Морфологическая структура органов иммунной системы и ответная реакция специфических клеток иммунной системы поросят на применение препарата натрия нуклеинат

Александрова С. С.  СГАУ им. Н.И. Вавилова., г. Саратов

В условиях современного животноводства, актуальной остается проблема иммунодефицитов животных, особен­но молодняка.

Иммунодефицитами считают нарушения нормального им­мунологического статуса, обусловленные дефектом одного или нескольких механизмов иммунного ответа. В зависимости от уровня нарушений различают гуморальные клеточные и комби­нированные формы иммунодефицитов. По происхождению раз­личают врожденные (первичные), приобретенные (вторичные) и возрастные (физиологические).

Наибольшее практическое значение имеют приобретенные иммунодефицитные состояния [2. 6. 8]. Бактериальные и вирус­ные инфекции могут быть как следствием, так и причиной вторич­ных иммунодефицитов. При острых инфекционных заболеваниях, прежде всего, страдает Т-система иммунитета со снижением реп­родукции Т-хелперов. нарушением дифференцировки популяций, снижением гиперчувствительности замедленного типа. В меньшей степени поражается В-система. При развитии инфекции на фоне уже имевшегося иммунодефицита показатели иммунного статуса снижаются до минимума, заболевание приобретает тяжелое тече­ние с нередким летальным исходом.

Фармакологические вещества так же индуцируют иммуносупрессию. Антибиотики и сульфаниламиды, такие как хлорамфеникол. сульфаметоксипиридазин. клиндамицин. линкомицин. гризеофульвин. интенсивно применяемые при лечении, вызывают дисбактериозы. что также приводит к развитию иммунодефицитов [1].

Иммунодефицитные состояния в совокупности с загрязнени­ем внешней среды микроорганизмами способствует нарушению взаимоотношений между макро- и микроорганизмами, что приво­дит к развитию различных заболеваний и в частности желудочно-кишечного и респираторного тракта и др. Снижение иммунологи­ческой реактивности так же оказывает влияние на эффективность специфической профилактики инфекционных болезней. [6]. Сни­жается эффективность вакцинирования, что также приводит к до­полнительным затратам [9].

Применение современных средств иммунокоррекции в жи­вотноводстве позволяет повысить эффект традиционной терапии, значительно снизить заболеваемость и смертность животных, и тем самым уменьшить затраты на лечение и повысить экономи­ческую эффективность производства [6].

В настоящее время существует большое количество иммуно-коррегирующих препаратов, которые по химической структуре и биологическим свойствам можно разделить на несколько групп. В том числе микробного происхождения (продигиозан, пирогенал, Рибомунил, ликопид, бронхомунал, имудон), тимические препара­ты (т-активин, тимопоэтин, тимоген), костномозговые регуляторы (миелопид и др.), цитокины (лейкинферон, суперлимф), производ­ные нуклеиновых кислот (полудан, инозин, анобекс, метилурацил, натрия нуклеинат, риботан) [7].

Натрия нуклеинат, представляет собой натриевую соль низ­комолекулярной РНК. Его активным биологическим компонентом являются нуклеотиды Препарат по своему химическому составу мало чем отличается от эндо - и экзогенных нуклеиновых кислот, обычно присутствующих в организме, в связи с чем, при его при­еме моделируются некие естественно возникающие ситуации.

С лечебной целью препараты РНК использовались еще с кон­ца прошлого столетия, и уже в первом десятилетии XX века они ста ли применяться при инфекционных заболеваниях, авитаминозах, нарушениях обмена веществ. Однако скоро об РНК забыли. Инте­рес к препаратам рибонуклеиновой кислоты в нашей стране сно­ва возник в 70-х годах. Было разрешено применение нуклеината натрия в медицинской практике, а также его промышленное про­изводство в латвийском городе Олайне Однако с распадом СССР НПО "Биолар", где производился препарат, закрылось.

ЗАО "Ветзвероцентр" совместно с ЗАО "Биоамид" разрабо­тали новый способ получения субстанции препарата гидролизом хлебопекарских дрожжей Sarcchomyces cerevisiae. Процесс полу­чения препарата стал включать специальную стадию ферментной очистки от белковых примесей, чего ранее не было.

Поданным ряда авторов [4. 6], ранее производимый НПО "Биолар- препарат обладает широким спектром биологической ак­тивности. Стимулирует лейкопоэз, процессы регенерации, функци­ональную активность нейтрофилов, усиливает антиинфекционную устойчивость организма, повышает функциональную активность Т-хелперов и Т-киллеров, пролиферацию клеток и синтез антител, является выраженным индуктором интерферона.

В результате разработки нового способа получения натрия нуклеината встал вопрос о детальном изучении влияния данного препарата на иммунный статус различных видов животных, и в том числе свиней. Нам представилась возможность в полной мере изучить влияние натрия нуклеината производимого ЗАО "Биоамид" на организм свиней, а именно поросят.

Материалы и методы исследования. Эксперимент прово­дился на поросятах 3 месячного возраста. По принципу аналогов были сформированы 2 группы по 5 голов. Эксперимент продол­жался в течение 21 дня. Опытной группе вводили натрия нуклеинат в дозе 1.0 мл 0.2% раствора внутримышечно, на первый день опыта, вторая являлась контрольной. Кровь исследовали в начале эксперимента для получения исходных данных, а также на 7.14 и 21 дни эксперимента. Для этого применяли утвержденные методи­ки по оценке иммунного статуса. После окончания эксперимента провели диагностический убой для выявления морфологических изменений в иммунных органах.

Результаты исследований и обсуждение. Учитывая, что морфологическая структура органов и тканей иммунной системы является важным показателем становления клеточной и гумо­ральной системы защиты организма, мы посчитали необходимым изучить структуру лимфатических узлов, селезенки, пейеровых бля­шек кишечника. Также исследовались печень и мозг для изучения токсического влияния препарата на организм животных.

При гистологическом исследовании в лимфоузлах животных контрольной группы (рис.1) выявлены изменения характерные для иммунодефицитныхсостояний. Отмечена гипоплазия лимфоидной ткани. Фолликулы уменьшены в размере. Нет четкой границы между зонами Т и В лимфоцитов. В центре фолликулов отмечается разрешение клеток. Синусы лимфоузлов расширены, наблюдается отек стромы.

В лимфоузлах животных опытной группы (рис. 2) отмечено увеличение количества лимфофолликулов, в которых наблюдается выраженная гиперплазия. Границы их четкие, хорошо заметны зоны Т и В лимфоцитов. Клетки хорошо воспринимают окраску гематоксилин-эозином. Хроматин ядер окрашен в густой темно-фиолетовый цвет. Это свидетельствует о повышении иммунного статуса под влиянием препарата.

Рис1. Гистосрез лимфоузла, опытная группа (Х300) Рис2. Гистосрез лимфоузла, контрольная группа (Х300)

В антителообразовании особое значение имеет белая пульпа селезенки. В селезенке животных опытной группы (рис. 3) наблю­дается значительное увеличение лимфоидных фолликулов в поле зрения микроскопа. Все они имеют четкую границу. В фолликулах четко видны зоны Т и В лимфоцитов. Клетки лимфофолликулов хо­рошо восприняли краску и поэтому четко различаются по архитек­тонике. Среди клеток лимфоидного ряда выявляются крупные клет­ки - мегакариоциты. Пролиферация клеток захватывает и строму селезенки. Увеличена красная пульпа селезенки в виде повышен­ного кровенаполнения. Все это говорит об активизации функций селезенки как иммунного органа.

В селезенке животных контрольной группы (рис. 4) боль­шинство фолликулов уменьшены в объеме, их центры находятся в состоянии разрежения, во многих отмечается некроз клеточ­ных элементов переходящий в некробиоз. Это говорит об имму-нодефицитном состоянии.

Рис3. Гистосрез селезёнки, опытная группа (Х300) Рис4. Гистосрез лимфоузла, контрольная группа (Х300)

Кишечник, а точнее пейеровы бляшки, расположенные в подслизистом слое играют немаловажную роль в формировании иммунного ответа. У животных опытной группы (рис. 5) видна бо­лее четкая структура всех слоев стенки кишечника. Строение же­лезистого аппарата кишечника выражено более четко, чем у поро­сят контрольной группы. Пейеровы бляшки увеличены в размере, наблюдается усиление процесса гиперплазии. Наряду с этим уве­личено количество лимфоидных клеток. Клетки лимфоидного ряда выходят за границы бляшек, скапливается в подслизистом слое кишечника, захватывая и слизистую оболочку. Все эти признаки говорят об усилении иммунных процессов под действием иммуномодулятора.

В кишечнике животных контрольной группы (рис. 6) лимфо-фолликулы не имеют четких границ. Пейеровы бляшки увеличены в размере, наблюдается усиление процесса гиперплазии. Границы их расширены, клетки лимфоидного ряда выходят за границы бля­шек, скапливаясь в подслизистом слое кишечника, захватывая и слизистую оболочку.

Рис5. Гистосрез кишечника, опытная группа (Х300) Рис6. Гистосрез кишечника, контрольная группа (Х300)

Иммуностимулятор, как и любой лекарственный препарат, помимо положительного влияния не должен оказывать отрицатель­ного действия на организм животного. В связи с этим, мы изучили влияние препарата на такие жизненно-важные органы, как пе­чень и головной мозг.

Структура ткани головного мозга (рис. 7) четко выражена. Встречается пролиферация лимфоидных клеток внутри кровеносных сосудов. В отдельных участках наблюдается пролиферация глиальных клеток. Возможно эти изменения возникают как усиление иммунной реакции у поросят под влиянием препарата.

В печени животных опытной группы (рис. 8) отмечается нор­мальное балочное строение, меньше участков мутного набуха­ния гепатоцитов. Границы клеток печени обозначены четче, чем в контрольной группе. По ходу стромы стало больше лимфоидных клеток Никаких дистрофических и некробиотических изменений не выявлено Заметно повышение желчеобразовательной функции печени Клетки печени хорошо воспринимают окраску.

Рис7. Гистосрез головной мозг, опытная группа (Х300) Рис8. Гистосрез головной мозг, контрольная группа (Х300)

Результаты изучения морфологической структура органов иммунной системы животных после применения натрия нуклеина­та подтверждают, что под действием препарата происходит актив­ное становление иммунной системы. Кроме того, исследование гистологического строения печени и мозга доказывает отсутствие токсического действия препарата на организм животных.

Важную роль в иммунных реакциях играют лимфоциты, ко­торые посредством клеточных рецепторов распознают антигены. Поэтому их называют антигенреактивными, или иммунокомпетентными, клетками.

Многообразие функций, которые выполняют Т-лимфоциты в рамках реализации иммунного ответа организма связано с существованием различных субпопуляций Т-лимфоцитов, "за­программированных" на выполнение конкретной функции при формировании иммунных реакций. Иммунокомпетентные клетки находятся в определенном кооперативном взаимодействии Фун­кцию обеспечения иммунокомпетентности лимфоидных клеток и регуляции функции В- системы выполняет Т- система.

Очевидна необходимость изучения реакции Т-клеток на различные медикаментозные препараты, используемые в насто­ящее время клиникой в качестве иммуномодуляторов. для объек­тивизации их назначения в каждом конкретном случае. Т-активная субпопуляция представляет собой преимущественно клетки, несущие супрессорную функцию (есть исследования, характери­зующие их и как клетки-помощники).

Теофиллинчувствительные клетки представлены субпопуляцией супрессоров а теофилли-нустойчивые — клетками-помощниками. Т-клетки, образующие розетки с аутоэритроцитами, как полагают, несут киллерную функцию и играют основную роль в механизмах аутоагрессии. В  лимфоциты, ответственны за синтез и секрецию различных изотипов иммуноглобулинов. Мигрируя в периферические лимфоидные органы они расселяются в тимуснезависимых, или В - зонах. Такими зонами являются мозговой и герминативный центры лимфатических узлов, периферический слой лимфатичес­ких фолликулов, перифолликулярная область и красная пульпа селезенки групповые лимфатические фолликулы. В-лимфоциты являются предшественниками антителообразующих (плазмати­ческих) клеток, которые после антигенной стимуляции секретиру-ют молекулы антител специфически реагирующих с антигенны­ми детерминантами.

Проведенные исследования количества Т и В лимфоцитов в крови животных показывают, что количество Т лимфоцитов (рис. 9) в опытной группе несколько снизилось на 7 день опыта, однако на 14 день наблюдалось повышение на 13 %. На 21 день их уро­вень составил 44.00±4 82 109/л., что в 1-3 раза выше показате­лей контрольной группы.

Рис.9. Тлимфоциты, 10/л

Количество В лимфоцитов (рис. 10) так же снижалось на 7 день исследования в обеих группах, но затем возросло, достигнув максимального значения в крови животных опытной группы на 21 день опыта составив 26.20±2.18 109/л.

Рис.10. В лимфоциты, 10/л

Таким образом на основании проведен­ных исследований мы пришли к выводу, что натрия нуклеинат способствует увеличению количества Т- лимфоцитов в 1,8 раза. В- лим­фоцитов соответственно в 3,2 раза. Результаты изучения морфологической структуры органов иммунной системы, подтверждают, что препа­рат стимулирует активное становление имму­нологической устойчивости организма.

Применение данного препарата порося­там позволяет повысить иммунологическую устойчивость организма кинфекциям. вызван­ным патогенной и условно-патогенной микрофлорой, и тем самым снизить заболеваемость животных и повысить их сохранность.

Список литературы

1. Бочкарев В.Н.. Иванов В.И.. Кузьменков И.И. и др. При­обретенные иммунодефицитные состояния у КРС в зоне экологи­ческого неблагополучия // Ветеринарная патология - N° 2 - 2003.- С. 8 -14.
2. Золотарева.НА. Иммунодефициты: профилактика и борь­ба с ними // Ветеринарная патология. - 2003. - N° 2. - С. 55 - 56.
3. Мищенко В.А.. Кононов А.В.. Мищенко В.А. Влияние фи­зиологического и иммуно-биологического статуса крупного рогато­го скота на уровень поствакционного иммунитета. // Ветеринария Кубани N°2 - 2008 С. 12-13
4. Соловьева Т.Е. Метод повышения эффективности вак­цинации убитой вакциной про-тив сальмонеллеза с применением натрия нуклеината // Ветеринарная патология - 2003. - N°1 С. 15-18
5. Федоров Ю. Н. Иммунокоррекция: применение и меха­низм действия иммуномодулирующих препаратов// Ветеринария- 2005.- N°3 - С.15-18.
6. Федоров ЮН. Иммунокоррекция приминение и меха­низм действия иммуномодулирующих препаратов // Ветеринария 2005 N°2
7. Хаитов P.M.. Пинегин Б.В. Основные принципы иммуно-модулирующей терапии/ P.M. Хаитов. Б.В. Пинегин // Аллергия, астма и клиническая иммунология. 2000. N° 1. 9-16.
8. Хлопицкий В. П.. Хмылов А. Г. Основные иммунодефици­ты свиней и средства борьбы с ними // Промышленное и племен­ное свиноводство - N°5.-2006 С. 37-39
9. Шахов А. Г.. Масьянов Ю. Н.. Бригадиров Ю. Н. и др. При­менение иммуномодуляторов при вакцинации животных против сальмонеллеза// Вете-ринария - 2006. - N°6 - С. 21-26

Реферат

Нами изучено влияние иммуномодулятора натрия нукле­ината на иммунологическую систему защиты организма поросят. Результаты эксперимента позволяют сделать вывод, что натрия нуклеинат оказывает стимулирующее действие на факторы кле­точного иммунитета.

Ключевые слова: иммунобиологическая система, иммуно­дефицит иммуномодуляция, иммуностимуляторы, натрия нукле­инат, свиньи.

Summary

We have studied influence of natrn nucleinate on immune system of pigs. Our researches have shown, that natrii nucleinate improves cellular factors of immunity.

Key words: immunobiological system, immunodeficiency, immunomodulation, Immunostimulation, natrii nucleinas, pigs.

Сведения об авторе

Ответственный за переписку с редакцией: Александрова Светлана Сергеевна аспирант кафедры "Морфология и патоло­гия животных" СГАУ им. Н.И. Вавилова. 410005 г. Саратов ул. Соколовая, 335 т. 8 (8452) 69-25-31; svetavlad66@yandex.ru. т.8 917 3140485

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей