Морфобиохимические изменения в крови собак при обработке инсектоакарицидным препаратом на основе фипронила

УДК 619:615.285:612.12:636.7

Смыслова П.Ю., Герунова Л.К. ФГБОУ ВО "Омский государственный
аграрный университет им. П.А.Столыпина", г. Омск
Толмачев В.А. УМВД России по Омской области, г. Омск

Введение. В весенне-осенний период часто регистрируются случаи инфестации служебных собак иксодовыми клещами, укусы которых ведут к развитию трансмиссивных болезней. Одними из популярных являются препараты на основе фипронила и регуляторов роста насекомых в форме капель на холку.

Фипронил - это производное пиразола, он эффективен в отношении имаго блох и клещей, считается достаточно безопасным препаратом и может быть рекомендован для щенков и котят старше восьми недель. Механизм действия заключается в блокировании рецепторов гамма-аминомасляной кислоты, что приводит к параличу членистоногих [5, 9]. По данным литературы, фипронил не в состоянии связывать надолго рецепторы хлоридных каналов млекопитающих [5]. При нанесении на кожу животных фипронил накапливается в сальных железах и длительное время сохраняет противопаразитарную активность.

Имеются сведения о том, что препараты на основе фипронила являются высокотоксичными для кроликов при нанесении на кожу и могут вызывать клинические признаки интоксикации у кошек при применении доз, предназначенных для собак [9]. Это свидетельствует о возможности резорбции фипронила в кровоток при местном применении. Несмотря на широкое использование инсектоакарицидных препаратов на основе фипронила, их побочное действие на организм млекопитающих изучено недостаточно и является актуальной проблемой ветеринарной токсикологии.

Целью нашей работы стало изучение морфобиохимических изменений в крови собак при обработке инсектоакарицидным препаратом на основе фипронила.

Материалы и методы. Экспериментальные исследования выполнены на базе кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО "Омский государственный аграрный университет" и в зональном центре кинологической службы УВД Омской области.

Исследование проведено на 10-ти клинически здоровых собаках породы немецкая овчарка в возрасте от двух до пяти лет, содержащихся в вольерах на коммерческом рационе, привитых по возрасту и подвергнутых дегельминтизации по плану. В качестве исследуемого препарата использовали Дана Ультра® для собак (ООО НПО "АПИ-САН").

Согласно инструкции по применению, в составе инсектоака-рицидного препарата Дана Ультра® для собак содержится фипронил 50 мг/мл, а также вспомогательные вещества: спирт изопропиловый 300 мг/мл, диметилформамид - 100 мг/мл, кислота лимонная - 1 мг/мл и полиэтиленгликоль до 1 мл. Вспомогательные вещества улучшают проникновение фипронила к местам локализации паразитов и снижают воспалительные процессы в коже. Дана Ультра® для собак эффективен в течение 4-х - 6-ти недель. С целью профилактики обработку животных необходимо проводить не чаще, чем 1 раз в месяц.

Инсектоакарицидные капли наносили на кожу в области холки, следуя указаниям инструкции, методом спот-он в количестве 4,5 мл для собак с массой тела 20-40 кг.

Во время эксперимента у собак каждые четыре недели проводили забор крови:

• 1-е исследование - фон;
• 2-е исследование - фон;
• 3-е исследование - через четыре недели после нанесения препарата;
• 4-е исследование - через восемь недель после нанесения препарата.

Исследования проб крови проводили на автоматическом гематологическом анализаторе для ветеринарии BC-2800Vet оригинального производства Mindray и биохимическом анализаторе Mindray ВА-88А. Статистическую обработку результатов исследования проводили в программе STATISTICA6.1rus. Проверку нулевой гипотезы проводили при помощи рангового дисперсионного анализа по Фридману для трех и более зависимых групп. Различия считали статистически значимыми при р<0,05. Последующие парные сравнения осуществляли с использованием непараметрического теста Вилкоксона, применяя поправку Бонферрони при оценке значения р. В этом случае различия считали статистически значимыми при p<0,008. Результаты исследований представлены в виде Медианы (Ме), верхнего (Р25) и нижнего (Р75) квартилей.

Результаты и обсуждение. В течение эксперимента проводили визуальное наблюдение за состоянием животных. Клинических признаков интоксикации, местных аллергических реакций и изменения пищевого поведения собак не отмечали. Результаты исследования крови отражены в таблице 1.

Таблица 1. Морфологический состав и изменение биохимических показателей в крови собак при контакте с фипронилом в форме капель на холку, Ме (Р25;Р75), n=10

Показатели	1-е исследо­вание	2-е исследо­вание	3-е исследо­вание	4-е исследо­вание	р
Лейкоциты, Ч109/л	9,3 (7,9;10,4)	9,9 (9,2;11)	15,2 (14,6;18,6)	9,45 (8,1;11,1)	0,003
Лимфоциты, Ч109/л	1,9 (1,3;2,3)	2 (1,9;2,4)	2,5 (2,1;2,8)	1,65 (1,6;1,7)	0,003
Моноциты, Ч109/л	0,4 (0,4;0,5)	0,6 (0,5;0,7)	0,5 (0,5;0,6)	0,4 (0,3;0,5)	0,015
Гранулоциты, Ч109/л	7,15 (6,3;7,9)	7,3 (6,9;7,8)	12,45 (11,3;15,5)	7,6 (6,1;9,2)	0,004
Лимфоциты, %	18,45 (15,1;21,3)	22 (18,6;24,4)	15 (13;17,2)	15,6 (12,7;18,4)	0,008
Моноциты, %	4,5 (4,3;4,6)	4,55 (4;5,5)	3,25 (3;4,2)	4,25 (4,1;4,6)	0,006
Гранулоциты,%	77,7 (74,4;80,6)	74,95 (71,5;76,8)	80,95 (78,7;83,6)	78,5 (76,7;80,2)	0,004
Эритроциты, Ч1012/л	7,55 (5,93;8,36)	9,68 (8,15;10,2)	8,75 (8,06;9,7)	7,53 (7,05;8,33)	0,01
Гемоглобин, г/л	196 (191;206)	213 (191;232)	218 (206;239)	202 (181;205)	0,130
Гематокрит,%	57,6 (51,9;58,1)	62,5 (57,9;67,3)	63,8 (61;70,4)	60,3 (55,6;61)	0,901
Средний объем эритроцитов, мкм3	74,1 (69,5;86,6)	71,2 (70,4;72)	73,4 (71,1;75,3)	78,4 (75,9;80)	0,100
Среднее содержание гемоглобина в эритроците, пг	25,5 (22,7;32,9)	23,3 (22,5;23,5)	24,6 (24,3;25)	26 (25,3;26,8)	0,003
Средняя концентрация гемоглобина в эритроците, г/л	330 (329;333)	327 (325;331)	338 (337;341)	334 (323;343)	0,015
Тромбоциты, 109/л	293 (257;305)	349 (327;363)	285 (240;361)	349 (299;402)	0,051
Средний объем тромбоцитов, мкм3	8,5 (8,4;8,6)	8 (7,7;8,3)	8,6 (8,4;8,9)	8,4 (8,2;8,9)	0,024
Тромбокрит, %	0,293 (0,257; 0,305)	0,349 (0,327;0,363)	0,285 (0,240;0,361)	0,349 (0,299;0,402)	0,051
Средний показатель анизоцитоза, %	13,1 (12,2;13,6)	12,9 (12,4;13,3)	15,8 (15,7;16)	12,2 (11,6;13,4)	0,0002
АлАТ, ед/л	48 (44;56)	33 (31;45)	57 (52;67)	38 (31;51)	0,0001
АсАТ, ед/л	33 (31;54)	27 (25;31)	36 (36;38)	39 (37;47)	0,0004
Щелочная фосфатаза, ед/л	80 (80;89)	77 (61;91)	85 (70;107)	76 (73;81)	0,516
Общий белок, г/л	49,8 (49,6;52,8)	53,3 (50,4;56,5)	63,5 (58,6;66,5)	47,5 (40,7;53)	0,0001
Альбумины, г/л	28,3 (27,2;28,7)	28,6 (27,8;29,2)	32,3 (30,4;36,8)	29,6 (24,8;31,5)	0,032
Глобулины, г/л	23,3 (21,1;25,5)	24,9 (20,7;26,3)	29,6 (25;35,3)	19 (16,4;23,5)	0,180

Примечание: р<0,05 - ранговый дисперсионный анализ по Фридману

Через четыре недели после однократного нанесения на кожу фипронила в составе Дана Ультра® у собак было отмечено повышение общего количества лейкоцитов при увеличении абсолютного содержания лимфоцитов и гранулоцитов. В процентном отношении возросла доля гранулоцитов. Также установлено повышение таких показателей, как средняя концентрация гемоглобина в эритроците, средний объем тромбоцитов, средний показатель анизоцитоза. После проведения парного сравнения было установлено статистически значимое увеличение количества лейкоцитов, абсолютного числа гра-нулоцитов и среднего показателя анизоцитоза (р=0,005) (табл. 2). Другие изменения являются колебаниями в пределах физиологической нормы исследуемых животных.

Количество лейкоцитов в циркулирующей крови имеет важное диагностическое значение. Благодаря их фагоцитарной активности, участию в формировании иммунного ответа, реализуются не только антимикробные, но и антитоксические механизмы защиты. Пролиферация нейтрофилов возникает в результате воспалительных и иных повреждений тканей, аутоиммунных расстройств, действия лекарственных препаратов [5, 6, 8]. Активацию лейкопоэза у собак можно рассматривать как адекватный ответ на антигенную стимуляцию [4]. В роли антигена может выступать фипронил, входящий в состав препарата, так как не исключается возможность его резорбции в системный кровоток и связывания с белками крови [1, 2].

Показатель анизоцитоза характеризует колебания объема эритроцитов и является важным критерием дифференциальной диагностики и оценки динамики анемий. Изолированное повышение показателя анизоцитоза является ранним признаком развития макроцитарной анемии [5].

Проведенные исследования свидетельствуют о том, что в процессе контакта собак с фипронилом повышаются уровни АлАТ, общего белка и альбуминов в сыворотке крови. При проведении парных сравнений выявлено достоверно значимое повышение АлАТ и общего белка (р=0,005) (табл. 2).

Таблица 2. Уровни статистической значимости при парном сравнении групп при по­мощи непараметрического теста Вилкоксона с поправкой Бонферрони

Показатели	Исследование
	1	1	1	2	2	3
	2	3	4	3	4	4
Лейкоциты, Ч109/л	р=0,386	р=0,005	р=0,918	р=0,005	р=0,414	р=0,005
Лимфоциты, 109/л	р=0,115	р=0,066	р=0,202	р=0,109	р=0,005	р=0,006
Моноциты, Ч109/л	р=0,017	р=0,093	р=0,916	р=0,183	р=0,020	р=0,017
Гранулоциты, Ч109/л	р=0,767	р=0,005	р=0,646	р=0,005	р=0,475	р=0,005
Лимфоциты, %	р=0,168	р=0,114	р=0,332	р=0,005	р=0,005	р=0,959
Моноциты, %	р=0,236	р=0,012	р=0,400	р=0,202	р=0,005	р=0,028
Гранулоциты, %	р=0,241	р=0,139	р=0,593	р=0,005	р=0,005	р=0,038
Эритроциты, Ч1012/л	р=0,021	р=0,016	р=0,798	р=0,114	р=0,016	р=0,092
Среднее содержание гемоглобина в эритроците, пг	р=0,012	р=0,332	р=0,575	р=0,005	р=0,006	р=0,092
Средняя концентрация гемоглобина в эритроците, г/л	р=0,221	р=0,005	р=0,575	р=0,009	р=0,308	р=0,241
Средний объем тромбоцитов, мкм3	р=0,032	р=0,183	р=0,712	р=0,006	р=0,074	р=0,386
Средний показатель анизоцитоза, %	р=0,858	р=0,005	р=0,414	р=0,005	р=0,332	р=0,005
АлАТ, ед/л	р=0,036	р=0,005	р=0,028	р=0,005	р=0,638	р=0,005
АсАТ, ед/л	р=0,005	р=0,918	р=0,638	р=0,006	р=0,005	р=0,038
Общий белок, г/л	р=0,202	р=0,009	р=0,241	р=0,005	р=0,125	р=0,005
Альбумины, г/л	р=0,444	р=0,059	р=0,575	р=0,083	р=0,646	р=0,046
Глобулины, г/л	р=0,767	р=0,046	р=0,284	р=0,202	р=0,141	р=0,016

Внутриклеточный фермент аланинаминотрасфераза содержится в большем количестве в гепатоцитах. Повышение в сыворотке крови АлАТ является следствием повреждения клеток под действием различных факторов, в том числе интоксикаций. Повышение активности АлАТ отмечается раньше, чем развиваются клинические признаки поражения печени [3].

Общий белок крови представлен фракциями, которые выполняют различные функции. Результаты исследований указывают на статистически значимое повышение общего белка крови, при этом в 3 исследовании отмечается увеличение значения медиан альбуминов и глобулинов по сравнению с 1 и 2-м. Подобные изменения указывают на повышение онкотического давления плазмы крови, что может привести к увеличению ее вязкости [3].

Заключение. Инсектоакарицидные препараты на основе фи-пронила в настоящее время являются эффективными и экономически доступными средствами защиты домашних животных от нападения кровососущих насекомых. Однако при использовании инсектоакари-цидных капель для собак, содержащих в своем составе фипронил, отмечены изменения морфологических и биохимических показателей крови. Установлена стимуляция лейкопоэза, которая рассматривается как ответ на антигенную стимуляцию. У исследуемых собак отмечено статистически значимое повышение АлАТ, что указывает на возможный гепатотоксический эффект фипронила. Повышение общего белка в сыворотке крови требует более тщательного исследования отдельных фракций белка, так как они выполняют разные функции и могут указывать на нарушение как со стороны иммунной системы, так и гепатобилиарной. Морфобиохимические изменения в крови при однократном использовании препарата носят обратимый характер, однако за сезон собак подвергают профилактическим обработкам до 8 раз, а при лечении блошиной инвазии рекомендовано использовать фипронил в течение восьми недель четырехкратно [5,7], что может привести к стойким морфобиохимическим изменениям и негативным последствиям.

Список литературы:

1. Герунова Л.К. Оценка гематотропного действия фипронила и перметри-на в составе ошейника Rolf Club premium® на модели лабораторных крыс/ Л.К. Герунова , П.Ю. Смыслова// Материалы X международной научно-практической конференции "Перспективные научные исследования".-София, Т.42: Ветеринарные науки.- 2014.-С. 74-78
2. Герунова Л.К. Коррекция Тималином® гематотоксических эффектов инсектоакарицидных препаратов Дана Ультра® и Деликс® на модели лабораторных крыс/ Л.К. Герунова, П.Ю. Смыслова//Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2015. -№3. -С.378.
3. Денисенко В.Н. Клиническая интерпретация биохимических показателей сыворотки крови собак и кошек/ В.Н. Денисенко., Е.А. Кесарева. - М.: Колос, 2011 - 28с.
4. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология: пер. с англ. / А. Ройт, Бростофф Дж, Мейл Д.-М.: Мир, 2000. - С. 2-7.
5. Тведтен Г., Торнвальд Г., Уиллард М. Лабораторная диагностика в клинике мелких домашних животных: пер. с англ./ Г. Тведтен.- М.: Аквариум Принт, 2004 - 432с.
6. Koch S. Canine and feline dermatology drug handbook / S.N. Koch, Sheila M.F. Torres, D.C. Plumb. - Ames, Iowa : Blackwell, 2012
7. Latimer K.S. Duncan & Prasse's veterinary laboratory medicine : clinical pathology - 5th ed. / Kenneth S. Latimer.- Ames, Iowa : Blackwell, 2011
8. Peterson M. Small Animal Toxicology /M. E. Peterson, P. A. Talcott.- St. Louis, Missour : Elsevier, 2013
9. Wintrobe M.M. Clinical Hematology - 9-th-Ed. Lea and Febiger, 1993

Резюме. В весенне-осенний период часто регистрируются случаи инфестации служебных собак иксодовыми клещами, укусы которых ведут к развитию трансмиссивных болезней. Одними из популярных инсектоакарицидов являются препараты на основе фипронила и регуляторов роста насекомых в форме капель на холку. Целью исследования был анализ морфологических и биохимических показателей крови у собак при обработке препаратом на основе фипронила в форме капель на холку. Исследование проводилось на 10 собаках в зональном центре кинологической службы УВД России по Омской области и на базе кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО Омского ГАУ. У животных двукратно с промежутком тридцать дней проводили забор крови для установления фоновых морфологических и биохимических показателей, затем в область холки однократно наносили 5% фипронил в количестве 4,5 мл для собак с массой тела 20-40 кг. Исследования крови повторяли через тридцать и шестьдесят суток после нанесения препарата. Авторами установлено, что при обработке собак инсектоакарицидным препаратом на основе фипронила развивается лейкоцитоз с преимущественным увеличением количества гранулоцитов, отмечается повышение среднего показателя анизоцитоза, АлАТ и содержания общего белка в сыворотке крови, при этом клинические признаки интоксикации отсутствуют. Морфобиохимические изменения в крови при однократном использовании препарата носят обратимый характер, однако за сезон собак подвергают профилактическим обработкам до 8 раз, что ведет к стойким морфобиохимическим изменениям и негативным последствиям.

Ключевые слова: собаки, немецкая овчарка, инсектоакарициды, фипро-нил, сыворотка крови, плазма крови, клетки крови, гемоглобин, спот-он, проти-вопаразитарная обработка.

Сведения об авторах:

Герунова Людмила Карповна, доктор ветеринарных наук, профессор кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО "Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина"; 644122, г Омск, ул. Вавилова, 31, кв. 71; тел: 8(903)9823090; e-mail: gerliud@mail.ru.

Толмачев Владимир Алексеевич, кандидат ветеринарных наук, начальник службы (ветеринарной) ЦКС полиции УМВД России по Омской области; 644011, г. Омск, Енисейская, 3, корпус 3; тел: 8(908)3192403; e-mail: wat.tolm@mail.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Смыслова Полина Юрьевна, аспирант кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО "Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина"; 644100, ул. Лаптева, 5, кв. 97; тел: 8(961)8849666; e-mail: rusakova.polina@inbox.ru.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей