УДК 619:615.285:612.12:636.7
Смыслова П.Ю., Герунова Л.К. ФГБОУ ВО "Омский государственный
аграрный университет им. П.А.Столыпина", г. Омск
Толмачев В.А. УМВД России по Омской области, г. Омск
Введение. В весенне-осенний период часто регистрируются случаи инфестации служебных собак иксодовыми клещами, укусы которых ведут к развитию трансмиссивных болезней. Одними из популярных являются препараты на основе фипронила и регуляторов роста насекомых в форме капель на холку.
Фипронил - это производное пиразола, он эффективен в отношении имаго блох и клещей, считается достаточно безопасным препаратом и может быть рекомендован для щенков и котят старше восьми недель. Механизм действия заключается в блокировании рецепторов гамма-аминомасляной кислоты, что приводит к параличу членистоногих [5, 9]. По данным литературы, фипронил не в состоянии связывать надолго рецепторы хлоридных каналов млекопитающих [5]. При нанесении на кожу животных фипронил накапливается в сальных железах и длительное время сохраняет противопаразитарную активность.
Имеются сведения о том, что препараты на основе фипронила являются высокотоксичными для кроликов при нанесении на кожу и могут вызывать клинические признаки интоксикации у кошек при применении доз, предназначенных для собак [9]. Это свидетельствует о возможности резорбции фипронила в кровоток при местном применении. Несмотря на широкое использование инсектоакарицидных препаратов на основе фипронила, их побочное действие на организм млекопитающих изучено недостаточно и является актуальной проблемой ветеринарной токсикологии.
Целью нашей работы стало изучение морфобиохимических изменений в крови собак при обработке инсектоакарицидным препаратом на основе фипронила.
Материалы и методы. Экспериментальные исследования выполнены на базе кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО "Омский государственный аграрный университет" и в зональном центре кинологической службы УВД Омской области.
Исследование проведено на 10-ти клинически здоровых собаках породы немецкая овчарка в возрасте от двух до пяти лет, содержащихся в вольерах на коммерческом рационе, привитых по возрасту и подвергнутых дегельминтизации по плану. В качестве исследуемого препарата использовали Дана Ультра® для собак (ООО НПО "АПИ-САН").
Согласно инструкции по применению, в составе инсектоака-рицидного препарата Дана Ультра® для собак содержится фипронил 50 мг/мл, а также вспомогательные вещества: спирт изопропиловый 300 мг/мл, диметилформамид - 100 мг/мл, кислота лимонная - 1 мг/мл и полиэтиленгликоль до 1 мл. Вспомогательные вещества улучшают проникновение фипронила к местам локализации паразитов и снижают воспалительные процессы в коже. Дана Ультра® для собак эффективен в течение 4-х - 6-ти недель. С целью профилактики обработку животных необходимо проводить не чаще, чем 1 раз в месяц.
Инсектоакарицидные капли наносили на кожу в области холки, следуя указаниям инструкции, методом спот-он в количестве 4,5 мл для собак с массой тела 20-40 кг.
Во время эксперимента у собак каждые четыре недели проводили забор крови:
Исследования проб крови проводили на автоматическом гематологическом анализаторе для ветеринарии BC-2800Vet оригинального производства Mindray и биохимическом анализаторе Mindray ВА-88А. Статистическую обработку результатов исследования проводили в программе STATISTICA6.1rus. Проверку нулевой гипотезы проводили при помощи рангового дисперсионного анализа по Фридману для трех и более зависимых групп. Различия считали статистически значимыми при р<0,05. Последующие парные сравнения осуществляли с использованием непараметрического теста Вилкоксона, применяя поправку Бонферрони при оценке значения р. В этом случае различия считали статистически значимыми при p<0,008. Результаты исследований представлены в виде Медианы (Ме), верхнего (Р25) и нижнего (Р75) квартилей.
Результаты и обсуждение. В течение эксперимента проводили визуальное наблюдение за состоянием животных. Клинических признаков интоксикации, местных аллергических реакций и изменения пищевого поведения собак не отмечали. Результаты исследования крови отражены в таблице 1.
Таблица 1. Морфологический состав и изменение биохимических показателей в крови собак при контакте с фипронилом в форме капель на холку, Ме (Р25;Р75), n=10
| Показатели | 1-е исследование | 2-е исследование | 3-е исследование | 4-е исследование | р |
|---|---|---|---|---|---|
| Лейкоциты, Ч109/л | 9,3 (7,9;10,4) | 9,9 (9,2;11) | 15,2 (14,6;18,6) | 9,45 (8,1;11,1) | 0,003 |
| Лимфоциты, Ч109/л | 1,9 (1,3;2,3) | 2 (1,9;2,4) | 2,5 (2,1;2,8) | 1,65 (1,6;1,7) | 0,003 |
| Моноциты, Ч109/л | 0,4 (0,4;0,5) | 0,6 (0,5;0,7) | 0,5 (0,5;0,6) | 0,4 (0,3;0,5) | 0,015 |
| Гранулоциты, Ч109/л | 7,15 (6,3;7,9) | 7,3 (6,9;7,8) | 12,45 (11,3;15,5) | 7,6 (6,1;9,2) | 0,004 |
| Лимфоциты, % | 18,45 (15,1;21,3) | 22 (18,6;24,4) | 15 (13;17,2) | 15,6 (12,7;18,4) | 0,008 |
| Моноциты, % | 4,5 (4,3;4,6) | 4,55 (4;5,5) | 3,25 (3;4,2) | 4,25 (4,1;4,6) | 0,006 |
| Гранулоциты,% | 77,7 (74,4;80,6) | 74,95 (71,5;76,8) | 80,95 (78,7;83,6) | 78,5 (76,7;80,2) | 0,004 |
| Эритроциты, Ч1012/л | 7,55 (5,93;8,36) | 9,68 (8,15;10,2) | 8,75 (8,06;9,7) | 7,53 (7,05;8,33) | 0,01 |
| Гемоглобин, г/л | 196 (191;206) | 213 (191;232) | 218 (206;239) | 202 (181;205) | 0,130 |
| Гематокрит,% | 57,6 (51,9;58,1) | 62,5 (57,9;67,3) | 63,8 (61;70,4) | 60,3 (55,6;61) | 0,901 |
| Средний объем эритроцитов, мкм3 | 74,1 (69,5;86,6) | 71,2 (70,4;72) | 73,4 (71,1;75,3) | 78,4 (75,9;80) | 0,100 |
| Среднее содержание гемоглобина в эритроците, пг | 25,5 (22,7;32,9) | 23,3 (22,5;23,5) | 24,6 (24,3;25) | 26 (25,3;26,8) | 0,003 |
| Средняя концентрация гемоглобина в эритроците, г/л | 330 (329;333) | 327 (325;331) | 338 (337;341) | 334 (323;343) | 0,015 |
| Тромбоциты, 109/л | 293 (257;305) | 349 (327;363) | 285 (240;361) | 349 (299;402) | 0,051 |
| Средний объем тромбоцитов, мкм3 | 8,5 (8,4;8,6) | 8 (7,7;8,3) | 8,6 (8,4;8,9) | 8,4 (8,2;8,9) | 0,024 |
| Тромбокрит, % | 0,293 (0,257; 0,305) | 0,349 (0,327;0,363) | 0,285 (0,240;0,361) | 0,349 (0,299;0,402) | 0,051 |
| Средний показатель анизоцитоза, % | 13,1 (12,2;13,6) | 12,9 (12,4;13,3) | 15,8 (15,7;16) | 12,2 (11,6;13,4) | 0,0002 |
| АлАТ, ед/л | 48 (44;56) | 33 (31;45) | 57 (52;67) | 38 (31;51) | 0,0001 |
| АсАТ, ед/л | 33 (31;54) | 27 (25;31) | 36 (36;38) | 39 (37;47) | 0,0004 |
| Щелочная фосфатаза, ед/л | 80 (80;89) | 77 (61;91) | 85 (70;107) | 76 (73;81) | 0,516 |
| Общий белок, г/л | 49,8 (49,6;52,8) | 53,3 (50,4;56,5) | 63,5 (58,6;66,5) | 47,5 (40,7;53) | 0,0001 |
| Альбумины, г/л | 28,3 (27,2;28,7) | 28,6 (27,8;29,2) | 32,3 (30,4;36,8) | 29,6 (24,8;31,5) | 0,032 |
| Глобулины, г/л | 23,3 (21,1;25,5) | 24,9 (20,7;26,3) | 29,6 (25;35,3) | 19 (16,4;23,5) | 0,180 |
Примечание: р<0,05 - ранговый дисперсионный анализ по Фридману
Через четыре недели после однократного нанесения на кожу фипронила в составе Дана Ультра® у собак было отмечено повышение общего количества лейкоцитов при увеличении абсолютного содержания лимфоцитов и гранулоцитов. В процентном отношении возросла доля гранулоцитов. Также установлено повышение таких показателей, как средняя концентрация гемоглобина в эритроците, средний объем тромбоцитов, средний показатель анизоцитоза. После проведения парного сравнения было установлено статистически значимое увеличение количества лейкоцитов, абсолютного числа гра-нулоцитов и среднего показателя анизоцитоза (р=0,005) (табл. 2). Другие изменения являются колебаниями в пределах физиологической нормы исследуемых животных.
Количество лейкоцитов в циркулирующей крови имеет важное диагностическое значение. Благодаря их фагоцитарной активности, участию в формировании иммунного ответа, реализуются не только антимикробные, но и антитоксические механизмы защиты. Пролиферация нейтрофилов возникает в результате воспалительных и иных повреждений тканей, аутоиммунных расстройств, действия лекарственных препаратов [5, 6, 8]. Активацию лейкопоэза у собак можно рассматривать как адекватный ответ на антигенную стимуляцию [4]. В роли антигена может выступать фипронил, входящий в состав препарата, так как не исключается возможность его резорбции в системный кровоток и связывания с белками крови [1, 2].
Показатель анизоцитоза характеризует колебания объема эритроцитов и является важным критерием дифференциальной диагностики и оценки динамики анемий. Изолированное повышение показателя анизоцитоза является ранним признаком развития макроцитарной анемии [5].
Проведенные исследования свидетельствуют о том, что в процессе контакта собак с фипронилом повышаются уровни АлАТ, общего белка и альбуминов в сыворотке крови. При проведении парных сравнений выявлено достоверно значимое повышение АлАТ и общего белка (р=0,005) (табл. 2).
Таблица 2. Уровни статистической значимости при парном сравнении групп при помощи непараметрического теста Вилкоксона с поправкой Бонферрони
| Показатели | Исследование | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 1 | 1 | 2 | 2 | 3 | |
| 2 | 3 | 4 | 3 | 4 | 4 | |
| Лейкоциты, Ч109/л | р=0,386 | р=0,005 | р=0,918 | р=0,005 | р=0,414 | р=0,005 |
| Лимфоциты, 109/л | р=0,115 | р=0,066 | р=0,202 | р=0,109 | р=0,005 | р=0,006 |
| Моноциты, Ч109/л | р=0,017 | р=0,093 | р=0,916 | р=0,183 | р=0,020 | р=0,017 |
| Гранулоциты, Ч109/л | р=0,767 | р=0,005 | р=0,646 | р=0,005 | р=0,475 | р=0,005 |
| Лимфоциты, % | р=0,168 | р=0,114 | р=0,332 | р=0,005 | р=0,005 | р=0,959 |
| Моноциты, % | р=0,236 | р=0,012 | р=0,400 | р=0,202 | р=0,005 | р=0,028 |
| Гранулоциты, % | р=0,241 | р=0,139 | р=0,593 | р=0,005 | р=0,005 | р=0,038 |
| Эритроциты, Ч1012/л | р=0,021 | р=0,016 | р=0,798 | р=0,114 | р=0,016 | р=0,092 |
| Среднее содержание гемоглобина в эритроците, пг | р=0,012 | р=0,332 | р=0,575 | р=0,005 | р=0,006 | р=0,092 |
| Средняя концентрация гемоглобина в эритроците, г/л | р=0,221 | р=0,005 | р=0,575 | р=0,009 | р=0,308 | р=0,241 |
| Средний объем тромбоцитов, мкм3 | р=0,032 | р=0,183 | р=0,712 | р=0,006 | р=0,074 | р=0,386 |
| Средний показатель анизоцитоза, % | р=0,858 | р=0,005 | р=0,414 | р=0,005 | р=0,332 | р=0,005 |
| АлАТ, ед/л | р=0,036 | р=0,005 | р=0,028 | р=0,005 | р=0,638 | р=0,005 |
| АсАТ, ед/л | р=0,005 | р=0,918 | р=0,638 | р=0,006 | р=0,005 | р=0,038 |
| Общий белок, г/л | р=0,202 | р=0,009 | р=0,241 | р=0,005 | р=0,125 | р=0,005 |
| Альбумины, г/л | р=0,444 | р=0,059 | р=0,575 | р=0,083 | р=0,646 | р=0,046 |
| Глобулины, г/л | р=0,767 | р=0,046 | р=0,284 | р=0,202 | р=0,141 | р=0,016 |
Внутриклеточный фермент аланинаминотрасфераза содержится в большем количестве в гепатоцитах. Повышение в сыворотке крови АлАТ является следствием повреждения клеток под действием различных факторов, в том числе интоксикаций. Повышение активности АлАТ отмечается раньше, чем развиваются клинические признаки поражения печени [3].
Общий белок крови представлен фракциями, которые выполняют различные функции. Результаты исследований указывают на статистически значимое повышение общего белка крови, при этом в 3 исследовании отмечается увеличение значения медиан альбуминов и глобулинов по сравнению с 1 и 2-м. Подобные изменения указывают на повышение онкотического давления плазмы крови, что может привести к увеличению ее вязкости [3].
Заключение. Инсектоакарицидные препараты на основе фи-пронила в настоящее время являются эффективными и экономически доступными средствами защиты домашних животных от нападения кровососущих насекомых. Однако при использовании инсектоакари-цидных капель для собак, содержащих в своем составе фипронил, отмечены изменения морфологических и биохимических показателей крови. Установлена стимуляция лейкопоэза, которая рассматривается как ответ на антигенную стимуляцию. У исследуемых собак отмечено статистически значимое повышение АлАТ, что указывает на возможный гепатотоксический эффект фипронила. Повышение общего белка в сыворотке крови требует более тщательного исследования отдельных фракций белка, так как они выполняют разные функции и могут указывать на нарушение как со стороны иммунной системы, так и гепатобилиарной. Морфобиохимические изменения в крови при однократном использовании препарата носят обратимый характер, однако за сезон собак подвергают профилактическим обработкам до 8 раз, а при лечении блошиной инвазии рекомендовано использовать фипронил в течение восьми недель четырехкратно [5,7], что может привести к стойким морфобиохимическим изменениям и негативным последствиям.
Список литературы:
Резюме. В весенне-осенний период часто регистрируются случаи инфестации служебных собак иксодовыми клещами, укусы которых ведут к развитию трансмиссивных болезней. Одними из популярных инсектоакарицидов являются препараты на основе фипронила и регуляторов роста насекомых в форме капель на холку. Целью исследования был анализ морфологических и биохимических показателей крови у собак при обработке препаратом на основе фипронила в форме капель на холку. Исследование проводилось на 10 собаках в зональном центре кинологической службы УВД России по Омской области и на базе кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО Омского ГАУ. У животных двукратно с промежутком тридцать дней проводили забор крови для установления фоновых морфологических и биохимических показателей, затем в область холки однократно наносили 5% фипронил в количестве 4,5 мл для собак с массой тела 20-40 кг. Исследования крови повторяли через тридцать и шестьдесят суток после нанесения препарата. Авторами установлено, что при обработке собак инсектоакарицидным препаратом на основе фипронила развивается лейкоцитоз с преимущественным увеличением количества гранулоцитов, отмечается повышение среднего показателя анизоцитоза, АлАТ и содержания общего белка в сыворотке крови, при этом клинические признаки интоксикации отсутствуют. Морфобиохимические изменения в крови при однократном использовании препарата носят обратимый характер, однако за сезон собак подвергают профилактическим обработкам до 8 раз, что ведет к стойким морфобиохимическим изменениям и негативным последствиям.
Ключевые слова: собаки, немецкая овчарка, инсектоакарициды, фипро-нил, сыворотка крови, плазма крови, клетки крови, гемоглобин, спот-он, проти-вопаразитарная обработка.
Сведения об авторах:
Герунова Людмила Карповна, доктор ветеринарных наук, профессор кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО "Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина"; 644122, г Омск, ул. Вавилова, 31, кв. 71; тел: 8(903)9823090; e-mail: gerliud@mail.ru.
Толмачев Владимир Алексеевич, кандидат ветеринарных наук, начальник службы (ветеринарной) ЦКС полиции УМВД России по Омской области; 644011, г. Омск, Енисейская, 3, корпус 3; тел: 8(908)3192403; e-mail: wat.tolm@mail.ru.
Ответственный за переписку с редакцией: Смыслова Полина Юрьевна, аспирант кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО "Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина"; 644100, ул. Лаптева, 5, кв. 97; тел: 8(961)8849666; e-mail: rusakova.polina@inbox.ru.
http://vetkuban.com/num2_201608.html