УДК 619:615.356):616.3
Гринь В.А., Семененко М.П., Рогалева Е.В., Кузьминова Е.В., Абрамов А.А., Мирошниченко П.В.
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Краснодарский научный центр по зоотехнии
и ветеринарии», г. Краснодар
Коренев В.Н. ООО «ТОРГОВЫЙ ДОМ», г. Анапа ООО «Миг Тех», г. Москва. Краснодар
В комплексе проводимых ветеринарно-санитарных мероприятий важное место занимает дезинфекция, которая представляет собой уничтожение во внешней среде патогенных и условно патогенных микроорганизмов - возбудителей инфекционных болезней. В настоящее время в ветеринарии разработан и широко применяются большой арсенал эффективных средств дезинфекции, однако их основной компонентный состав достаточно ограничен и имеет ряд существенных недостатков, которые часто связаны с выраженной токсичностью для животных, птицы и насекомых, а также химической порчей сложного дорогостоящего оборудования, которым оснащены животноводческие и птицеводческие предприятия [2].
В этой связи поиск и разработка новых поколений дезинфектантов, не только устраняющих недостатки существующих средств санитарной обработки, но и обладающих выраженными полифункциональны-ми свойствами - санирующими, моющими, заметно улучшающими безопасность здоровья человека и животных, а также качество их жизни, является актуальной задачей ветеринарной практики.
Согласно исследовательским данным и выводам практикующих врачей установлено, что электрохимическая активация водных солевых растворов является прогрессивной и рациональной технологией, позволяющей существенно сократить материальные, энергетические и трудовые затраты на получение эффективных моющих, дезинфицирующих и других биологически активных препаратов. Важнейшим преимуществом электрохимически активированных водных растворов является то, что подобное воздействие не влечет за собой увеличения содержания ионов в растворах, не загрязняет их посторонними веществами, так как происходит исключительно благодаря обмену электронами между раствором и электродом [1, 3].
Электрохимическая активация, не изменяя существенно общего солесодержания, позволяет регулировать физико-химические и биологические свойства воды за счет изменения активности содержащихся в ней ионов и самой воды. Данные растворы обладают выраженным биоцидным действием, а также сочетают в себе одновременно дезинфицирующие и моющие свойства, не требуют смывания с поверхностей или дезактивации после применения.
Использование в производственном процессе дезинфектантов, полученных методом электрохимической активации, позволяет сократить падежи от 15 до 30 %; увеличивает конверсию кормов на 7-12 %; дает возможность значительно снизить в технологическом процессе использование антибиотиков, вплоть до их полного исключения из процесса; улучает общую микробиологическую обстановку в животноводческих и птицеводческих помещениях; обеспечивает экологическую безопасность [1, 2].
Целью наших исследований явилось изучение бактерицидной активности дезинфицирующего средства Эковет-А - препарата, полученного методом электрохимической активации жидкости в проточных электрохимических модулях при воздействии на раствор электрического поля высокой напряжённости.
Материалы и методы исследований. Объект исследования - жидкое дезинфицирующее щелочное (рН=6,0-8,0) средство с моющим эффектом Эковет-А, которое представляет собой сбалансированную смесь, состоящую из комплекса хлоркислородных и гидропероксид-ных соединений - хлорноватистой кислоты (50-95%), диоксида хлора (1-7%), пероксида водорода (3-8%), других пероксидных и супер-ок-сидных соединений (1-5%). Концентрация оксидантов в пересчете на активный хлор составляет 0,5 г/л (0,05%).
В ходе опыта для нейтрализации антимикробного действия дезинфицирующего средства Эковет-А, являющегося галоидактивным и кислородактивным соединением, применялся нейтрализатор - 0,5 % раствор тиосульфата натрия (ГОСТ 27068), исключающий остаточное антимикробное действие. Раствор нейтрализатора готовился в асептических условиях с применением стерильной дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Конечная температура раствора составила 20°С.
При изучении бактерицидной активности дезинфицирующих субстанций и дезинфицирующих средств в качестве тест-микроор-ганизмов нами были использованы: Escherichia coli (штамм 1257); Pseudomonas aeruginosa (штамм АТСС 27853); Staphylococcus aureus (штамм 906) - для оценки бактерицидной активности в отношении грамположительных бактерий.
Использованные в опыте тест-микроорганизмы имели характерные биохимические, морфологические, тинкториальные, культуральные и ферментативные свойства, присущие данному виду и обладали стандартной устойчивостью к эталонным дезинфицирующим средствам. Перед изучением бактерицидной активности дезинфицирующего средства Эковет-А культуры тест-микроорганизмов подвергались контролю качества - визуально просматривалась каждая пробирка для учета характера и массивности роста.
Перед проведением опыта предварительно была приготовлена бактериальная суспензия (взвесь) из золотистого стафилококка и кишечной палочки, которая засевалась на скошенный МПА и выращивалась в термостате при 37±1°С в течение 24 часов. Кроме того, суточная бульонная культура сенной палочки заранее высевалась на скошенный МПА в пробирках. Далее, в течение 48 часов пробирки помещались в термостат при 37±1°С, затем в течение 6 дней хранились при 12-18°С в темноте. Контроль культуры сенной палочки проверялся на спорообразование под микроскопом.
Бактериальную суспензию (взвесь) культур смывали стерильным 0,9% раствором хлорида натрия, затем полученную взвесь бактерий фильтровали через стерильный ватно-марлевый фильтр и разводили до концентрации, соответствующей по мутности 20 единицам мутности отраслевого стандартного образца ОСО 42-28-84-11 (20 ME) или 6 единицам Мак-Фарланда, определяемых с помощью денситометра.
Так как разработанное дезинфицирующее средство Эковет-А предназначено для санации животноводческих, птицеводческих помещений и прочих объектов ветеринарного надзора, для опыта согласно ГОСТ Р 58151.4-2018 (Средства дезинфицирующие. Методы определения показателей эффективности) подбирались материалы и тест-микроорганизмы, наиболее часто встречающиеся на данных объектах - дерево, окрашенное масляной краской; железо, линолеум, пластик, кафельная плитка, которые перед контаминацией тест-культурой подвергались механической очистке - мытью водой с мылом и щеткой размером 5х5см.
Тест-поверхности помещались на дно стерильной чашки Петри и них пипеткой наносилось по 0,1 мл 2-миллиардной микробной взвеси (площадь поверхности 25 см), которая равномерно распределялась по тест-поверхности стерильным шпателем, не допуская отекания суспензии за пределы тест-объекта.
Далее тест-поверхности подсушивались с приоткрытой крышкой чашки Петри (до полного высыхания) при температуре +18-22°С и относительной влажности 40-60 %, после чего обрабатывались раствором препарата Эковет-А способом крупнокапельного орошения с помощью дозатора на поверхность размером 5*5 см в объеме 3,0 мл.
Экспозиция обеззараживания поверхностей определялась в интервале от 15 до 60 мин. (выбор времени обеззараживания зависит от назначения и рекомендуемых условий применения дезинфицирующего средства).
Так как в состав разработанного дезинфицирующего средства Эковет-А входят соединения хлора, являющиеся поверхностно-активным окислителями, то такой препарат, по литературным данным [4] должен действовать бактерицидно на патогенную микрофлору менее чем за 60 мин (в среднем экспозиция составляет 30...60 минут).
Контрольные поверхности вместо обработки дезинфицирующим средством Эковет-А обрабатывались стерильной водопроводной водой по той же схеме, что и опытные. Исследования проводили при температуре окружающей среды +18-20°С.
По окончании экспозиции чашки с тест-объектами заливались 10 мл 0,5 % раствора тиосульфата натрия (нейтрализатор) с последующими круговыми движениями чашки для лучшего смачивания тест-объектов. Через несколько минут тест-объекты переворачивались стерильным пинцетом и круговые движения повторялись.
После контакта нейтрализатора с тест-объектами в течение 10 мин они удалялись стерильным пинцетом из чашек и помещались в емкость с дезинфицирующим раствором с целью дальнейшего обеззараживания.
Далее, нейтрализатор из чашек Петри высевался (на 2 чашки по 0,1-0,2 мл в каждую) на твердые дифференциально-диагностические питательные среды. Затем посевы для выращивания помещались в термостат при температуре 37±1°С.
Учет результатов проводился в течение 1 суток путем подсчета количества выросших колоний.
Затем рассчитывался процент обеззараживания, принимая количество колоний, снятых с контрольных поверхностей, за 100 %. Критерием эффективности обеззараживания поверхности являлась гибель не менее 99,99% тест-микроорганизмов
Результаты исследований и их обсуждение. В ходе проведения исследований было установлено, что обработка тест-объектов дезинфицирующим средством Эковет-А в экспозиции 15 минут оказала недостаточный дезинфицирующий эффект в отношении штаммов тест-микроорганизмов (E.coli, St. aureus и P. aeruginosa). Однако рост микроорганизмов в этот временной период был незначительным и не превышал 5 колоний, тогда как при экспозиции 30 и 60 минут отмечался выраженный бактерицидный эффект (табл. 1).
Таблица 1 Эффективность обеззараживания обработанных дезинфицирующим средством Эковет-А поверхностей в зависимости от тест-поверхностей и времени экспозиции, %
| Возбудители | Экспозиция, мин | № пробы | Обработанные поверхности | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| линолеум | пластик | железо | дерево | плитка | |||
| Escherichia coli | 15 | 1.1.1 | 95,12 | 95,23 | 93,18 | 93,02 | 90,90 |
| 1.1.2 | 92,68 | 97,62 | 93,18 | 90,70 | 95,45 | ||
| 30 | 1.2.1 | 100 | 100 | 100 | 98,6 | 100 | |
| 1.2.2 | 100 | 100 | 100 | 98,9 | 100 | ||
| 60 | 1.3.1 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | |
| 1.3.2 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | ||
| Staphylococcus aureus | 15 | 1.4.1 | 93,33 | 97,67 | 95,45 | 93,33 | 95,24 |
| 1.4.2 | 95,56 | 93,02 | 90,91 | 91,11 | 92,86 | ||
| 30 | 1.5.1 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | |
| 1.5.2 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | ||
| 60 | 1.6.1 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | |
| 1.6.2 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | ||
| Pseudomon asaeru- ginosa | 15 | 1.7.1 | 95,24 | 95,45 | 89,13 | 95,45 | 93,02 |
| 1.7.2 | 90,48 | 93,18 | 91,30 | 90,91 | 90,70 | ||
| 30 | 1.8.1 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | |
| 1.8.2 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | ||
| 60 | 1.9.1 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | |
| 1.9.2 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | ||
При этом рост тест-культур (Escherichia coli, Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa) полностью прекращался, обуславливая 100 % эффект при проведении дезинфекции различныхтест-поверх-ностей.
Заключение. В результате анализа полученных данных установлено, что новое дезинфицирующее средство Эковет-А обладает выраженной бактерицидной активностью в отношении культур тест-штам-мов Escherichia coli (штамм 1257), Pseudomonas aeruginosa (штамм АТСС 27853) и Staphylococcus aureus (штамм 906) при экспозиции 30 минут и выше и может успешно применяться для обеззараживания поверхностей в помещениях - мебели, аппаратов, приборов, санитарно-технического оборудования, транспортных средств и других объектов, контаминированных микрофлорой. Результаты тестового эксперимента позволяют нам перейти к более широким производственным испытаниям и рекомендовать приобретение Эковета-А как надежного дезинфицирующего средства для санитарной обработки предметов и инвентаря предприятиями агропромышленного комплекса, в мясной, рыбной, молочной, пищевой промышленности, на предприятиях коммунально-бытового обслуживания, учреждениях социального обеспечения, общественного питания и торговли, а также в ветеринарных клиниках.
Список литературы:
Резюме. Материалы статьи представляют данные об изучении бактерицидной активности дезинфицирующего средства Эковета-А - препарата нового поколения, полученного методом электрохимической активации жидкости в проточных электрохимических модулях при воздействии на раствор электрического поля высокой напряжённости (электрохимическому анодное воздействие на инертном электроде). В ходе проведения исследований авторами было установлено, что обработка тест-объектов (дерево, окрашенное масляной краской; железо, линолеум, пластик, кафельная плитка) дезинфицирующим средством Эковет-А в экспозиции 15 минут оказала недостаточный дезинфицирующий эффект в отношении штаммов тест-микроорганизмов (E.coli, St. aureus и P. aeruginosa). Однако рост микроорганизмов в этот временной период был незначительным и не превышал 5 колоний, тогда как при экспозиции 30 и 60 минут отмечался выраженный бактерицидный эффект по отношению использованных в опыте тест-микроорганизмов: Escherichia coli (штамм 1257); Pseudomonas aeruginosa (штамм АТСС 27853); Staphylococcus aureus (штамм 906) - для оценки бактерицидной активности в отношении грамположительных бактерий.
Ключевые слова: дезинфицирующие средства, Эковет-А, электрохимическая активация, тест-штамм, грамположительные микроорганизмы, колонии, бактерицидная активность, экспозиция.
Сведения об авторах:
Гринь Владимир Анатольевич, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник отдела фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-918-9602932.
Рогалева Евгения Викторовна, доктор ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник отдела фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-928-2404689; e-mail: jane-tyapkina@yandex.ru.
Кузьминова Елена Васильевна, доктор ветеринарных наук, доцент, ведущий научный сотрудник отдела фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-918-4198369; е-mail: niva1430@mail.ru.
Абрамов Андрей Андреевич, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник отдела фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-902-4061527; е-mail: abramov1527@mail.ru.
Мирошниченко Петр Васильевич, кандидат ветеринарных наук, заведующий отделом эпизоотологии, микологии и ВСЭ ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-918-4470155; е-mail: mpetrvas@mail.ru.
Коренев Владимир Николаевич, соучредитель и коммерческий директор компаний ООО «ТОРГОВЫЙ ДОМ» (г. Анапа) и ООО «Миг Тех» (г. Москва); 353456, город-курорт Анапа, Анапское шоссе, 72/; 129344, г. Москва, ул. Верхоянская, 6, корп. 1, пом. III, комн. 1; тел.: 8-985-6388929; е-mail: v.n.korenev@yandex.ru.
Ответственный за переписку с редакцией: Семененко Марина Петровна, доктор ветеринарных наук, доцент, заведующая отделом фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-918-4612663; e-mail: sever291@mail.ru.
http://vetkuban.com/num2_202206.html