. Рост Pseudomonas aeruginosa на МПА

Рис. 2. Рост Pseudomonas aeruginosa на МПБ

Усвоение глюкозы через 48 часов культивирования изолятов P. aeruginosa отмечалась в 100% случаев, 100% колоний из изолятов обладали с водой каталазной активностью и осуществляли 100% гидролиз желатина. Все выделенные изоляты давали положительный тест на цитохромоксидазу, в то же время тесты на орнитин и лизин декарбоксилазу были отрицательные, продуцирования изолятами вышеперечисленных ферментов не установлено. При культивировании изоля-тов в МПБ (рисунок 2) через 24 часа пиоцианин продуцировал 45,5% изолятов, полученных из патологического материала, и 63,4% после 48-часового культивирования; у изолятов, полученных из абортплодов эти показатели были, соответственно, в 40 и 50% случаев, из смывов влагалища - 40 и 50%, из спермы хряков - 51 и 60%, из кормов - 40 и 50%. Пигментообразование флюоресцина через 24 ч культивирования находилась в пределах 7-20%, через 48 ч - от 19,5 до 34,0%, пиоцианина в сочетании с флюоресцином соответствовало - 7-10% через 24 ч культивирования и 10-16% после 48 ч культивирования, пигмент пиорубин - 0,4-10% изолятов (рисунок 3, 4, 5).

Таблица 4 Биохимические свойства изолятов P.aeruginosa, выделенных из биоматериала и кормов

№ п/п	Наиме­нование теста	Патологи­ческий материал n=534, %		Аборт- плоды n=6, %		Смывы из влагалища свино­маток n=6, %		Сперма хряков n=15, %		Корма n=10, %
1.	Глюкоза	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
2.	Лактоза	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
3.	Сахароза	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
4.	Манит	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
5.	Арабиноза	272	51	0	0	0	0	0	0	4	40
6.	Фруктоза	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
7.	Инозит	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
8.	Фосфатаза	270	51	0	0	0	0	0	0	6	60
9.	Ксилоза	514	96	5	83	5	83	13	87	9	90
10.	Целло­-биоза	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
11.	Галактоза	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
12.	Эскулин	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
13.	Трегилоза	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
14.	Индол	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
15.	Серо­водород	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
16.	Мальтоза	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
17.	Мочевина	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
18.	Пептонизация молока	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100
19.	Желатин	534	100	6	100	6	100	15	100	10	100

Биохимическая активность изолятов P. aeruginosa показала, что изучаемые изоляты синегнойной палочки обладают низко выраженными биохимическими свойствами. Изоляты ассимилировали глюкозу и арабинозу, галактозу до образования кислоты, разлагали мочевину, обладали протеолитическими свойствами, разжижали желатин и пептонизировали молоко в течение 72 ч, 51% изолятов, выделенных из патологического материала, и 60% из кормов проявляли фосфатоз-ную активность, не образовывали индол и H2S (табл. 4).

Рис. 3. Рост Pseudomonas aeruginosa на среде ЭНДО

Рис. 4. Окрашивание среды пиацианином в сине-зеленый цвет

Рис. 5. Окрашивание среды пиомеланином в черный и красный цвет

Серогрупповую принадлежность отобранных 59 изолятов P. aeruginosa, выделенных из диагностического, патологического материала от свиней и кормов, провели с использованием экспериментальной партии агглютинирующих сывороток, изготовленных ФГУП «Армавирская биофабрика», включающие в наборе 4 поливалентные сыворотки: I (1, 9, 10, 17, 19), II (2, 5, 16, 18, 20), III (3, 12, 13, 14, 15), IV (4, 6, 7, 8, 11) и групповые: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20.

Для серологической типизации были отобраны 59 изолятов P. aeruginosa, выделенных из патологического материала, спермы хряков, смывов из влагалища и кормов, имевших характерный для S-форм колоний рост, округлой выпуклой формы, с неровной поверхностью и неровными краями. К положительному результату РА относили агглютинацию интенсивностью в 3 и 4 креста, сомнительному - 1-2, к отрицательному - отсутствие агглютинации.

Результаты серотипирования показали, что из 59 изолятов агглютинировало с одной сывороткой 36 изолятов (61,0%), одновременно с двумя сыворотками 12 (20,3%), одновременно с тремя сыворотками 4 (6,7%), самоагглютинировано 7 (11,9%). Культуры P. aeruginosa, выделенные из патологического материала от свиней, нами были отнесены к серологическим типам: 01, 03, 04, 05, 06, 09, 010, 011, 013, 014, 016, 018, 019, 020; из спермы - к 08, 09; из абортплодов - к 019, из смывов влагалища - к 03; из кормов - к 03, 013, 014, 016.

Исследования по определению токсигенных свойств экзотоксина А, провели на 25 изолятах P. aeruginosa, отобранных по культурально-морфологическим свойствам, выделенных из патологического материала, абортплодов, смывов из влагалища свиноматок в послеродовом периоде, спермы хряков-производителей, кормов. Учет результатов проводился через 12, 24 и 48 ч после введения фильтрата надосадочной жидкости 4-суточных культур синегнойной палочки, выращенных в бульоне Хоттингера, и вводимых внутрибрюшинно в дозах 0,5 мл и 0,2 мл подкожно белым беспородным мышам живой массой 18-20 г.

При подкожном заражении через 12 ч пало 14,0% лабораторных животных, через 24 ч гибель белых мышей составила 64,0%, через 48 ч пало 14,0%. При внутрибрюшинном заражении гибель лабораторных животных, через 12, 24 и 48 ч составила, соответственно, 12,0%, 74,0% и 8,0%. Всего за 48 ч наблюдений за зараженными лабораторными животными было установлено, что от 92,0 до 94,0% исследуемых культур продуцируют экзотоксин А (табл. 5).

Таблица 5 Результаты определения токсигенности изолятов синегнойной палочки

№ п/п	Место введения	Количество павших белых мышей, гол (%)			Количество живых белых мышей, гол (%)
		через 12 ч	через 24 ч	через 48 ч	через 48 ч.
1.	Подкожное введение, n=50	7(14%)	32(64%)	7(14%)	4(8%)
2.	Внутрибрюшинное введение, n=50	6(12%)	37(74%)	4(8%)	3(6%)

Изучение токсигенных свойств изолятов P. aeruginosa в зависимости от объектов выделения показало, что при подкожном заражении белых мышей (табл. 6) наименьшую токсичность показали изоляты, выделенные из кормов, через 12 ч после введения фильтрата надосадочной жидкости гибели лабораторных животных не отмечалось, и только через 24 и 48 ч после заражения пало, соответственно, 6% и 29%. Наиболее высокую токсичность проявили штаммы, выделенные из патологического материала от свиней, которые вызывали гибель 44% белых мышей через 12 ч и 59% через 24 ч после заражения, изоляты, выделенные из спермы хряков-производителей, вызывали гибель 28% лабораторных животных через 12 ч и 13% через 24 и 48 ч после заражения, что свидетельствует о высокой токсичности данных изолятов. К среднетоксичным относятся изоляты синегнойной палочки, выделенные из абортплодов и смывов из влагалища свиноматок в послеродовой период, они вызывают гибель от 14 до 29% лабораторных животных через 12-48 ч после заражения.

Таблица 6 Результаты определения токсигенности изолятов синегнойной палочки выделенных из диагностического и патологического материала в свиноводческих хозяйствах, (n=25)

№ п/п	Предмет выде­ления	Количество павших белых мышей в зависимости от способа заражения
		подкожное						внутрибрюшинное
		12 часов		24 часа		48 часов		12 часов		24 часа		48 часов
		n	%	n	%	n	%	n	%	n	%	n	%
1.	Патоло­гический материла	3	44	19	59	0	0	3	50	21	58	0	0
2.	Аборт-плоды	1	14	4	13	2	29	1	17	4	11	0	0
3.	Смывы из влага­лища свино­маток	1	14	3	9	2	29	0	0	4	11	0	0
4.	Сперма хряков- произво­дителей	2	28	4	13	1	13	2	33	6	15	1	25
5.	Корма	0	0	2	6	2	29	0	0	2	5	3	75
Итого (n=93)		7	100	32	100	7	100	6	100	37	100	4	100

Из данных таблицы 6 при внутрибрюшинном заражении наибольшую токсигенность через 12 ч после введения фильтрата синегнойной палочки, выделенные из патологического материала 50% и спермы хряков-производителей, среднюю токсигенность проявили штаммы синегнойной палочки выделенные из абортплодов 17% и 11% пало лабораторных животных через 12 и 24 ч после внутрибрюшинного заражения и слаботоксигенные штаммы, вызывавшие гибель 5% лабораторных животных через 48 часов после заражения, нами были выделены из кормов.

Протеолитическая активность изолятов P. aeruginosa, выделенных и отобранных для исследований из патологического материала от павших поросят и молодняка свиней, абортплодов, спермы хряков-производителей, смывов из влагалища свиноматок в послеродовом периоде и кормов, была различна (табл. 7). При изучении протеолитических свойств 571 изолята P. aeruginosa, выделенных из патологического и диагностического материала от животных и кормов, было установлено, что плазмокоагулирующими свойствами обладали 444 (77,8%) изолята, из них у 273 (47,9%) изолятов отмечалась положительная реакция, в то же время 127 (22,2%) изолятов плазмокоакулирующими свойствами не обладали. Лицетиназной и фибринолизгеновой активностью изучаемые изоляты P. aeruginosa не обладали.

Таблица 7 Протеолитическая активность изолятов синегнойной палочки выделенные из патологического и диагностического материала в свиноводческих хозяйствах (n=571)

№ п/п	Патологическая активность	Результаты определения
		Количество положительных		Количество отрицательных
		n	%	n	%
1.	Плазмокоагуляционная через 30 мин	0	0	571	0
	через 1 ч	0	0	571	0
	через 2 ч	0	0	571	0
	через 4 ч	273	47,9	298	52,1
	через 24 ч	444	77,8	127	22,2
2.	Лецитиназная	0	0	350	0
3.	Фибринолизгеновая	0	0	350	0

Изоляты синегнойной палочки, выделенные из спермы хряков-производителей, проявляли наибольшую плазмокоагулирующую активность 60% через 4 ч и 100% через 24 ч с начала учета реакции штаммы, выделенные из патологического материала, абортплодов и смывов из влагалища свиноматок, активность плазмокоагуляции проявили на уровне 80%, изоляты, полученные из кормов, - на уровне 60% (табл. 8).

Таблица 8 Плазмокоагулирующая активность изолятов синегнойной палочки выделенных из патологического и диагностического материала (n=25)

№ п/п	Материал выделенных изолятов	Результаты учета плазмокоагулирующей активности, через
		30 минут		1 час		2 часа		4 часа		24 часа
		n	%	n	%	n	%	n	%	n	%
1.	Патологический материал	0	0	0	0	0	0	3	60	4	80
2.	Абортплоды	0	0	0	0	0	0	2	40	4	80
3.	Смывы из влагалища свиноматок	0	0	0	0	0	0	3	60	4	80
4.	Сперма хряков- производителей	0	0	0	0	0	0	3	60	5	100
5.	Корма	0	0	0	0	0	0	2	40	3	40

Оценка слизеобразования колоний синегнойной палочки на МПА и агаре Хоттингера показала, что после 24 ч культивирования наиболее интенсивное образование слизи проявилось у изолятов синегнойной палочки культивируемых на агаре Хоттингера (85,5%), на МПА образование слизи отмечено у 75% колоний или на 10,1% меньше (табл. 9).

Таблица 9 Слизеобразующая способность изолятов синегнойной палочки, n=571

№ п/п	Наименование среды	Результаты изучения
		n	%	n	%
1.	Агар Хоттингера	488	85.5	83	14,5
2.	Мясопептонный агар	431	75,4	140	26,4

Адгезивная активность изолятов P. aerugunosa, выделенных из кормов, диагностического и патологического материала от свиней, в реакции гемагглютинации представлена в таблице 10.

Таблица 10 Определение адгезивных свойств изолятов P. aeruginosa, n=571

№ п/ п	Время учета актив­ности фимбий	Результаты изучения
		+		++		+++		Итого
								положит.		отрицат.
		n	%	n	%	n	%	n	%	n	%
1.	1/ 40С	103	18,0	71	12,5	315	55,2	489	85,6	82	14,4
2.	1 200С	159	27,8	56	9,8	279	480	489	85,6	82	14,4
3.	2/ 40С	65	11,4	126	22,1	364	63,8	555	47,1	16	2,9
4.	2/ 200С	96	16,9	134	23,5	325	56,9	555	97,1	16	2,9
5.	5/ 40С	0	0	0	0	571	100	571	100	0	0
6.	5/ 200С	0	0	9	1,5	562	98,4	562	100	0	0

Учет специфических адгезивных свойств пилей, называемых Cup-фимбриями (от англ. Chaperone-usher pathway), к эритроцитам кролика через 1, 2, 5 мин при температуре 4 и 20°С показал, что гемагглю-тинационная активность фимбрий проявилась через 1 минуту у 85,6% изолятов синегнойной палочки, через 2 мин у 97,1% изолятов и через 5 мин 100% изолятов проявили адгезивную активность.

Выводы.

1. В нозологической структуре инфекционной патологии свиней за период с 1991 по 2019 год в регионе заболевания свиней, вызываемые Pseudomonas aeruginosa, регистрировались на уровне 9,9% в виде энзоотических вспышек.
2. В виде монокультуры P. aeruginosa выделялась в 14,7% случаев, в ассоциации с другими микроорганизмами выделена в 85,2%. Наибольший удельный вес выделенния синегнойной палочки отмечался в ассоциации с E. coli (47,8%), E. faecalis (21,4%), E. facium (8,8%).
3. Изоляты синегнойной палочки обладали 100% подвижностью, окрашивались по Грамму отрицательно, обладали термофильными свойствами.
4. На селективной питательной среде с W-цетилперидинием хлорида колонии P. aeruginosa в 79,9% случаев образовали водорастворимый пигмент фенотазинового ряда, пиоцианин. Обладали каталазной активностью и осуществляли 100% гидролиз желатина, давали положительный тест на цитохромоксидазу и отрицательные тесты на орнитин и лизиндекарбоксилазу, продуцировали пиорубин, ассимилировали глюкозу и арабинозу, галактозу до образования кислоты, различали мочевину, проявляли фосфатозную активность, не образовывали индол и H2S.
5. Слизеобразование колоний синегнойной палочки наиболее интенсивно проявляется на агаре Хоттингера.
6. Изоляты P. aeruginosa обладали плазмокоагулирующими и адгезивными свойствами, лицетиназную и фибринолизиновую активность не проявляли.

Список литературы:

1. Бакулов И.А. Методические указания по эпизоотологическому исследованию. - М.: Колос, 1982. - 17 с.
2. Болоцкий И.А. Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза сельскохозяйственных животных. - М., 2003. - 31 с.
3. Бондаренко В.М. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры/ В.М. Бондаренко, В.Г. Петровская// Вестник РАМН. - 1997. - № 3. - С. 7-10.
4. Васильев А.К. Распространение псевдомоноза свиней в Краснодарском крае и воспроизведение заболевания на поросятах. - Ставрополь, 2003. - С. 154-155.
5. Гаффаров X.3. Инфекционные болезни свиней и современные средства борьбы с ними/ X.3. Гаффаров, Е.А. Романов// М.: «Аквариум», 2004. - 200 с.
6. Гельфанд Б.Р. Этиологическая и нозологическая структура госпитальных инфекций в отделении реанимации хирургического профиля/ Б.Р. Гельфанд, Б.З. Белоцерковский, Т.В. Попов// Инфекции в хирургии. - 2003. - Т. 1. - № 4. - С. 2-10.
7. Дудников С.А. Количественная эпизоотология: Основы прикладной эпидемиологии и биостатистики. - Владимир, 2004. - 460 с.
8. Инфекционные болезни свиней: учеб. пособие. - Ростов н/Д: Феникс, 2007. - 195 с.
9. Методические рекомендации по выделению и диагностике псевдомоно-за сельскохозяйственных животных и птиц/ ГУВ МСХ СССР № 432-3 от 14.11. 1988 г.
10. Новгородова А.Ю. Экологические аспекты бактерий рода Рseudomonas на территории Украины. - 2014. - С. 248-251.
11. Ралка И.П. Роль условно-патогенной микрофлоры в патологии размножения свиней. - Вестник ветеринарии. - 1998. - № 9(3). - С.27-29.
12. Сидоров М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов: справочник/ М.А. Сидоров, Д.И. Скородумов, В.Б. Федотов. - М.: Колос, 1995. - 319 с.
13. Скориков А.В. Нозологический профиль инфекционных заболеваний свиней в Краснодарском крае/ А.В. Скориков, П.Н. Смирнов, Е.Н. Новикова// Инновации и продовольственная безопасность. - 2020. - № 2(28). - С. 64-69.
14. Bitsori M., Maraki S., Koukouraki S., Galanakis E. Pseudomonas aeruginosa urinary tract infection in children: risk factors and outcomes. - J. Urol. - 2012 (187(1). - P. 260-264.
15. Pitt T. L., Duerden B.I. Pseudomonas, Burkholderia, and related genera. In Microbiology and microbial infections. Oxford University Press Inc., New York, 1998. V. 2. P. 1109-1138.

Резюме. Бактерии рода Pseudomonas aeruginosa являются широко распространенными микроорганизмами на свиноводческих предприятиях региона, и из-за факторов вирулентности и патогенных свойств, в этиологическом аспекте представляет значительную угрозу для организма различных половозрастных групп свиней. В виде монокультуры P. aeruginosa выделена в 14,7% случаев, в ассоциации с другими микроорганизмами P. aeruginosa в 85,2% и наибольший удельный вес синегнойной палочки проявился в ассоциации с E.coli 47,8%, E. faecalis 21,4%, E. facium 8,8%, микроорганизмами, вызывающими у поросят в подсосный и отъемный периоды клинику желудочно-кишечных заболеваний. Особенностью эпизоотического проявления псевдомоноза свиней в условия промышленного свиноводства, являются энзоотические вспышки. На селективных питательных средах у колоний изолятов в 79,9 % случаев рост сопровождается образованием водорастворимого пигмента фенотазинового ряда пиоци-анина, на МПА с 5% дефибринированной кровью в 80-83% случаев, колонии синегнойной палочки вызывают зоны гемолиза. Биохимическая активность культур P. aeruginosa показала, низко выраженные биохимические свойства, они ассимилировали глюкозу и арабинозу, галактозу до образования кислоты, разлагали мочевину, обладали протеолитическими свойствами, разжижали желатин и пептонизировали молоко в течение 72 часов, проявляли фосфатозную активность, не образовывали индол и H2S, культуры продуцирующие экзотоксин А, при внутрибрюшинном заражении лабораторных животных максимально проявляют токсигенные свойства. Изоляты синегнойной палочки проявляют плазмокоагулирующую и агезивную активность. Полученные результаты изучения основных биологических свойств изолятов P. aeruginosa, могут быть использованы, при проведении диагностических исследований и проведении противоэпизоотических мероприятий в регионе.

Ключевые слова: синегнойная палочка, изоляты, диагностические исследования, селективные среды, биологические, биохимические, адгезивные, протеолитические, токсигенные, свойства, ассоциации, пигменты, пиоцианин, псев-домоноз, лабораторные животные, свиньи, этиология, желудочно-кишечные заболевания, регион, свиноводческие хозяйства, эпизоотическое проявление, противоэпизоотические мероприятия.

Сведения об авторе: Скориков Александр Владимирович, кандидат биологических наук, заместитель директора по научной работе Краснодарского НИВИ - обособленного структурного подразделения ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я линия, 1; тел.: 8-861-2216220; e-mail: knivi@list.ru - ответственный за переписку с редакцией.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей