Новые аспекты цитологической диагностики питироспороза собак

Я.Н.Федоров ФГОУВПО"Донской госагроуниверситет"

Введение.
Грибы рода Malassezia - это липофильные дрожжи, являющиеся представителем нормальной сапрофитной микобиоты кожного покрова теплокров­ных животных и человека. Они обитают на здоровой коже, пот­ребляют жироподобные компоненты, выделяемые хозяином, при этом синтезируют вещества, ингибирующие жизнедеятель­ность бактерий и грибов. Однако, при нарушении симбиоза между микро - и макроорганизмом, что обусловлено нарушени­ем иммунологических защитных механизмов носителя (приме­нение гормонотерапии, длительной антибиотикотерапии и т.п.), грибы рода Malassezia могут вызвать заболевание кожного покрова.

В настоящее время доказана наследственная предраспо­ложенность и отсутствие передачи инфекта контактным путем (1),а также не установлена зависимость частоты встречаемости от пола и возраста животного (1,2). Имеются данные, свидетель­ствующие, что наличие гриба рода Malassezia при заболевани­ях кожи способствует утяжелению процесса за счет аллергизи-рующего фактора (2,3), вследствии способности индуцировать высокий уровень специфических IgE антител (1, 4).

Питироспороз - микоз собак, вызываемый липофильным дрожжевым грибком Malassezia pachydermatis, который в нор­ме обитает на коже и слизистых оболочках здоровых собак. Чаще всего Malassezia выделяют из области губ, межпальцевых складок, наружного слухового прохода, параанальных синусов и прямой кишки. Размножение Malassezia (при этом плотность кожной популяции увеличивается до 10 тысяч раз), при некото­рых условиях связано с развитием дерматита или наружного отита. Размножению Malassezia способствуют нарушения ес­тественной резистентности организма и определенные измене­ния в состоянии кожного микроклимата: изменение секреции сальных желез, кожные воспалительные явления, повышенная потливость, в частности в кожных складках (иммуносупрессивная кортикостероидная терапия или длительная антибиотико-терапия, демодекоз, гипотериоз, гиперчувствительность, в том числе атопический дерматит.

К дерматиту Malassezia более дру­гих склонны бассет-хаунды, таксы, кокер-спаниели, карликовые пудели, некоторые терьеры. Одним из наиболее информатив­ных методов диагностики формы и этиологии наружного отита является цитологический метод, вместе с тем критерии оценки цитологической картины при питироспорозе у собак не разра­ботаны, что и определило цель нашего исследования.

Цель исследования. Выяснить диагностическую значи­мость цитологического исследования при питироспорозе у со­бак.

Рис. 1. Невыраженный гиперкератоз, единичные малассезии, без нейтрофильной реакции (1-2 степень тяжести питироспороза) Рис. 2. Выраженный гиперкеротоз с выраженной обсемененностью малассезиями, незначительной нейтрофильной реакцией (2 степень тяжести питироспороза)

Материал и методы. Мазки готовили из глубоких соско-бов с пораженных поверхностей тела животного. Для цитоло­гического исследования окраску мазков проводили готовым красителем гемокрафиксом (В,Г. Колб, B.C. Камышников, 1976). Оценку мазка проводили путем подсчитывания количес­тва поверхностных клеток эпителия, глубоких клеток эпителия, нейтрофилов, а также наличия клеток грибов в 10 полях зрения с последующим их подсчетом по полям зрения. Исследования проводили под иммерсией светового микроскопа (объектив *90, окуляр *7).

Результаты исследования. При проведении цитологи­ческих исследований кожи у собак при питироспорозе всегда увеличивается количество слущенных клеток поверхностного эпителия. Эти клетки однообразны, больших размеров - око­ло 20-25 мкм, при форсированном выполнении мазка клетки могут втулкообразно сворачиваться. Форма клеток полигональ­ная, реже приближающаяся к округлой или слегка вытянутой. Ядро округлое, ярко окрашено, пикнотическое очень малень­ких размеров, но чаще ядра в клетках полностью отсутствуют. При цитологическом исследовании у здоровых собак обнаружи­вается от 3 до 10 клеток поверхостного эпителия, Malassezia pachydermatis отсутствует. При патологическом процессе все поля зрения покрывают эти клетки. На фоне слущивающегося эпителия обнаруживается Malassezia pachydermatis. В зависи­мости от степени обсемененности Malassezia pachydermatis, а также выраженности гиперкератоза и экссдуативных процес­сов, ставился комплексный цитологический диагноз. При этом мы учитывали:

I. выраженность гнгзеркератоза, дискератоза и деск-вамиции эпителия, исследование проводилось в поле зрения микроскопа - объектив 20 окуляр 10, выделяли три степени ги­перкератоза:

1. невыраженный гиперкератоз - количество ороговев­ших клеток от 10 до 40, ядерные клетки отсутствуют (десквама-ции эпителия нет);
2. гиперкератоз средней степени с начальной десквама-цией - количество ороговевших безъядерных клеток от 40 до 80 в поле зрения, от 10 до 20 эпителиальных ядерных клеток;
3. выраженный гиперкератоз - в каждом поле зрения более 80 безъядерных ороговевших клеток, большинство из них скручены в трубочку, более 20 ядерных эпителиальных клеток, имеющих полиморфизм, сюда же относили мазки, в которых обнаруживались только ядерные эпителиальные клетки, роговых чешуек нет;

II, количество клеток Malassezia pachydermatis в поле зрения микроскопа - объ­ектив 20 окуляр 10, выделяли 3 степени:

1. обсемененности нет;
2. невыраженная обсемененность - на­личие малассезий от 20 до 80 в поле зрения;
3. выраженная обсемененность, нали­чие малассезий более 80 в поле зрения.

III. по выраженности экссудативной ре­акции выделяли три степени:

1. лейкоциты отсутствуют или имеются единичные нейтрофилы;
2. умеренная лейкоцитарная реакция, десквамация эпителия - от 10 до 80 нейтрофи-лов в поле зрения, единичные эозинофилы;
3. тяжелая десквамация эпителия - по всем полям зрения нейтрофилы, экссудат, име­ются эритроциты, в. мазке встречаются еди­ничные макрофаги, лимфоциты, эозинофилы и плазматические клетки, фибрин, эластические и коллагеновые волокна (продукты распада ткани).

При I степени тяжести воспалительного процесса мы чаще всего ставили следующий цитологический диагноз: невыражен­ный гиперкератоз, единичные Malassezia pachydermatis, отсутс­твие нейтрофильной реакции - это был самый частый диагноз при цитологическом исследовании собак с питироспорозным дерматитом (рис. 1).

Обычно при II, III степени тяжести воспалительного процес­са цитологический диагноз звучит так: гиперкератоз средней степени с начальной десквамацией, невыраженной обсеме-ненностью малассезиями, единичные нейтрофилы (рис. 2).

При III - IV степени тяжести воспалительного процесса чаще других ставился диагноз - выраженный гиперкератоз, с тяжелой десквамацией эпителия и выраженной обсемененностью Malassezia pachydermatis (рис, 3).

В таблице 1 показана корреляция между клинической кар­тиной и цитологией.

Таблица 1. Цитологические изменения при питироспорозе разной степени тяжести

	I выраженность гиперкератоза, степени
	1	2	3
Заболело собак, гол	342	221	91
По степени тяжести, гол	I	I, II, III	II, III, IV
	II выраженность обсемененности малассезиями
	1	2	3
Заболело собак, гол	127	498	29
По степени тяжести, гол	I, II	I, II, III	III, IV
	III выраженность экссудативных процессов, степени
	1	2	3
Заболело собак, гол	396	237	21
По степени тяжести, гол	I, II	II, III	IV

При микроскопическом исследовании цитологического мазка у собак с I и II степенью тяжести питироспороза в поле зрения представляется однородная картина, состоящая из от­дельных клеток плоского ороговевшего эпителия (рис. 1).

По степени обсеменен ности можно выделить отоцито-логические мазки с небольшим количеством малассезий, но чаще даже у клинически здоровых собак можно обнаружить единичные малассезий, поэтому основным в тяжести течения заболевания являются признаки воспаления и гиперкерато­за. При клиническом осмотре такого животного не отмечает­ся никаких системных проявлений заболевания, внутренняя поверхность слухового канала несколько покрасневшая, и выглядит как бы присыпанной отрубевидным налетом, несколько бархатистая на вид. При отоцитологическом исследова­нии на ватном тампоне остаются суховатый, крошковатый или воскоподобный налеты, которые и исследуются, отмечаются незначительные поражения со стороны паховых складок .

По мере утяжеления воспалительного процесса, отек кожи увеличивается, краснота становится все более выраженной, в мазке появляются не только роговые чешуйки, но и ядерные клетки, и единичные нейтрофилы. На поверхности кожи появля­ются пустулы, которые быстро вскрываются и покрываются ко­рочками. Если же процесс носит сливной характер, внутренняя поверхность уха превращается в сплошную сочащуюся повер­хность, в этом случае в мазке всегда присутствует выраженная обсемененность малассезиями, выражена нейтрофильная экс­судация, много фибрина и тканевого детрита.

При хронизации процесса происходит лихенизация кожи наружного слухового прохода и живота, а цвет кожи при­обретает своеобразный синеватый оттенок. Несмотря на то, что процесс затухает, в цитологическом мазке в большом коли­честве определяются ороговевшие клетки, как правило, всегда присутствуют лейкоциты и большое количество малассезий.

Вывод.
По степени обсемененности кожи Malassezia pachydermatis, выраженности гиперкератоза и экссудативных процессов можно объективно ставить диагноз на тяжесть тече­ния питироспороза.

Литература

1. Gustafson, В. A. Otitis externa in the dog, A bacteriological and experimental study. Stockholm: Royal Veterinary College, 2002:117p.
2. Dufait, R. Pityrosporon canis as the cause of canine chronic dermatitis. Veterinary Medicine/Small Animal Clinician
   2007; 78p.
3. Cunningham, A. C, Leeming, J. P., Ingham, E., Gowland, G.Differentiation of three serovars of Malassezia furfur. Journal of
   Applied Bacteriology 1990; 68p.
4. Midgley, G. The diversity of Pityrosporum (Malassezia) yeasts in vivo and in vitro. Mycopathologia 2006; 106p.
5. Yarrow, D.T Ahearn, D. G., Kreger Van Rij, N. J. W. Genus 7. Malassezia. Baillon, 1984.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей