М.С. Кривко, аспирант
Л.П. Словинская, аспирант
С.Н. Карташов, доктор биологических наук,
заведующий лабораторией
ГНУ СКЗНИВИ,. Новочеркасск, Россия
В настоящее время возросла актуальность вопросов пато- и морфогенеза гепатитов у собак паразитарной этиологии, поскольку с этим связано повышение эффективности диагностики и лечения (1,2).
Выясняя вопросы тяжести течения пироплазмоза нами, особое внимание уделялось проведению цитологического исследования печени.
Цель работы: установить морфологические изменения в печени при пироплазмозе разной степени тяжести.
Материал и методы исследования. После уточнения топографии печени относительно костных образований (ребра, позвонки) проводили пункцию и забор клеточного материала паренхимы. Одной рукой кожу смещали в сторону, другой производили прокол и вводили иглу перпендикулярно коже на нужную глубину, после чего производили аспирацию шприцем, при этом незначительно смещали вперед и назад.
Из полученного материала делали мазок, который окрашивали готовым красителем "Гемокрафиксом". При малом увеличении находили монослойные участки, а затем мазок исследовали при большом увеличении. В цитопункгате печени обращали внимание на: клеточный состав (эритроциты, ней-трофилы, эозинофилы, эпителиальные клетки, макрофаги, атипичные клетки, бактерии); однородность клеток одного класса (размер и форма клеток, соотношение размера цитоплазмы и ядра, форма, восприимчивость к красителям, размер ядра, различия в форме и размере ядер, наличие множественных ядер, их деформация, форма и размер ядрышек, наличие вакуолей и митозов). Изменения цитологической картины печени при пироплазмозе сравнивали с цитологической картиной печени здоровых животных.
Результаты исследования. При микроскопическом исследовании пунктата нормальной печени в поле зрения представляется однородная картина, состоящая почти сплошь из отдельных клеток печеночной паренхимы. Клетки печени однообразны в размерах. Форма клеток полигональная, реже приближающаяся к округлой или слегка вытянутой. Ядро округлое, сравнительно с протоплазмой малых размеров, часто расположено эксцентрически. В норме до 20% печеночных клеток имеют 2 ядра; двуядерность печеночных клеток следует рассматривать как проявление регенерации, свойственной и нормальному органу.
В период реконвалесценции после пироплазмоза, когда имеют место репаративные процессы, количество двуядерных клеток увеличивается. При окраске гемокрафиксом цитоплазма печеночных клеток окрашивается в светло-лиловый цвет, в синеватый или в светло-фиолетовый. Протоплазма окрашена неравномерно. Различие в окраске протоплазмы печеночной клетки, прежде всего, может быть объяснено физиологическим состоянием клетки, однако чаще это бывает связано с дистрофическими процессами в клетках.
Таблица 1. Цитограмма печени у собак, больных гепатитом
Показатели | Клинически здоровые животные | Собак больные пироплазмозом | |||
---|---|---|---|---|---|
Течение болезни | |||||
Легкой | Среднее | Тяжелое | Крайне тяжелое | ||
Нормальные печеночные клетки с одним ядром, % | 82,1±4,3 | 74,2±5,6 | 69,3±6,9 | 42,3±8,7 | 9,8±0,38 |
Двуядерные гепатоциты, % | 15,3±2,7 | 21,3±3,9 | 24,4±5,2 | 12,7±2,3 | 8,7±0,6 |
Многоядерные гепатоциты, % | 0,82±0,1 | 1,53±0,26 | 1,79±0,31 | 1,96±0,27 | 1,03±0,12 |
Дегенеративные печеночные клетки, % | 1,74±0,25 | 2,97±0,19 | 4,52±0,28 | 43,04±3,47 | 80,47±6,97 |
При легком клиническом течении пироплазмоза в большинстве своем гепатоциты выглядят как нормальные, но в их цитоплазме отмечается незначительная вакуолизация. Возможны изменения размеров на 2-4 мкм самих клеток и размеров ядра на 1-3 мкм, изменения ядерно-цитоплазматического соотношения в пользу ядра, незначительная метахромазия, нарушение окраски цитоплазмы и ядра. Отмечаются начальные проявления дегенерации, протоплазма печеночной клетки приобретает гомогенную оксифильную окраску. Иногда протоплазма содержит вакуоли. По мере утяжеления течения заболевания прогрессирует жировая дистрофия, в продвинутых случаях число вакуолизированных клеток резко увеличено.
Печеночные клетки нормального органа содержат глыб-ки желчного пигмента - билирубина, но при пироплазмозе его количество резко увеличивается даже при легком течении заболевания, и билирубин присутствует практически во всех клетках.
При пироплазмозе средней тяжести гепатоциты значительно изменены. В них наблюдается выраженная вакуолизация цитоплазмы, характерны изменения размеров ядра на 1-3 мкм, изменение ядерно-цитоплазматического соотношения в сторону цитоплазмы (40-30%), то есть наблюдается кариопикноз. Возможен и противоположный процесс - плохое прокрашивание ядра с одновременным его увеличением, что характерно для кариолизиса. Выражена метахромазия, нарушения окраски цитоплазмы и ядра. Возможна сильная вакуолизация вплоть до полного отсутствия ее (контурируется только мембрана) при наличии нормального ядра. В таком ядре при пироплазмозе средней тяжести характерны изменения не только со стороны цитоплазмы, но и со стороны ядра. Ядра клеток разного размера, от гигантских более 20 мкм до пикнотических, резко уменьшенных до 1-2 мкм. Очень часто визуализируются ядра разной формы, от овальных до треугольных. Нормальная цитоплазма при наличии выраженной сморщенноеTM ядра или сильного изменения ядерно-цитоплазматического соотношения в пользу цитоплазмы также встречается в цитопункгате печени при среднем течении гепатита.
|
Для тяжелого и крайне тяжелого течения пироплазмоза характерны значительные изменения в морфологии гепатоцитов. В целом гепатоциты выглядят сильно измененными, практически разрушенными, в цитоплазме отмечается значительная вакуолизация; возможны изменения размеров клетки с изменением ядерно-цитоплазматического соотношения в пользу ядра (30-10%). Ядро практически отсутствует, в нем невозможно выявить ядрышки или хроматин, сильно воспринимает окраску - наблюдается полный кариорексис, при зтом цитоплазма всегда изменена, без четкой границы. Значительная метахро-мазия - нарушение окраски цитоплазмы и ядра. Наличие распада ядра.
При утяжелении пироплазмоза отмечаются дальнейшие изменения в ядрах клеток. Ядра гепатоцитов имеют нечеткие контуры, содержат более 2-х ядрышек. Часто в них обнаруживаются крупные тельца-включения, которые имеют различную окраску и форму. Тельца-включения также обнаруживаются и в купферовских клетках. При тяжелом течении заболевания характерны не столько дистрофические, сколько некротические изменения гепатоцитов. Участки некроза располагаются в основном в периацинарных областях. Портальные тракты зачастую подвергаются клеточной инфильтрации. Ядрышки выглядят уменьшенными, сморщенными и сильно окрашенными.
При пироплазмозе лейкоцитарная реакция в печени выражена слабо - отмечаются отдельные нейтрофильные лейкоциты, лимфоциты., моноциты.
Таким образом, прослеживается четкая граница между цитограммой при легком и среднем течении и цитограммой при тяжелом и крайне тяжелом течении пироплазмоза. Это, прежде всего, связано со срывом регенеративных процессов в печеночной паренхиме при тяжелом и очень тяжелом течении заболевания.
Данный вывод подтверждает значительное снижение ко-личества двуядерных гепатоцитов в цитопункгате печени при тяжелом и очень тяжелом течении соответственно до 12,7±2,3 и 8,7±0,6%, в то время как при легком и среднем течении наблюдается обратный процесс - число двуядерных гепатоцитов увеличивается соответственно до 21,3+3,9 и 24,4±5,2%. Увеличение и снижение количества двуядерных гепатоцитов отражает степень регенеративных процессов в печеночной ткани.
Для тяжелого и крайне тяжелого течения пироплазмоза характерны значительные изменения в морфологии гепатоцитов. В целом гепатоциты выглядят сильно измененными, практически разрушенными, в цитоплазме отмечается значительная вакуолизация; возможны изменения размеров клетки с измена нием ядерно-цитоплазматического соотношения в пользу ядра (30-10%). Ядро практически отсутствует, в нем невозможна выявить ядрышки или хроматин, сильно воспринимает окраса ку - наблюдается полный кариорексис, при этом цитоплазма всегда изменена, без четкой границы. Значительная метахро! мазия - нарушение окраски цитоплазмы и ядра. Наличие распада ядра.
Одновременно со снижением двуядерных гепатоцитов при тяжелом и крайне тяжелом течении гепатита отмечается значительное увеличение числа дегенеративных гепатоцитов 1,74±0,25 у здоровых животных до 43,04±3,47 при тяжелом течении и 80,47+6,97% при крайне тяжелом течении гепатитов.
Таким образом, по мере развития пироплазмоза и усиления его тяжести, в цитопункгате печени количество нормальный печеночных клеток с одним ядром значительно снижается, а число дегенеративных гепатоцитов возрастает. Два других показателя (дву- и многоядерные клетки) имеют более сложную количественную динамику, обусловленную состоянием регенен ративных процессов в печеночной ткани.
Литература.
Реферат
По мере развития пироплазмоза и усиления его тяжести, в цитопункгате печени количество нормальных печеночных клеток с одним ядром значительно снижается, а число дегенеративных] гепатоцитов возрастает. Два других показателя (дву- и многоядерные клетки) имеют более сложную количественную динамику, обусловленную состоянием регенератирных процессов в печеночной ткани.
http://vetkuban.com/num5_20089.html