rus eng
Архив номеров / Номер 2, 2016 год Распечатать

Морфобиохимические изменения в крови собак при обработке инсектоакарицидным препаратом на основе фипронила

УДК 619:615.285:612.12:636.7

Смыслова П.Ю., Герунова Л.К. ФГБОУ ВО "Омский государственный
аграрный университет им. П.А.Столыпина", г. Омск
Толмачев В.А. УМВД России по Омской области, г. Омск

Введение. В весенне-осенний период часто регистрируются случаи инфестации служебных собак иксодовыми клещами, укусы которых ведут к развитию трансмиссивных болезней. Одними из популярных являются препараты на основе фипронила и регуляторов роста насекомых в форме капель на холку.

Фипронил - это производное пиразола, он эффективен в отношении имаго блох и клещей, считается достаточно безопасным препаратом и может быть рекомендован для щенков и котят старше восьми недель. Механизм действия заключается в блокировании рецепторов гамма-аминомасляной кислоты, что приводит к параличу членистоногих [5, 9]. По данным литературы, фипронил не в состоянии связывать надолго рецепторы хлоридных каналов млекопитающих [5]. При нанесении на кожу животных фипронил накапливается в сальных железах и длительное время сохраняет противопаразитарную активность.

Имеются сведения о том, что препараты на основе фипронила являются высокотоксичными для кроликов при нанесении на кожу и могут вызывать клинические признаки интоксикации у кошек при применении доз, предназначенных для собак [9]. Это свидетельствует о возможности резорбции фипронила в кровоток при местном применении. Несмотря на широкое использование инсектоакарицидных препаратов на основе фипронила, их побочное действие на организм млекопитающих изучено недостаточно и является актуальной проблемой ветеринарной токсикологии.

Целью нашей работы стало изучение морфобиохимических изменений в крови собак при обработке инсектоакарицидным препаратом на основе фипронила.

Материалы и методы. Экспериментальные исследования выполнены на базе кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО "Омский государственный аграрный университет" и в зональном центре кинологической службы УВД Омской области.

Исследование проведено на 10-ти клинически здоровых собаках породы немецкая овчарка в возрасте от двух до пяти лет, содержащихся в вольерах на коммерческом рационе, привитых по возрасту и подвергнутых дегельминтизации по плану. В качестве исследуемого препарата использовали Дана Ультра® для собак (ООО НПО "АПИ-САН").

Согласно инструкции по применению, в составе инсектоака-рицидного препарата Дана Ультра® для собак содержится фипронил 50 мг/мл, а также вспомогательные вещества: спирт изопропиловый 300 мг/мл, диметилформамид - 100 мг/мл, кислота лимонная - 1 мг/мл и полиэтиленгликоль до 1 мл. Вспомогательные вещества улучшают проникновение фипронила к местам локализации паразитов и снижают воспалительные процессы в коже. Дана Ультра® для собак эффективен в течение 4-х - 6-ти недель. С целью профилактики обработку животных необходимо проводить не чаще, чем 1 раз в месяц.

Инсектоакарицидные капли наносили на кожу в области холки, следуя указаниям инструкции, методом спот-он в количестве 4,5 мл для собак с массой тела 20-40 кг.

Во время эксперимента у собак каждые четыре недели проводили забор крови:

  • 1-е исследование - фон;
  • 2-е исследование - фон;
  • 3-е исследование - через четыре недели после нанесения препарата;
  • 4-е исследование - через восемь недель после нанесения препарата.

Исследования проб крови проводили на автоматическом гематологическом анализаторе для ветеринарии BC-2800Vet оригинального производства Mindray и биохимическом анализаторе Mindray ВА-88А. Статистическую обработку результатов исследования проводили в программе STATISTICA6.1rus. Проверку нулевой гипотезы проводили при помощи рангового дисперсионного анализа по Фридману для трех и более зависимых групп. Различия считали статистически значимыми при р<0,05. Последующие парные сравнения осуществляли с использованием непараметрического теста Вилкоксона, применяя поправку Бонферрони при оценке значения р. В этом случае различия считали статистически значимыми при p<0,008. Результаты исследований представлены в виде Медианы (Ме), верхнего (Р25) и нижнего (Р75) квартилей.

Результаты и обсуждение. В течение эксперимента проводили визуальное наблюдение за состоянием животных. Клинических признаков интоксикации, местных аллергических реакций и изменения пищевого поведения собак не отмечали. Результаты исследования крови отражены в таблице 1.

Таблица 1. Морфологический состав и изменение биохимических показателей в крови собак при контакте с фипронилом в форме капель на холку, Ме (Р25;Р75), n=10

Показатели

1-е исследо­вание

2-е исследо­вание

3-е исследо­вание

4-е исследо­вание

р

Лейкоциты,

Ч109/л

9,3

(7,9;10,4)

9,9

(9,2;11)

15,2

(14,6;18,6)

9,45

(8,1;11,1)

0,003

Лимфоциты,

Ч109/л

1,9

(1,3;2,3)

2

(1,9;2,4)

2,5

(2,1;2,8)

1,65

(1,6;1,7)

0,003

Моноциты,

Ч109/л

0,4

(0,4;0,5)

0,6

(0,5;0,7)

0,5

(0,5;0,6)

0,4

(0,3;0,5)

0,015

Гранулоциты,

Ч109/л

7,15

(6,3;7,9)

7,3

(6,9;7,8)

12,45

(11,3;15,5)

7,6

(6,1;9,2)

0,004

Лимфоциты, %

18,45

(15,1;21,3)

22

(18,6;24,4)

15

(13;17,2)

15,6

(12,7;18,4)

0,008

Моноциты, %

4,5

(4,3;4,6)

4,55

(4;5,5)

3,25

(3;4,2)

4,25

(4,1;4,6)

0,006

Гранулоциты,%

77,7

(74,4;80,6)

74,95

(71,5;76,8)

80,95

(78,7;83,6)

78,5

(76,7;80,2)

0,004

Эритроциты,

Ч1012/л

7,55

(5,93;8,36)

9,68

(8,15;10,2)

8,75

(8,06;9,7)

7,53

(7,05;8,33)

0,01

Гемоглобин,

г/л

196

(191;206)

213

(191;232)

218

(206;239)

202

(181;205)

0,130

Гематокрит,%

57,6

(51,9;58,1)

62,5

(57,9;67,3)

63,8

(61;70,4)

60,3

(55,6;61)

0,901

Средний объем эритроцитов, мкм3

74,1

(69,5;86,6)

71,2

(70,4;72)

73,4

(71,1;75,3)

78,4

(75,9;80)

0,100

Среднее содержание гемоглобина в эритроците, пг

25,5

(22,7;32,9)

23,3

(22,5;23,5)

24,6

(24,3;25)

26

(25,3;26,8)

0,003

Средняя концентрация гемоглобина в эритроците, г/л

330

(329;333)

327

(325;331)

338

(337;341)

334

(323;343)

0,015

Тромбоциты,

109/л

293

(257;305)

349

(327;363)

285

(240;361)

349

(299;402)

0,051

Средний объем тромбоцитов, мкм3

8,5

(8,4;8,6)

8

(7,7;8,3)

8,6

(8,4;8,9)

8,4

(8,2;8,9)

0,024

Тромбокрит, %

0,293

(0,257;

0,305)

0,349

(0,327;0,363)

0,285

(0,240;0,361)

0,349

(0,299;0,402)

0,051

Средний показатель анизоцитоза, %

13,1

(12,2;13,6)

12,9

(12,4;13,3)

15,8

(15,7;16)

12,2

(11,6;13,4)

0,0002

АлАТ, ед/л

48

(44;56)

33

(31;45)

57

(52;67)

38

(31;51)

0,0001

АсАТ, ед/л

33

(31;54)

27

(25;31)

36

(36;38)

39

(37;47)

0,0004

Щелочная фосфатаза, ед/л

80

(80;89)

77

(61;91)

85

(70;107)

76

(73;81)

0,516

Общий белок, г/л

49,8

(49,6;52,8)

53,3

(50,4;56,5)

63,5

(58,6;66,5)

47,5

(40,7;53)

0,0001

Альбумины, г/л

28,3

(27,2;28,7)

28,6

(27,8;29,2)

32,3

(30,4;36,8)

29,6

(24,8;31,5)

0,032

Глобулины, г/л

23,3

(21,1;25,5)

24,9

(20,7;26,3)

29,6

(25;35,3)

19

(16,4;23,5)

0,180

Примечание: р<0,05 - ранговый дисперсионный анализ по Фридману

Через четыре недели после однократного нанесения на кожу фипронила в составе Дана Ультра® у собак было отмечено повышение общего количества лейкоцитов при увеличении абсолютного содержания лимфоцитов и гранулоцитов. В процентном отношении возросла доля гранулоцитов. Также установлено повышение таких показателей, как средняя концентрация гемоглобина в эритроците, средний объем тромбоцитов, средний показатель анизоцитоза. После проведения парного сравнения было установлено статистически значимое увеличение количества лейкоцитов, абсолютного числа гра-нулоцитов и среднего показателя анизоцитоза (р=0,005) (табл. 2). Другие изменения являются колебаниями в пределах физиологической нормы исследуемых животных.

Количество лейкоцитов в циркулирующей крови имеет важное диагностическое значение. Благодаря их фагоцитарной активности, участию в формировании иммунного ответа, реализуются не только антимикробные, но и антитоксические механизмы защиты. Пролиферация нейтрофилов возникает в результате воспалительных и иных повреждений тканей, аутоиммунных расстройств, действия лекарственных препаратов [5, 6, 8]. Активацию лейкопоэза у собак можно рассматривать как адекватный ответ на антигенную стимуляцию [4]. В роли антигена может выступать фипронил, входящий в состав препарата, так как не исключается возможность его резорбции в системный кровоток и связывания с белками крови [1, 2].

Показатель анизоцитоза характеризует колебания объема эритроцитов и является важным критерием дифференциальной диагностики и оценки динамики анемий. Изолированное повышение показателя анизоцитоза является ранним признаком развития макроцитарной анемии [5].

Проведенные исследования свидетельствуют о том, что в процессе контакта собак с фипронилом повышаются уровни АлАТ, общего белка и альбуминов в сыворотке крови. При проведении парных сравнений выявлено достоверно значимое повышение АлАТ и общего белка (р=0,005) (табл. 2).

Таблица 2. Уровни статистической значимости при парном сравнении групп при по­мощи непараметрического теста Вилкоксона с поправкой Бонферрони

Показатели

Исследование

1

1

1

2

2

3

2

3

4

3

4

4

Лейкоциты, Ч109/л

р=0,386

р=0,005

р=0,918

р=0,005

р=0,414

р=0,005

Лимфоциты, 109/л

р=0,115

р=0,066

р=0,202

р=0,109

р=0,005

р=0,006

Моноциты, Ч109/л

р=0,017

р=0,093

р=0,916

р=0,183

р=0,020

р=0,017

Гранулоциты, Ч109/л

р=0,767

р=0,005

р=0,646

р=0,005

р=0,475

р=0,005

Лимфоциты, %

р=0,168

р=0,114

р=0,332

р=0,005

р=0,005

р=0,959

Моноциты, %

р=0,236

р=0,012

р=0,400

р=0,202

р=0,005

р=0,028

Гранулоциты, %

р=0,241

р=0,139

р=0,593

р=0,005

р=0,005

р=0,038

Эритроциты, Ч1012/л

р=0,021

р=0,016

р=0,798

р=0,114

р=0,016

р=0,092

Среднее содержание гемоглобина в эритроците, пг

р=0,012

р=0,332

р=0,575

р=0,005

р=0,006

р=0,092

Средняя концентрация гемоглобина в эритроците, г/л

р=0,221

р=0,005

р=0,575

р=0,009

р=0,308

р=0,241

Средний объем тромбоцитов, мкм3

р=0,032

р=0,183

р=0,712

р=0,006

р=0,074

р=0,386

Средний показатель анизоцитоза, %

р=0,858

р=0,005

р=0,414

р=0,005

р=0,332

р=0,005

АлАТ, ед/л

р=0,036

р=0,005

р=0,028

р=0,005

р=0,638

р=0,005

АсАТ, ед/л

р=0,005

р=0,918

р=0,638

р=0,006

р=0,005

р=0,038

Общий белок, г/л

р=0,202

р=0,009

р=0,241

р=0,005

р=0,125

р=0,005

Альбумины, г/л

р=0,444

р=0,059

р=0,575

р=0,083

р=0,646

р=0,046

Глобулины, г/л

р=0,767

р=0,046

р=0,284

р=0,202

р=0,141

р=0,016

Внутриклеточный фермент аланинаминотрасфераза содержится в большем количестве в гепатоцитах. Повышение в сыворотке крови АлАТ является следствием повреждения клеток под действием различных факторов, в том числе интоксикаций. Повышение активности АлАТ отмечается раньше, чем развиваются клинические признаки поражения печени [3].

Общий белок крови представлен фракциями, которые выполняют различные функции. Результаты исследований указывают на статистически значимое повышение общего белка крови, при этом в 3 исследовании отмечается увеличение значения медиан альбуминов и глобулинов по сравнению с 1 и 2-м. Подобные изменения указывают на повышение онкотического давления плазмы крови, что может привести к увеличению ее вязкости [3].

Заключение. Инсектоакарицидные препараты на основе фи-пронила в настоящее время являются эффективными и экономически доступными средствами защиты домашних животных от нападения кровососущих насекомых. Однако при использовании инсектоакари-цидных капель для собак, содержащих в своем составе фипронил, отмечены изменения морфологических и биохимических показателей крови. Установлена стимуляция лейкопоэза, которая рассматривается как ответ на антигенную стимуляцию. У исследуемых собак отмечено статистически значимое повышение АлАТ, что указывает на возможный гепатотоксический эффект фипронила. Повышение общего белка в сыворотке крови требует более тщательного исследования отдельных фракций белка, так как они выполняют разные функции и могут указывать на нарушение как со стороны иммунной системы, так и гепатобилиарной. Морфобиохимические изменения в крови при однократном использовании препарата носят обратимый характер, однако за сезон собак подвергают профилактическим обработкам до 8 раз, а при лечении блошиной инвазии рекомендовано использовать фипронил в течение восьми недель четырехкратно [5,7], что может привести к стойким морфобиохимическим изменениям и негативным последствиям.

Список литературы:

  1. Герунова Л.К. Оценка гематотропного действия фипронила и перметри-на в составе ошейника Rolf Club premium® на модели лабораторных крыс/ Л.К. Герунова , П.Ю. Смыслова// Материалы X международной научно-практической конференции "Перспективные научные исследования".-София, Т.42: Ветеринарные науки.- 2014.-С. 74-78
  2. Герунова Л.К. Коррекция Тималином® гематотоксических эффектов инсектоакарицидных препаратов Дана Ультра® и Деликс® на модели лабораторных крыс/ Л.К. Герунова, П.Ю. Смыслова//Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2015. -№3. -С.378.
  3. Денисенко В.Н. Клиническая интерпретация биохимических показателей сыворотки крови собак и кошек/ В.Н. Денисенко., Е.А. Кесарева. - М.: Колос, 2011 - 28с.
  4. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология: пер. с англ. / А. Ройт, Бростофф Дж, Мейл Д.-М.: Мир, 2000. - С. 2-7.
  5. Тведтен Г., Торнвальд Г., Уиллард М. Лабораторная диагностика в клинике мелких домашних животных: пер. с англ./ Г. Тведтен.- М.: Аквариум Принт, 2004 - 432с.
  6. Koch S. Canine and feline dermatology drug handbook / S.N. Koch, Sheila M.F. Torres, D.C. Plumb. - Ames, Iowa : Blackwell, 2012
  7. Latimer K.S. Duncan & Prasse's veterinary laboratory medicine : clinical pathology - 5th ed. / Kenneth S. Latimer.- Ames, Iowa : Blackwell, 2011
  8. Peterson M. Small Animal Toxicology /M. E. Peterson, P. A. Talcott.- St. Louis, Missour : Elsevier, 2013
  9. Wintrobe M.M. Clinical Hematology - 9-th-Ed. Lea and Febiger, 1993

Резюме. В весенне-осенний период часто регистрируются случаи инфестации служебных собак иксодовыми клещами, укусы которых ведут к развитию трансмиссивных болезней. Одними из популярных инсектоакарицидов являются препараты на основе фипронила и регуляторов роста насекомых в форме капель на холку. Целью исследования был анализ морфологических и биохимических показателей крови у собак при обработке препаратом на основе фипронила в форме капель на холку. Исследование проводилось на 10 собаках в зональном центре кинологической службы УВД России по Омской области и на базе кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО Омского ГАУ. У животных двукратно с промежутком тридцать дней проводили забор крови для установления фоновых морфологических и биохимических показателей, затем в область холки однократно наносили 5% фипронил в количестве 4,5 мл для собак с массой тела 20-40 кг. Исследования крови повторяли через тридцать и шестьдесят суток после нанесения препарата. Авторами установлено, что при обработке собак инсектоакарицидным препаратом на основе фипронила развивается лейкоцитоз с преимущественным увеличением количества гранулоцитов, отмечается повышение среднего показателя анизоцитоза, АлАТ и содержания общего белка в сыворотке крови, при этом клинические признаки интоксикации отсутствуют. Морфобиохимические изменения в крови при однократном использовании препарата носят обратимый характер, однако за сезон собак подвергают профилактическим обработкам до 8 раз, что ведет к стойким морфобиохимическим изменениям и негативным последствиям.

Ключевые слова: собаки, немецкая овчарка, инсектоакарициды, фипро-нил, сыворотка крови, плазма крови, клетки крови, гемоглобин, спот-он, проти-вопаразитарная обработка.

Сведения об авторах:

Герунова Людмила Карповна, доктор ветеринарных наук, профессор кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО "Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина"; 644122, г Омск, ул. Вавилова, 31, кв. 71; тел: 8(903)9823090; e-mail: gerliud@mail.ru.

Толмачев Владимир Алексеевич, кандидат ветеринарных наук, начальник службы (ветеринарной) ЦКС полиции УМВД России по Омской области; 644011, г. Омск, Енисейская, 3, корпус 3; тел: 8(908)3192403; e-mail: wat.tolm@mail.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Смыслова Полина Юрьевна, аспирант кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО "Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина"; 644100, ул. Лаптева, 5, кв. 97; тел: 8(961)8849666; e-mail: rusakova.polina@inbox.ru.

 

 
2011 © Ветеринария Кубани Разработка сайта - Интернет-Имидж