Глаголева Т.И. Курский институт социального образования (филиал)
ФГБОУ ВПО "Российский государственный социальный университет", г. Курск
Введение. Необходимость интенсификации производства говядины остро диктует необходимость дальнейших исследований в области физиологии крупного рогатого скота в течение всего онтогенеза [9]. Особое внимание в этой связи привлекает к себе кровь, состоящая из форменных элементов и плазмы, непрерывно перемещающаяся по сосудам животного, обеспечивающая газообмен, доставку тканям питательных и биологически активных веществ, а также удаление из них токсических веществ и шлаков [15]. Успешность гемоциркуляции, существенно определяющая общий физиолого-биологический статус животного [16], во многом связана с особенностями агрегации форменных элементов крови [8] и выраженностью контроля над нею со стороны сосудистой стенки в течение всего онтогенеза [10, 13, 14]. Замечено, что избыточная агрегация эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов может нарушать метаболические процессы и тормозить развитие животных [3,6]. В этой связи становится актуальным определение состояния сосудистого контроля над агрегацией форменных элементов крови у телят в самом начале онтогенеза - в фазу новорожденности [11]. В этом нуждается не только фундаментальная наука, но и практика, так как необходимо выяснение выраженности антиагрегационных нарушений сосудов у новорожденных телят при отдельных заболеваниях [4], оценка степени их динамики при применении различных подходов к коррекции состояния животных [5], возможные только при знании нормативных показателей в отношении основных форменных элементов крови.
В работе поставлена цель - установить выраженность антиагре-гационных возможностей влияния сосудов на форменные элементы крови у телят в течение фазы новорожденности.
Материалы и методы. Исследование выполнено на 32 телятах черно-пестрой породы, взятых в исследование на 1-2 сутки жизни. Обследование проводилось в течение фазы новорожденности пятикратно - на 1-2, 3-4, 5-6, 7-8 и 9-10 сутки жизни.
Выраженность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме оценивалась по содержанию тиобарбитуровой кислоты (ТБК)-активных продуктов набором "Агат-Мед" и ацилгидропереки-сей (АГП) [2]. Антиокислительный потенциал жидкой части крови определялся по её антиокислительной активности (АОА) [1].
Сосудистый контроль над агрегацией форменных элементов крови определяли по её ослаблению в пробе с временной венозной окклюзией. Выраженность агрегации эритроцитов до и после временной ишемии стенки сосуда определяли с помощью светового микроскопа в камере Горяева, регистрируя количество агрегатов эритроцитов, число агрегированных и неагрегированных эритроцитов [12]. У всех телят путем деления суммы всех эритроцитов в агрегатах на величину этой суммы на фоне временной венозной окклюзии рассчитывался индекс контроля сосудов над суммой эритроцитов в агрегате (ИКССЭА), в результате деления количества агрегатов без временной венозной окклюзии на их количество на фоне временной венозной окклюзии определяли индекс контроля сосудов над количеством эрит-роцитарных агрегатов (ИКСКЭА) и в ходе деления количества свободных эритроцитов на фоне временной венозной окклюзии на количество свободных эритроцитов без нее высчитывалась величина индекса контроля сосудов над количеством свободных эритроцитов (ИКСКСЭ).
Агрегацию тромбоцитов (АТ) оценивали с помощью визуального микрометода оценки АТ [12] до и после венозной окклюзии с применением АДФ (0,5*10-4 М), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125 ед/мл), ристомицина (0,8 мг/мл), адреналина (5,0*10-6 М) и перекиси водорода (7,3*10-3 М) и богатой тромбоцитами плазмы со стандартизированным количеством тромбоцитов - 200*109. Индекс антиагрегационной активности сосудистой стенки (ИААСС) выявляли при делении времени развития АТ после венозной окклюзии на время без нее.
Ограничивающее влияние сосудов на процесс агрегации ней-трофилов в плазме, полученной после наложения манжетки и без нее, оценивалась способность этих клеток к агрегации на фотоэлектроколориметре. В качестве индукторов применены лектин зародыша пшеницы в дозе 32 мкг/мл, конканавалин А - 32 мкг/мл и фитогемагглю-тинин - 32 мкг/мл. У всех телят рассчитывался индекс торможения сосудистой стенкой агрегации нейтрофилов (ИТССАН) путем деления величины агрегации нейтрофилов в плазме, полученной без манжетки на ее величину в плазме, взятой с наложением манжетки.
Статистическая обработка полученных результатов велась t-критерием Стьюдента.
Результаты исследований. У телят отмечена невысокая активность ПОЛ плазмы, имеющая тенденцию к снижению в течение срока наблюдения - содержание в ней АГП уменьшилось с 1,53±0,26 Д233/1 мл до 1,42±0,31 Д233/1 мл, ТБК-активных продуктов с 3,62±0,12 мкмоль/л до 3,48±0,24 мкмоль/л. Это сопровождалось тенденцией к росту АОА плазмы с 32,0±0,42% на 1-2 сутки до 33,4±0,28% на 9-10 сутки.
В течение фазы новорожденности у телят отмечена тенденция к повышению спонтанной агрегации эритроцитов, о чем судили по наклонности к увеличению суммарного количества эритроцитов в агрегате (на 4,7%), нарастанию количества самих агрегатов (на 2,5%) и понижению числа свободно лежащих красных кровяных телец (на 2,4%).
На фоне временной венозной окклюзии у телят в течение новорожденности суммарное количество эритроцитов в агрегатах за первые 10 суток жизни сократилось на 3,1%, число этих агрегатов уменьшилось на 2,8%, что сопровождалось увеличением числа свободных эритроцитов на 1,7%, обеспечив тенденцию к повышению ИКССЭА, ИКСКЭА и ИКСКСЭ (табл. 1).
Таблица 1. Антиагрегационный контроль сосудистой стенки у новорожденных телят
Показатель | Фаза новорожденности, n=32, M±m | ||||
---|---|---|---|---|---|
1-2 сут. | 3-4 сут. | 5-6 сут. | 7-8 сут. | 9-10 сут. | |
ИКССЭА | 1,17±,007 | 1,19±0,006 | 1,21±0,004 | 1,24±0,009 | 1,27±0,007 |
ИКСКЭА | 1,11±0,004 | 1,12±0,006 | 1,14±0,008 | 1,16±0,005 | 1,17±0,003 |
ИКСКСЭ | 1,18±0,012 | 1,19±0,009 | 1,20±0,010 | 1,21±0,006 | 1,23±0,009 |
ИААСС с АДФ | 1,59±0,006 | 1,60±0,005 | 1,62±0,007 | 1,64±0,005 | 1,65±0,004 |
ИААССс коллагеном | 1,56±0,004 | 1,58±0,005 | 1,59±0,007 | 1,60±0,005 | 1,62±0,008 |
ИААССс тромбином | 1,50±,006 | 1,50±0,004 | 1,51±0,008 | 1,52±0,004 | 1,53±0,006 |
ИААССс ристомицином | 1,49±0,005 | 1,50±0,006 | 1,50±0,009 | 1,51±0,007 | 1,52±0,004 |
ИААССс адреналином | 1,62±0,003 | 1,62±0,006 | 1,63±0,005 | 1,64±0,004 | 1,64±0,008 |
ИААСС с АДФ и адреналином | 1,37±0,008 | 1,38±0,005 | 1,38±0,007 | 1,40±0,002 | 1,40±0,004 |
ИААСС с АДФ и коллагеном | 1,29±0,007 | 1,30±0,004 | 1,30±0,003 | 1,31±0,004 | 1,32±0,006 |
ИААССс адреналином и коллагеном | 1,47±0,006 | 1,48±0,005 | 1,48±0,007 | 1,49±0,004 | 1,50±0,003 |
ИТССАН с лектином | 1,20±0,006 | 1,22±0,005 | 1,23±0,006 | 1,24±0,008 | 1,26±0,008 |
ИТССАН с конканавалином А | 1,22±0,005 | 1,24±0,007 | 1,24±0,008 | 1,25±0,007 | 1,26±0,004 |
ИТССАН с фитогемагглю- тиноном | 1,16±0,005 | 1,17±0,006 | 1,18±0,007 | 1,19±0,004 | 1,20±0,005 |
Примечание: достоверности динамики учитываемых показателей не получено.
У всех телят в течение новорожденности отмечена тенденция к усилению агрегации тромбоцитов. В пробе с временной венозной окклюзией их агрегация отмечена тенденция к замедлению АТ. Это указывало у наблюдаемых телят на постепенное усиление у них контроля стенки сосуда над тромбоцитарной агрегацией, что подтверждалось найденной тенденцией к увеличению ИААСС, достигших у телят к 9-10 суткам жизни: для адреналина 1,64±0,008, для АДФ 1,65±0,004, для коллагена 1,62±0,008 , для тромбина 1,53±0,006, для ристомицина 1,52±0,004. Из данных таблицы 1 видно, что при сочетанном применении индукторов индексы антиагрегационной активности сосудистой стенки также имели склонность к увеличению.
В течение новорожденности у телят отмечена тенденция к усилению агрегации нейтрофилов. В пробе с временной венозной окклюзией их агрегация также имела наклонность к усилению в отношении всех испытанных индукторов, что обусловило тенденцию к повышению ИТССАН для лектина на 5,0%, для конканавалина А на 3,3%, для фитогемагглютинина на 3,4%.
Таким образом, у новорожденных телят отмечается тенденция к росту способности к агрегации форменных элементов крови и увеличению сдерживающего контроля над нею со стороны сосудистой стенки.
Обсуждение. Большое значение в обеспечении реологических свойств крови у телят в течение новорожденности принадлежит агрегации форменных элементов крови [7]. Стабильно высокая АОА плазмы обеспечивает невыраженную в ней активность ПОЛ [1, 2]. Выявленная у новорожденных телят низкая интенсивность свободнорадикальных процессов в плазме способствует незначительности перестроек в мембранах эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов, которые в данных условиях сохраняют невысокую агрегабельность при выраженной функциональной активности эндотелиоцитов.
В течение всей новорожденности отмечена тенденция к усилению агрегационной активности эритроцитов, достоверно понижающейся в пробе с временной венозной окклюзией. Очевидно, нормальная агрегация эритроцитов у телят in vivo во многом обеспечена высокой дезагрегирующей способности сосудистой стенки при одновременно оптимальной электроотрицательности поверхности эритроцитов за счет нарастания количества на их мембране отрицательно заряженных протеинов [12]. Эффективный контроль над генерацией активных форм кислорода обеспечивает минимизацию оксидативных повреждений данных белков мембраны и глобулярных протеинов плазмы, способных связывать эритроциты между собой в уже образовавшихся агрегатах [3, 4]. Высокий контроль сосудистой стенки над агрегацией эритроцитов, очевидно, имеет в своей основе повышенную концентрацию в крови новорожденных телят простацик-лина и NO, поддерживающих в красных кровяных тельцах оптимум активности аденилатциклазы и фосфодиэстеразы, обеспечивающих физиологическое соотношение в их цитоплазме количества циклического АМФ и Са2+.
Выраженное торможение АТ и тенденция к повышению чувствительности тромбоцитов, в т.ч. к дезагрегирующим воздействиям со стороны сосудистой стенки у телят в течение первых 10 суток жизни имеет во многом в своей основе оптимальность выработки в эндотелии простациклина [18] и ЫО во многом вследствие невыраженности ПОЛ плазмы [19]. Невысокая АТ в ответ на ристомицин у телят была обусловлена неактивной выработкой в эндотелии сосудов фактора Виллебранда. Стабильная длительность АТ с сочетаниями индукторов и количества агрегатов тромбоцитов в крови телят до и после венозной окклюзии указывала на постоянство нормальных сосудисто-тром-боцитарных взаимодействий у животных в течение первых 10 суток жизни в условиях близких к реальным [17].
Нормальная агрегация нейтрофилов, полученная у наблюдаемых телят, видимо, связана с высокими антиагрегационными возможностями сосудов, сочетающимися с оптимумом состава гликопро-теиновых рецепторов лейкоцитов и их чувствительности к лектинам, использованным в качестве индукторов. Слабая тенденция к росту лектин- и конканавалин А-индуцированной агрегации нейтрофилов у новорожденных телят обеспечивалась тенденцией к усилению экспрессии рецепторов адгезии и увеличением в их составе участков, содержащих N-ацетил-Э-глюкозамин, N-ацетил-нейраминовую кислоту и маннозу. Тенденция к росту индуцированной фитогемагглю-тинином агрегации обеспечивалось склонностью к нарастанию в их рецепторах участков гликопротеинов, содержащих bD-галактозу при эффективном сдерживании высокой выработкой в сосудах животных простациклина и NO.
Заключение. У новорожденных телят выявляется тенденция к усилению агрегации форменных элементов крови. Для телят в течение новорожденности характерно усиление дезагрегирующего контроля со стороны сосудистой стенки над агрегационными свойствами эритроцитов, тромбоцитов и нейтрофилов.
Список литературы:
Резюме. Необходимость интенсификации производства говядины остро диктует необходимость дальнейших исследований в области физиологии крупного рогатого скота в течение всего онтогенеза. Особое внимание в этой связи привлекает к себе кровь, состоящая из форменных элементов и плазмы, непрерывно перемещающаяся по сосудам животного, обеспечивающая газообмен, доставку тканям питательных и биологически активных веществ, а также удаление из них токсических веществ и шлаков. Успешность гемоциркуляции, существенно определяющая общий физиолого-биологический статус животного, во многом связана с особенностями агрегации форменных элементов крови и выраженностью контроля над нею со стороны сосудистой стенки в течение всего онтогенеза. Цель - установить выраженность антиагрегационных возможностей влияния сосудов на форменные элементы крови у телят в течение фазы новорожденности. Исследование выполнено на 32 телятах черно-пестрой породы, взятых в исследование на 1-2 сутки жизни. Обследование проводилось в течение фазы новорожденности пятикратно - на 1-2, 3-4, 5-6, 7-8 и 9-10 сутки жизни с применением биохимических, гематологических и статистических методов исследования. В течение всей новорожденности у телят отмечена тенденция к усилению агрегационной активности эритроцитов при высокой выраженности дезагрегирующего контроля над ними сосудистой стенки. Это сочеталось у наблюдаемых животных с невысокой агрегацией тромбоцитов при тенденции к повышению их чувствительности к дезагрегирующим воздействиям сосудистой стенки. Невысокая агрегация нейтрофилов у телят молозивного питания эффективно сдерживалась выраженной антиагрегационной активностью сосудов.
Таким образом, для новорожденных телят характерен физиологически оправданный баланс агрегации форменных элементов крови и дезагрегирующего контроля над ними со стороны сосудистой стенки.
Ключевые слова: молозивное питание, фаза новорожденности, телята, онтогенез, сосудистая стенка, агрегация, антиагрегация, эритроциты, тромбоциты, лейкоциты, агрегаты, физиологические дезагреганты.
Сведения об авторе: Глаголева Татьяна Ивановна, кандидат биологических наук, соискатель кафедры адаптивной физической культуры и медико-биологических наук Курского института социального образования (филиала) ФГБОУ ВПО "Российский государственный социальный университет"; 305047, г. Курск, ул. Дейнеки, д. 32а, кв. 12; тел. 8(910)273-22-63; e-mail: ilmedv1@yandex.ru - ответственный за переписку с редакцией.
http://vetkuban.com/num3_201504.html