Диагнастическое значение цитологического исследования клеток печени при пироплазмозе у собак

М.С. Кривко, аспирант 
Л.П. Словинская, аспирант 
С.Н. Карташов, доктор биологических наук, 
заведующий лабораторией
ГНУ СКЗНИВИ,. Новочеркасск, Россия

В настоящее время возросла актуальность вопросов пато- и морфогенеза гепатитов у собак паразитарной этиологии, поскольку с этим связано повышение эф­фективности диагностики и лечения (1,2).

Выясняя вопросы тяжести течения пироплазмоза нами, особое внимание уделялось проведению цитологического ис­следования печени.

Цель работы: установить морфологические изменения в печени при пироплазмозе разной степени тяжести.

Материал и методы исследования. После уточнения то­пографии печени относительно костных образований (ребра, позвонки) проводили пункцию и забор клеточного материала паренхимы. Одной рукой кожу смещали в сторону, другой про­изводили прокол и вводили иглу перпендикулярно коже на нуж­ную глубину, после чего производили аспирацию шприцем, при этом незначительно смещали вперед и назад.

Из полученного материала делали мазок, который окра­шивали готовым красителем "Гемокрафиксом". При малом увеличении находили монослойные участки, а затем мазок исследовали при большом увеличении. В цитопункгате печени обращали внимание на: клеточный состав (эритроциты, ней-трофилы, эозинофилы, эпителиальные клетки, макрофаги, ати­пичные клетки, бактерии); однородность клеток одного класса (размер и форма клеток, соотношение размера цитоплазмы и ядра, форма, восприимчивость к красителям, размер ядра, раз­личия в форме и размере ядер, наличие множественных ядер, их деформация, форма и размер ядрышек, наличие вакуолей и митозов). Изменения ци­тологической картины печени при пироплаз­мозе сравнивали с цитологической картиной печени здоровых животных.

Результаты исследования. При мик­роскопическом исследовании пунктата нор­мальной печени в поле зрения представля­ется однородная картина, состоящая почти сплошь из отдельных клеток печеночной па­ренхимы. Клетки печени однообразны в размерах. Форма клеток полигональная, реже приближающаяся к округлой или слег­ка вытянутой. Ядро округлое, сравнительно с протоплазмой малых размеров, часто распо­ложено эксцентрически. В норме до 20% пе­ченочных клеток имеют 2 ядра; двуядерность печеночных клеток следует рассматривать как проявление регенерации, свойственной и нормальному органу.

В период реконвалесценции после пироплазмоза, когда имеют место репаративные процессы, количество двуядерных клеток увеличивается. При окраске гемокрафиксом цитоплаз­ма печеночных клеток окрашивается в светло-лиловый цвет, в синеватый или в светло-фиолетовый. Протоплазма окрашена неравномерно. Различие в окраске протоплазмы печеночной клетки, прежде всего, может быть объяснено физиологическим состоянием клетки, однако чаще это бывает связано с дистрофическими процессами в клетках.

Таблица 1. Цитограмма печени у собак, больных гепатитом

Показатели	Клинически здоровые животные	Собак больные пироплазмозом
		Течение болезни
		Легкой	Среднее	Тяжелое	Крайне тяжелое
Нормальные печеночные клетки с одним ядром, %	82,1±4,3	74,2±5,6	69,3±6,9	42,3±8,7	9,8±0,38
Двуядерные гепатоциты, %	15,3±2,7	21,3±3,9	24,4±5,2	12,7±2,3	8,7±0,6
Многоядерные гепатоциты, %	0,82±0,1	1,53±0,26	1,79±0,31	1,96±0,27	1,03±0,12
Дегенеративные печеночные клетки, %	1,74±0,25	2,97±0,19	4,52±0,28	43,04±3,47	80,47±6,97

При легком клиническом течении пироплазмоза в боль­шинстве своем гепатоциты выглядят как нормальные, но в их цитоплазме отмечается незначительная вакуолизация. Возмож­ны изменения размеров на 2-4 мкм самих клеток и размеров ядра на 1-3 мкм, изменения ядерно-цитоплазматического со­отношения в пользу ядра, незначительная метахромазия, на­рушение окраски цитоплазмы и ядра. Отмечаются начальные проявления дегенерации, протоплазма печеночной клетки при­обретает гомогенную оксифильную окраску. Иногда протоплаз­ма содержит вакуоли. По мере утяжеления течения заболева­ния прогрессирует жировая дистрофия, в продвинутых случаях число вакуолизированных клеток резко увеличено.

Печеночные клетки нормального органа содержат глыб-ки желчного пигмента - билирубина, но при пироплазмозе его количество резко увеличивается даже при легком течении заболевания, и билирубин присутствует практически во всех клетках.

При пироплазмозе средней тяжести гепатоциты значитель­но изменены. В них наблюдается выраженная вакуолизация ци­топлазмы, характерны изменения размеров ядра на 1-3 мкм, изменение ядерно-цитоплазматического соотношения в сто­рону цитоплазмы (40-30%), то есть наблюдается кариопикноз. Возможен и противоположный процесс - плохое прокрашива­ние ядра с одновременным его увеличением, что характерно для кариолизиса. Выражена метахромазия, нарушения окраски цитоплазмы и ядра. Возможна сильная вакуолизация вплоть до полного отсутствия ее (контурируется только мембрана) при наличии нормального ядра. В таком ядре при пироплазмозе средней тяжести характерны изменения не только со стороны цитоплазмы, но и со стороны ядра. Ядра клеток разного разме­ра, от гигантских более 20 мкм до пикнотических, резко умень­шенных до 1-2 мкм. Очень часто визуализируются ядра разной формы, от овальных до треугольных. Нормальная цитоплазма при наличии выраженной сморщенноеTM ядра или сильного изменения ядерно-цитоплазматического соотношения в пользу цитоплазмы также встречается в цитопункгате печени при сред­нем течении гепатита.

Для тяжелого и крайне тяжелого течения пироплазмоза ха­рактерны значительные изменения в морфологии гепатоцитов. В целом гепатоциты выглядят сильно измененными, практичес­ки разрушенными, в цитоплазме отмечается значительная ва­куолизация; возможны изменения размеров клетки с измене­нием ядерно-цитоплазматического соотношения в пользу ядра (30-10%). Ядро практически отсутствует, в нем невозможно выявить ядрышки или хроматин, сильно воспринимает окрас­ку - наблюдается полный кариорексис, при зтом цитоплазма всегда изменена, без четкой границы. Значительная метахро-мазия - нарушение окраски цитоплазмы и ядра. Наличие рас­пада ядра.

При утяжелении пироплазмоза отмечаются дальнейшие изменения в ядрах клеток. Ядра гепатоцитов имеют нечеткие контуры, содержат более 2-х ядрышек. Часто в них обнаружи­ваются крупные тельца-включения, которые имеют различную окраску и форму. Тельца-включения также обнаруживаются и в купферовских клетках. При тяжелом течении заболевания ха­рактерны не столько дистрофические, сколько некротические изменения гепатоцитов. Участки некроза располагаются в ос­новном в периацинарных областях. Портальные тракты зачас­тую подвергаются клеточной инфильтрации. Ядрышки выглядят уменьшенными, сморщенными и сильно окрашенными.

При пироплазмозе лейкоцитарная реакция в печени вы­ражена слабо - отмечаются отдельные нейтрофильные лейко­циты, лимфоциты., моноциты.

Таким образом, прослеживается четкая граница между цитограммой при легком и среднем течении и цитограммой при тяжелом и крайне тяжелом течении пироплазмоза. Это, прежде всего, связано со срывом регенеративных процессов в печеночной паренхиме при тяжелом и очень тяжелом течении заболевания.

Данный вывод подтверждает значительное снижение ко-личества двуядерных гепатоцитов в цитопункгате печени при тяжелом и очень тяжелом течении соответственно до 12,7±2,3 и 8,7±0,6%, в то время как при легком и среднем течении на­блюдается обратный процесс - число двуядерных гепатоцитов увеличивается соответственно до 21,3+3,9 и 24,4±5,2%. Увели­чение и снижение количества двуядерных гепатоцитов отража­ет степень регенеративных процессов в печеночной ткани.

Для тяжелого и крайне тяжелого течения пироплазмоза ха­рактерны значительные изменения в морфологии гепатоцитов. В целом гепатоциты выглядят сильно измененными, практичес­ки разрушенными, в цитоплазме отмечается значительная вакуолизация; возможны изменения размеров клетки с измена нием ядерно-цитоплазматического соотношения в пользу ядра (30-10%). Ядро практически отсутствует, в нем невозможна выявить ядрышки или хроматин, сильно воспринимает окраса ку - наблюдается полный кариорексис, при этом цитоплазма всегда изменена, без четкой границы. Значительная метахро! мазия - нарушение окраски цитоплазмы и ядра. Наличие распада ядра.

Одновременно со снижением двуядерных гепатоцитов при тяжелом и крайне тяжелом течении гепатита отмечается значительное увеличение числа дегенеративных гепатоцитов  1,74±0,25 у здоровых животных до 43,04±3,47 при тяжелом течении и 80,47+6,97% при крайне тяжелом течении гепатитов.

Таким образом, по мере развития пироплазмоза и усиле­ния его тяжести, в цитопункгате печени количество нормальный печеночных клеток с одним ядром значительно снижается, а число дегенеративных гепатоцитов возрастает. Два других по­казателя (дву- и многоядерные клетки) имеют более сложную количественную динамику, обусловленную состоянием регенен ративных процессов в печеночной ткани.

Литература.

1. Раймонд Н. Техника цитопункции // Ветеринар. - 1999.- N°3-4. - С. 43-44.
2. Федюк В.И., Казаков Д.Н. Цитологические аспекты диа­гностики заболеваний печени у собак// Практик. - N° 7-8. - 2003.- С. 98-101.

Реферат

По мере развития пироплазмоза и усиления его тяжести, в цитопункгате печени количество нормальных печеночных клеток с одним ядром значительно снижается, а число дегенеративных] гепатоцитов возрастает. Два других показателя (дву- и многоядер­ные клетки) имеют более сложную количественную динамику, обусловленную состоянием регенератирных процессов в пече­ночной ткани.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей