Определение бактерицидных свойств нового дезинфицирующего средства Эковет-А на основе хлоркислородных и гидропероксидных соединений

УДК 619:615.356):616.3

Гринь В.А., Семененко М.П., Рогалева Е.В., Кузьминова Е.В., Абрамов А.А., Мирошниченко П.В.
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Краснодарский научный центр по зоотехнии
и ветеринарии», г. Краснодар
Коренев В.Н. ООО «ТОРГОВЫЙ ДОМ», г. Анапа ООО «Миг Тех», г. Москва. Краснодар

В комплексе проводимых ветеринарно-санитарных мероприятий важное место занимает дезинфекция, которая представляет собой уничтожение во внешней среде патогенных и условно патогенных микроорганизмов - возбудителей инфекционных болезней. В настоящее время в ветеринарии разработан и широко применяются большой арсенал эффективных средств дезинфекции, однако их основной компонентный состав достаточно ограничен и имеет ряд существенных недостатков, которые часто связаны с выраженной токсичностью для животных, птицы и насекомых, а также химической порчей сложного дорогостоящего оборудования, которым оснащены животноводческие и птицеводческие предприятия [2].

В этой связи поиск и разработка новых поколений дезинфектантов, не только устраняющих недостатки существующих средств санитарной обработки, но и обладающих выраженными полифункциональны-ми свойствами - санирующими, моющими, заметно улучшающими безопасность здоровья человека и животных, а также качество их жизни, является актуальной задачей ветеринарной практики.

Согласно исследовательским данным и выводам практикующих врачей установлено, что электрохимическая активация водных солевых растворов является прогрессивной и рациональной технологией, позволяющей существенно сократить материальные, энергетические и трудовые затраты на получение эффективных моющих, дезинфицирующих и других биологически активных препаратов. Важнейшим преимуществом электрохимически активированных водных растворов является то, что подобное воздействие не влечет за собой увеличения содержания ионов в растворах, не загрязняет их посторонними веществами, так как происходит исключительно благодаря обмену электронами между раствором и электродом [1, 3].

Электрохимическая активация, не изменяя существенно общего солесодержания, позволяет регулировать физико-химические и биологические свойства воды за счет изменения активности содержащихся в ней ионов и самой воды. Данные растворы обладают выраженным биоцидным действием, а также сочетают в себе одновременно дезинфицирующие и моющие свойства, не требуют смывания с поверхностей или дезактивации после применения.

Использование в производственном процессе дезинфектантов, полученных методом электрохимической активации, позволяет сократить падежи от 15 до 30 %; увеличивает конверсию кормов на 7-12 %; дает возможность значительно снизить в технологическом процессе использование антибиотиков, вплоть до их полного исключения из процесса; улучает общую микробиологическую обстановку в животноводческих и птицеводческих помещениях; обеспечивает экологическую безопасность [1, 2].

Целью наших исследований явилось изучение бактерицидной активности дезинфицирующего средства Эковет-А - препарата, полученного методом электрохимической активации жидкости в проточных электрохимических модулях при воздействии на раствор электрического поля высокой напряжённости.

Материалы и методы исследований. Объект исследования - жидкое дезинфицирующее щелочное (рН=6,0-8,0) средство с моющим эффектом Эковет-А, которое представляет собой сбалансированную смесь, состоящую из комплекса хлоркислородных и гидропероксид-ных соединений - хлорноватистой кислоты (50-95%), диоксида хлора (1-7%), пероксида водорода (3-8%), других пероксидных и супер-ок-сидных соединений (1-5%). Концентрация оксидантов в пересчете на активный хлор составляет 0,5 г/л (0,05%).

В ходе опыта для нейтрализации антимикробного действия дезинфицирующего средства Эковет-А, являющегося галоидактивным и кислородактивным соединением, применялся нейтрализатор - 0,5 % раствор тиосульфата натрия (ГОСТ 27068), исключающий остаточное антимикробное действие. Раствор нейтрализатора готовился в асептических условиях с применением стерильной дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Конечная температура раствора составила 20°С.

При изучении бактерицидной активности дезинфицирующих субстанций и дезинфицирующих средств в качестве тест-микроор-ганизмов нами были использованы: Escherichia coli (штамм 1257); Pseudomonas aeruginosa (штамм АТСС 27853); Staphylococcus aureus (штамм 906) - для оценки бактерицидной активности в отношении грамположительных бактерий.

Использованные в опыте тест-микроорганизмы имели характерные биохимические, морфологические, тинкториальные, культуральные и ферментативные свойства, присущие данному виду и обладали стандартной устойчивостью к эталонным дезинфицирующим средствам. Перед изучением бактерицидной активности дезинфицирующего средства Эковет-А культуры тест-микроорганизмов подвергались контролю качества - визуально просматривалась каждая пробирка для учета характера и массивности роста.

Перед проведением опыта предварительно была приготовлена бактериальная суспензия (взвесь) из золотистого стафилококка и кишечной палочки, которая засевалась на скошенный МПА и выращивалась в термостате при 37±1°С в течение 24 часов. Кроме того, суточная бульонная культура сенной палочки заранее высевалась на скошенный МПА в пробирках. Далее, в течение 48 часов пробирки помещались в термостат при 37±1°С, затем в течение 6 дней хранились при 12-18°С в темноте. Контроль культуры сенной палочки проверялся на спорообразование под микроскопом.

Бактериальную суспензию (взвесь) культур смывали стерильным 0,9% раствором хлорида натрия, затем полученную взвесь бактерий фильтровали через стерильный ватно-марлевый фильтр и разводили до концентрации, соответствующей по мутности 20 единицам мутности отраслевого стандартного образца ОСО 42-28-84-11 (20 ME) или 6 единицам Мак-Фарланда, определяемых с помощью денситометра.

Так как разработанное дезинфицирующее средство Эковет-А предназначено для санации животноводческих, птицеводческих помещений и прочих объектов ветеринарного надзора, для опыта согласно ГОСТ Р 58151.4-2018 (Средства дезинфицирующие. Методы определения показателей эффективности) подбирались материалы и тест-микроорганизмы, наиболее часто встречающиеся на данных объектах - дерево, окрашенное масляной краской; железо, линолеум, пластик, кафельная плитка, которые перед контаминацией тест-культурой подвергались механической очистке - мытью водой с мылом и щеткой размером 5х5см.

Тест-поверхности помещались на дно стерильной чашки Петри и них пипеткой наносилось по 0,1 мл 2-миллиардной микробной взвеси (площадь поверхности 25 см), которая равномерно распределялась по тест-поверхности стерильным шпателем, не допуская отекания суспензии за пределы тест-объекта.

Далее тест-поверхности подсушивались с приоткрытой крышкой чашки Петри (до полного высыхания) при температуре +18-22°С и относительной влажности 40-60 %, после чего обрабатывались раствором препарата Эковет-А способом крупнокапельного орошения с помощью дозатора на поверхность размером 5*5 см в объеме 3,0 мл.

Экспозиция обеззараживания поверхностей определялась в интервале от 15 до 60 мин. (выбор времени обеззараживания зависит от назначения и рекомендуемых условий применения дезинфицирующего средства).

Так как в состав разработанного дезинфицирующего средства Эковет-А входят соединения хлора, являющиеся поверхностно-активным окислителями, то такой препарат, по литературным данным [4] должен действовать бактерицидно на патогенную микрофлору менее чем за 60 мин (в среднем экспозиция составляет 30...60 минут).

Контрольные поверхности вместо обработки дезинфицирующим средством Эковет-А обрабатывались стерильной водопроводной водой по той же схеме, что и опытные. Исследования проводили при температуре окружающей среды +18-20°С.

По окончании экспозиции чашки с тест-объектами заливались 10 мл 0,5 % раствора тиосульфата натрия (нейтрализатор) с последующими круговыми движениями чашки для лучшего смачивания тест-объектов. Через несколько минут тест-объекты переворачивались стерильным пинцетом и круговые движения повторялись.

После контакта нейтрализатора с тест-объектами в течение 10 мин они удалялись стерильным пинцетом из чашек и помещались в емкость с дезинфицирующим раствором с целью дальнейшего обеззараживания.

Далее, нейтрализатор из чашек Петри высевался (на 2 чашки по 0,1-0,2 мл в каждую) на твердые дифференциально-диагностические питательные среды. Затем посевы для выращивания помещались в термостат при температуре 37±1°С.

Учет результатов проводился в течение 1 суток путем подсчета количества выросших колоний.

Затем рассчитывался процент обеззараживания, принимая количество колоний, снятых с контрольных поверхностей, за 100 %. Критерием эффективности обеззараживания поверхности являлась гибель не менее 99,99% тест-микроорганизмов

Результаты исследований и их обсуждение. В ходе проведения исследований было установлено, что обработка тест-объектов дезинфицирующим средством Эковет-А в экспозиции 15 минут оказала недостаточный дезинфицирующий эффект в отношении штаммов тест-микроорганизмов (E.coli, St. aureus и P. aeruginosa). Однако рост микроорганизмов в этот временной период был незначительным и не превышал 5 колоний, тогда как при экспозиции 30 и 60 минут отмечался выраженный бактерицидный эффект (табл. 1).

Таблица 1 Эффективность обеззараживания обработанных дезинфицирующим средством Эковет-А поверхностей в зависимости от тест-поверхностей и времени экспозиции, %

Возбуди­тели	Экспо­зиция, мин	№ пробы	Обработанные поверхности
			лино­леум	пластик	железо	дерево	плитка
Escheri­chia coli	15	1.1.1	95,12	95,23	93,18	93,02	90,90
		1.1.2	92,68	97,62	93,18	90,70	95,45
	30	1.2.1	100	100	100	98,6	100
		1.2.2	100	100	100	98,9	100
	60	1.3.1	100	100	100	100	100
		1.3.2	100	100	100	100	100
Staphylo­coccus aureus	15	1.4.1	93,33	97,67	95,45	93,33	95,24
		1.4.2	95,56	93,02	90,91	91,11	92,86
	30	1.5.1	100	100	100	100	100
		1.5.2	100	100	100	100	100
	60	1.6.1	100	100	100	100	100
		1.6.2	100	100	100	100	100
Pseudo­mon asaeru- ginosa	15	1.7.1	95,24	95,45	89,13	95,45	93,02
		1.7.2	90,48	93,18	91,30	90,91	90,70
	30	1.8.1	100	100	100	100	100
		1.8.2	100	100	100	100	100
	60	1.9.1	100	100	100	100	100
		1.9.2	100	100	100	100	100

При этом рост тест-культур (Escherichia coli, Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa) полностью прекращался, обуславливая 100 % эффект при проведении дезинфекции различныхтест-поверх-ностей.

Заключение. В результате анализа полученных данных установлено, что новое дезинфицирующее средство Эковет-А обладает выраженной бактерицидной активностью в отношении культур тест-штам-мов Escherichia coli (штамм 1257), Pseudomonas aeruginosa (штамм АТСС 27853) и Staphylococcus aureus (штамм 906) при экспозиции 30 минут и выше и может успешно применяться для обеззараживания поверхностей в помещениях - мебели, аппаратов, приборов, санитарно-технического оборудования, транспортных средств и других объектов, контаминированных микрофлорой. Результаты тестового эксперимента позволяют нам перейти к более широким производственным испытаниям и рекомендовать приобретение Эковета-А как надежного дезинфицирующего средства для санитарной обработки предметов и инвентаря предприятиями агропромышленного комплекса, в мясной, рыбной, молочной, пищевой промышленности, на предприятиях коммунально-бытового обслуживания, учреждениях социального обеспечения, общественного питания и торговли, а также в ветеринарных клиниках.

Список литературы:

1. Ваннер Н.Э., Закомырдин А.А. Влажная дезинфекция поверхностей помещений анолитом АНК// Третий международный симпозиум. «Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности». 2001.
2. Зиборова Е.А. Применение нейтрального анолита в комплексе ветеринарно-санитарных профилактических мероприятий против кишечных инфекций новорожденных телят// Третий международный симпозиум. «Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности». 2001.
3. Каврук Л.С., Зиборова Е.А. Эффективность применения нейтрального анолита при смешанной кишечной инфекции новорожденных телят// Третий международный симпозиум. «Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности». 2001.
4. Швецов Б. Хлорные дезинфектанты и их применение в современной водоподготовке/ Б. Швецов, А.В. Козырева, С.Г. Седунов, К.А. Тараскин// Водоочистка. Водоподготовка. Водоснабжение. 2009. №3. С. 98-121.

Резюме. Материалы статьи представляют данные об изучении бактерицидной активности дезинфицирующего средства Эковета-А - препарата нового поколения, полученного методом электрохимической активации жидкости в проточных электрохимических модулях при воздействии на раствор электрического поля высокой напряжённости (электрохимическому анодное воздействие на инертном электроде). В ходе проведения исследований авторами было установлено, что обработка тест-объектов (дерево, окрашенное масляной краской; железо, линолеум, пластик, кафельная плитка) дезинфицирующим средством Эковет-А в экспозиции 15 минут оказала недостаточный дезинфицирующий эффект в отношении штаммов тест-микроорганизмов (E.coli, St. aureus и P. aeruginosa). Однако рост микроорганизмов в этот временной период был незначительным и не превышал 5 колоний, тогда как при экспозиции 30 и 60 минут отмечался выраженный бактерицидный эффект по отношению использованных в опыте тест-микроорганизмов: Escherichia coli (штамм 1257); Pseudomonas aeruginosa (штамм АТСС 27853); Staphylococcus aureus (штамм 906) - для оценки бактерицидной активности в отношении грамположительных бактерий.

Ключевые слова: дезинфицирующие средства, Эковет-А, электрохимическая активация, тест-штамм, грамположительные микроорганизмы, колонии, бактерицидная активность, экспозиция.

Сведения об авторах:

Гринь Владимир Анатольевич, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник отдела фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-918-9602932.

Рогалева Евгения Викторовна, доктор ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник отдела фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-928-2404689; e-mail: jane-tyapkina@yandex.ru.

Кузьминова Елена Васильевна, доктор ветеринарных наук, доцент, ведущий научный сотрудник отдела фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-918-4198369; е-mail: niva1430@mail.ru.

Абрамов Андрей Андреевич, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник отдела фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-902-4061527; е-mail: abramov1527@mail.ru.

Мирошниченко Петр Васильевич, кандидат ветеринарных наук, заведующий отделом эпизоотологии, микологии и ВСЭ ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-918-4470155; е-mail: mpetrvas@mail.ru.

Коренев Владимир Николаевич, соучредитель и коммерческий директор компаний ООО «ТОРГОВЫЙ ДОМ» (г. Анапа) и ООО «Миг Тех» (г. Москва); 353456, город-курорт Анапа, Анапское шоссе, 72/; 129344, г. Москва, ул. Верхоянская, 6, корп. 1, пом. III, комн. 1; тел.: 8-985-6388929; е-mail: v.n.korenev@yandex.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Семененко Марина Петровна, доктор ветеринарных наук, доцент, заведующая отделом фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-918-4612663; e-mail: sever291@mail.ru.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей