Антиагрегационный контроль сосудов над основными форменными элементами крови у новорожденных телят

Глаголева Т.И. Курский институт социального образования (филиал)
ФГБОУ ВПО "Российский государственный социальный университет", г. Курск

Введение. Необходимость интенсификации производства говядины остро диктует необходимость дальнейших исследований в области физиологии крупного рогатого скота в течение всего онтогенеза [9]. Особое внимание в этой связи привлекает к себе кровь, состоящая из форменных элементов и плазмы, непрерывно перемещающаяся по сосудам животного, обеспечивающая газообмен, доставку тканям питательных и биологически активных веществ, а также удаление из них токсических веществ и шлаков [15]. Успешность гемоциркуляции, существенно определяющая общий физиолого-биологический статус животного [16], во многом связана с особенностями агрегации форменных элементов крови [8] и выраженностью контроля над нею со стороны сосудистой стенки в течение всего онтогенеза [10, 13, 14]. Замечено, что избыточная агрегация эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов может нарушать метаболические процессы и тормозить развитие животных [3,6]. В этой связи становится актуальным определение состояния сосудистого контроля над агрегацией форменных элементов крови у телят в самом начале онтогенеза - в фазу новорожденности [11]. В этом нуждается не только фундаментальная наука, но и практика, так как необходимо выяснение выраженности антиагрегационных нарушений сосудов у новорожденных телят при отдельных заболеваниях [4], оценка степени их динамики при применении различных подходов к коррекции состояния животных [5], возможные только при знании нормативных показателей в отношении основных форменных элементов крови.

В работе поставлена цель - установить выраженность антиагре-гационных возможностей влияния сосудов на форменные элементы крови у телят в течение фазы новорожденности.

Материалы и методы. Исследование выполнено на 32 телятах черно-пестрой породы, взятых в исследование на 1-2 сутки жизни. Обследование проводилось в течение фазы новорожденности пятикратно - на 1-2, 3-4, 5-6, 7-8 и 9-10 сутки жизни.

Выраженность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме оценивалась по содержанию тиобарбитуровой кислоты (ТБК)-активных продуктов набором "Агат-Мед" и ацилгидропереки-сей (АГП) [2]. Антиокислительный потенциал жидкой части крови определялся по её антиокислительной активности (АОА) [1].

Сосудистый контроль над агрегацией форменных элементов крови определяли по её ослаблению в пробе с временной венозной окклюзией. Выраженность агрегации эритроцитов до и после временной ишемии стенки сосуда определяли с помощью светового микроскопа в камере Горяева, регистрируя количество агрегатов эритроцитов, число агрегированных и неагрегированных эритроцитов [12]. У всех телят путем деления суммы всех эритроцитов в агрегатах на величину этой суммы на фоне временной венозной окклюзии рассчитывался индекс контроля сосудов над суммой эритроцитов в агрегате (ИКССЭА), в результате деления количества агрегатов без временной венозной окклюзии на их количество на фоне временной венозной окклюзии определяли индекс контроля сосудов над количеством эрит-роцитарных агрегатов (ИКСКЭА) и в ходе деления количества свободных эритроцитов на фоне временной венозной окклюзии на количество свободных эритроцитов без нее высчитывалась величина индекса контроля сосудов над количеством свободных эритроцитов (ИКСКСЭ).

Агрегацию тромбоцитов (АТ) оценивали с помощью визуального микрометода оценки АТ [12] до и после венозной окклюзии с применением АДФ (0,5*10-4 М), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл), ристомицина (0,8 мг/мл), адреналина (5,0*10-6 М) и перекиси водорода (7,3*10-3 М) и богатой тромбоцитами плазмы со стандартизированным количеством тромбоцитов - 200*109. Индекс антиагрегационной активности сосудистой стенки (ИААСС) выявляли при делении времени развития АТ после венозной окклюзии на время без нее.

Ограничивающее влияние сосудов на процесс агрегации ней-трофилов в плазме, полученной после наложения манжетки и без нее, оценивалась способность этих клеток к агрегации на фотоэлектроколориметре. В качестве индукторов применены лектин зародыша пшеницы в дозе 32 мкг/мл, конканавалин А - 32 мкг/мл и фитогемагглю-тинин - 32 мкг/мл. У всех телят рассчитывался индекс торможения сосудистой стенкой агрегации нейтрофилов (ИТССАН) путем деления величины агрегации нейтрофилов в плазме, полученной без манжетки на ее величину в плазме, взятой с наложением манжетки.

Статистическая обработка полученных результатов велась t-критерием Стьюдента.

Результаты исследований. У телят отмечена невысокая активность ПОЛ плазмы, имеющая тенденцию к снижению в течение срока наблюдения - содержание в ней АГП уменьшилось с 1,53±0,26 Д233/1 мл до 1,42±0,31 Д233/1 мл, ТБК-активных продуктов с 3,62±0,12 мкмоль/л до 3,48±0,24 мкмоль/л. Это сопровождалось тенденцией к росту АОА плазмы с 32,0±0,42% на 1-2 сутки до 33,4±0,28% на 9-10 сутки.

В течение фазы новорожденности у телят отмечена тенденция к повышению спонтанной агрегации эритроцитов, о чем судили по наклонности к увеличению суммарного количества эритроцитов в агрегате (на 4,7%), нарастанию количества самих агрегатов (на 2,5%) и понижению числа свободно лежащих красных кровяных телец (на 2,4%).

На фоне временной венозной окклюзии у телят в течение новорожденности суммарное количество эритроцитов в агрегатах за первые 10 суток жизни сократилось на 3,1%, число этих агрегатов уменьшилось на 2,8%, что сопровождалось увеличением числа свободных эритроцитов на 1,7%, обеспечив тенденцию к повышению ИКССЭА, ИКСКЭА и ИКСКСЭ (табл. 1).

Таблица 1. Антиагрегационный контроль сосудистой стенки у новорожденных телят

Показатель	Фаза новорожденности, n=32, M±m
	1-2 сут.	3-4 сут.	5-6 сут.	7-8 сут.	9-10 сут.
ИКССЭА	1,17±,007	1,19±0,006	1,21±0,004	1,24±0,009	1,27±0,007
ИКСКЭА	1,11±0,004	1,12±0,006	1,14±0,008	1,16±0,005	1,17±0,003
ИКСКСЭ	1,18±0,012	1,19±0,009	1,20±0,010	1,21±0,006	1,23±0,009
ИААСС с АДФ	1,59±0,006	1,60±0,005	1,62±0,007	1,64±0,005	1,65±0,004
ИААССс коллагеном	1,56±0,004	1,58±0,005	1,59±0,007	1,60±0,005	1,62±0,008
ИААССс тромбином	1,50±,006	1,50±0,004	1,51±0,008	1,52±0,004	1,53±0,006
ИААССс ристомицином	1,49±0,005	1,50±0,006	1,50±0,009	1,51±0,007	1,52±0,004
ИААССс адреналином	1,62±0,003	1,62±0,006	1,63±0,005	1,64±0,004	1,64±0,008
ИААСС с АДФ и адреналином	1,37±0,008	1,38±0,005	1,38±0,007	1,40±0,002	1,40±0,004
ИААСС с АДФ и коллагеном	1,29±0,007	1,30±0,004	1,30±0,003	1,31±0,004	1,32±0,006
ИААССс адреналином и коллагеном	1,47±0,006	1,48±0,005	1,48±0,007	1,49±0,004	1,50±0,003
ИТССАН с лектином	1,20±0,006	1,22±0,005	1,23±0,006	1,24±0,008	1,26±0,008
ИТССАН с конканавалином А	1,22±0,005	1,24±0,007	1,24±0,008	1,25±0,007	1,26±0,004
ИТССАН с фитогемагглю- тиноном	1,16±0,005	1,17±0,006	1,18±0,007	1,19±0,004	1,20±0,005

Примечание: достоверности динамики учитываемых показателей не получено.

У всех телят в течение новорожденности отмечена тенденция к усилению агрегации тромбоцитов. В пробе с временной венозной окклюзией их агрегация отмечена тенденция к замедлению АТ. Это указывало у наблюдаемых телят на постепенное усиление у них контроля стенки сосуда над тромбоцитарной агрегацией, что подтверждалось найденной тенденцией к увеличению ИААСС, достигших у телят к 9-10 суткам жизни: для адреналина 1,64±0,008, для АДФ 1,65±0,004, для коллагена 1,62±0,008 , для тромбина 1,53±0,006, для ристомицина 1,52±0,004. Из данных таблицы 1 видно, что при сочетанном применении индукторов индексы антиагрегационной активности сосудистой стенки также имели склонность к увеличению.

В течение новорожденности у телят отмечена тенденция к усилению агрегации нейтрофилов. В пробе с временной венозной окклюзией их агрегация также имела наклонность к усилению в отношении всех испытанных индукторов, что обусловило тенденцию к повышению ИТССАН для лектина на 5,0%, для конканавалина А на 3,3%, для фитогемагглютинина на 3,4%.

Таким образом, у новорожденных телят отмечается тенденция к росту способности к агрегации форменных элементов крови и увеличению сдерживающего контроля над нею со стороны сосудистой стенки.

Обсуждение. Большое значение в обеспечении реологических свойств крови у телят в течение новорожденности принадлежит агрегации форменных элементов крови [7]. Стабильно высокая АОА плазмы обеспечивает невыраженную в ней активность ПОЛ [1, 2]. Выявленная у новорожденных телят низкая интенсивность свободнорадикальных процессов в плазме способствует незначительности перестроек в мембранах эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов, которые в данных условиях сохраняют невысокую агрегабельность при выраженной функциональной активности эндотелиоцитов.

В течение всей новорожденности отмечена тенденция к усилению агрегационной активности эритроцитов, достоверно понижающейся в пробе с временной венозной окклюзией. Очевидно, нормальная агрегация эритроцитов у телят in vivo во многом обеспечена высокой дезагрегирующей способности сосудистой стенки при одновременно оптимальной электроотрицательности поверхности эритроцитов за счет нарастания количества на их мембране отрицательно заряженных протеинов [12]. Эффективный контроль над генерацией активных форм кислорода обеспечивает минимизацию оксидативных повреждений данных белков мембраны и глобулярных протеинов плазмы, способных связывать эритроциты между собой в уже образовавшихся агрегатах [3, 4]. Высокий контроль сосудистой стенки над агрегацией эритроцитов, очевидно, имеет в своей основе повышенную концентрацию в крови новорожденных телят простацик-лина и NO, поддерживающих в красных кровяных тельцах оптимум активности аденилатциклазы и фосфодиэстеразы, обеспечивающих физиологическое соотношение в их цитоплазме количества циклического АМФ и Са2+.

Выраженное торможение АТ и тенденция к повышению чувствительности тромбоцитов, в т.ч. к дезагрегирующим воздействиям со стороны сосудистой стенки у телят в течение первых 10 суток жизни имеет во многом в своей основе оптимальность выработки в эндотелии простациклина [18] и ЫО во многом вследствие невыраженности ПОЛ плазмы [19]. Невысокая АТ в ответ на ристомицин у телят была обусловлена неактивной выработкой в эндотелии сосудов фактора Виллебранда. Стабильная длительность АТ с сочетаниями индукторов и количества агрегатов тромбоцитов в крови телят до и после венозной окклюзии указывала на постоянство нормальных сосудисто-тром-боцитарных взаимодействий у животных в течение первых 10 суток жизни в условиях близких к реальным [17].

Нормальная агрегация нейтрофилов, полученная у наблюдаемых телят, видимо, связана с высокими антиагрегационными возможностями сосудов, сочетающимися с оптимумом состава гликопро-теиновых рецепторов лейкоцитов и их чувствительности к лектинам, использованным в качестве индукторов. Слабая тенденция к росту лектин- и конканавалин А-индуцированной агрегации нейтрофилов у новорожденных телят обеспечивалась тенденцией к усилению экспрессии рецепторов адгезии и увеличением в их составе участков, содержащих N-ацетил-Э-глюкозамин, N-ацетил-нейраминовую кислоту и маннозу. Тенденция к росту индуцированной фитогемагглю-тинином агрегации обеспечивалось склонностью к нарастанию в их рецепторах участков гликопротеинов, содержащих bD-галактозу при эффективном сдерживании высокой выработкой в сосудах животных простациклина и NO.

Заключение. У новорожденных телят выявляется тенденция к усилению агрегации форменных элементов крови. Для телят в течение новорожденности характерно усиление дезагрегирующего контроля со стороны сосудистой стенки над агрегационными свойствами эритроцитов, тромбоцитов и нейтрофилов.

Список литературы:

1. Волчегорский И.А. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакций организма / И.А. Волчегорский, И.И. Долгушин, О.Л. Колесников. - Челябинск, 2000. -167с.
2. Гаврилов В.Б. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови / В.Б. Гаврилов, М.И. Мишкорудная // Лабораторное дело. -1983.- N°3.- С.33-36.
3. Завалишина С.Ю. Контроль сосудистой стенки над индуцированной агрегацией тромбоцитов у новорожденных телят в условиях дефицита железа / С.Ю. Завалишина, Т.И. Глаголева // Ветеринарная практика. -2013.- N°2(61).-С.40-42.
4. Завалишина С.Ю. Антиагрегационные возможности сосудов у новорожденных телят с дефицитом железа на фоне ферроглюкина и гамавита / С.Ю. Завалишина, Т.И. Глаголева, И.Н. Медведев // Теоретические и прикладные проблемы агропромышленного комплекса.- 2013.- N°2(15).- С.3-5.
5. Завалишина С.Ю. Гемостатическая активность сосудов у новорожденных телят с дефицитом железа на фоне применения ферроглюкина и крезаци-на / С.Ю. Завалишина, Т.И. Глаголева, И.Н. Медведев // Ветеринария. -2013. -N°6.- С.47-49.
6. Кутафина Н.В. Механизмы функционирования сосудистого гемостаза / Н.В. Кутафина // Международный научно-исследовательский журнал. -2012.-N°5-3(5).- С.64-65.
7. Кутафина Н.В. Механизмы функционирования сосудисто-тромбоци-тарного гемостаза / Н.В. Кутафина, С.Ю. Завалишина // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия "Экология и безопасность жизнедеятельности". -2012.- N°1.- С.30-37.
8. Кутафина Н.В. Агрегация эритроцитов и тромбоцитов у молодняка крупного рогатого скота в первые 10 суток жизни / Н.В. Кутафина, Т.А. Белова // Магистр KZ. -2014.- N°10.- С.16-18.
9. Кощаев А.Г. Использование биотехнологических методов воспроизводства для повышения экономической эффективности производства говядины / А.Г. Кощаев, И.В. Щукина // Ветеринария Кубани.-2014.-N°5.-С.17-21.
10. Махаринец Г.Г. Морфологические показатели крови телят, содержавшихся на режимном подсосе/ Г.Г. Махаринец, В.И. Добрелин// Ветеринарная патология. - 2012. - N° 3. - С. 73-77.
11. Медведев И.Н. Особенности системы гемостаза коров в течение стельности /И.Н. Медведев, С.Ю. Завалишина // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. -2014.- N°6.- С.44-47.
12. Медведев И.Н. Методические подходы к оценке агрегации и поверхностных свойств тромбоцитов и эритроцитов / И.Н. Медведев, С.Ю. Завалиши-на, Е.Г. Краснова, Н.В. Кутафина // Фундаментальные исследования. -2014. -N°10.- С.117-120.
13. Медведев И.Н. Физиология висцеральных систем (учебник для вузов) / И.Н. Медведев И.Н., С.Ю. Завалишина, Н.В. Кутафина // Успехи современного естествознания. -2014.- N°10.- С.87-88.
14. Максимов В.И. Сравнительная оценка тромбоцитарных функций в раннем онтогенезе у телят и поросят / В.И. Максимов, И.Н. Медведев // Ветеринария. -2008.- N°11. -С.50-54.
15. Максимов В.И. Особенности антикоагуляционной и фибринолитичес-кой активности крови у здоровых поросят молочного питания / В.И. Максимов, И.Н. Медведев, А.В. Парахневич // Ветеринария, зоотехния и биотехнология.-2014. -N°1.- С.12-16.
16. Эффективность применения р-адреноблокатора анаприлина для предотвращения критической потери живой массы новотельных коров /А.Г. Кощаев, А.В. Лихоман, В.В. Усенко, Л.И. Баюров // Ветеринария Кубани.-2014.-N°4. -С.22-25.
17. Medvedev I.N. Activity of platelet hemostasis in newborn calves / I.N. Medvedev, S.Yu. Zavalishina // Russian Agricultural Sciences.-2011.-vol.37, N°5.-Р.404-406.
18. Moncada S. Prostacyclin and blood coagulation / S. Moncada, J.R. Vane // Drugs. - 2001. - Vol. 21, N°6. - P.430-437.
19. Tschudi M.R. Nitric oxide: the endogenous nitrate in the cardiovascular system /M.R. Tschudi, T.F. Luscher // Herz. - 2005.- Vol.21. - P. 50-60.

Резюме. Необходимость интенсификации производства говядины остро диктует необходимость дальнейших исследований в области физиологии крупного рогатого скота в течение всего онтогенеза. Особое внимание в этой связи привлекает к себе кровь, состоящая из форменных элементов и плазмы, непрерывно перемещающаяся по сосудам животного, обеспечивающая газообмен, доставку тканям питательных и биологически активных веществ, а также удаление из них токсических веществ и шлаков. Успешность гемоциркуляции, существенно определяющая общий физиолого-биологический статус животного, во многом связана с особенностями агрегации форменных элементов крови и выраженностью контроля над нею со стороны сосудистой стенки в течение всего онтогенеза. Цель - установить выраженность антиагрегационных возможностей влияния сосудов на форменные элементы крови у телят в течение фазы новорожденности. Исследование выполнено на 32 телятах черно-пестрой породы, взятых в исследование на 1-2 сутки жизни. Обследование проводилось в течение фазы новорожденности пятикратно - на 1-2, 3-4, 5-6, 7-8 и 9-10 сутки жизни с применением биохимических, гематологических и статистических методов исследования. В течение всей новорожденности у телят отмечена тенденция к усилению агрегационной активности эритроцитов при высокой выраженности дезагрегирующего контроля над ними сосудистой стенки. Это сочеталось у наблюдаемых животных с невысокой агрегацией тромбоцитов при тенденции к повышению их чувствительности к дезагрегирующим воздействиям сосудистой стенки. Невысокая агрегация нейтрофилов у телят молозивного питания эффективно сдерживалась выраженной антиагрегационной активностью сосудов.

Таким образом, для новорожденных телят характерен физиологически оправданный баланс агрегации форменных элементов крови и дезагрегирующего контроля над ними со стороны сосудистой стенки.

Ключевые слова: молозивное питание, фаза новорожденности, телята, онтогенез, сосудистая стенка, агрегация, антиагрегация, эритроциты, тромбоциты, лейкоциты, агрегаты, физиологические дезагреганты.

Сведения об авторе: Глаголева Татьяна Ивановна, кандидат биологических наук, соискатель кафедры адаптивной физической культуры и медико-биологических наук Курского института социального образования (филиала) ФГБОУ ВПО "Российский государственный социальный университет"; 305047, г. Курск, ул. Дейнеки, д. 32а, кв. 12; тел. 8(910)273-22-63; e-mail: ilmedv1@yandex.ru - ответственный за переписку с редакцией.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей