rus eng
Архив номеров / Номер 1, 2019 год Распечатать

Динамика антибиотикочувствительности штаммов Enterococcus faecium на молочно-товарных фермах в районах с разным уровнем загрязнения агробиоценозов

УДК 579.24:636.2.034
DOI 10.33861/2071-8020-2019-1-7-10

Донник И.М., Исаева А.Г., Быкова О.А., Лысова Я.Ю., Моисеева К.В. ФГБОУ ВО
«Уральский государственный агарный университет», г. Екатеринбург
Кривоногова А.С.ФГБНУ «Уральский федеральный аграрный научно-исследовательский
центр УрО РАН», г. Екатеринбург

Введение. Снижение чувствительности микроорганиз­мов к антибиотикам является в настоящее время гло­бальной проблемой, ставящей под угрозу благополучие людей, достигнутое в антибиотиковую эру [6, 11].

Распространение резистентности в последние годы приобрело лавинообразный характер, что обусловлено множеством способс­твующих процессу факторов. Основными из них являются масш­табное применение антибиотиков в медицинских лечебных учреж­дениях, бесконтрольное использование препаратов населением, горизонтальное распространение генов резистентности в мик­робиоценозах, а также интенсивное применение антибиотиков в сельском хозяйстве [4, 12]. Особенное значение имеют кормовые антибиотики, запрещенные к применению в отдельных странах, а также антибиотикопрофилактика - метод, позволяющий нивелиро­вать технологические погрешности в животноводстве с помощью ряда антибактериальных препаратов. В России антибиотикопро- филактика до сих пор применяется для стимуляции метаболизма и предотвращения болезней, однако этот спорный метод повсемест­но запрещен в ряде развитых стран Европы, Азии и Америки. При всех достоинствах этих двух аспектов применения антибиотиков в животноводстве, их главным и наиболее опасным недостатком является формирование резистентных штаммов условно-патоген­ной и патогенной микрофлоры у животных. В России животные ежегодно употребляют около 3,5 тыс. тонн антибиотиков, из них 19% - в качестве стимуляторов роста и 22% - для профилактики [5]. Промышленные технологии содержания продуктивных живот­ных подразумевают наличие большого поголовья на ограниченной площади, ограничение подвижности животных, тесный контакт, скученность, что способствует распространению микроорганизмов среди поголовья. При этом на фермах, находящихся в районах с неблагоприятной экологической обстановкой, у животных имеют­ся хронические вторичные иммунодефициты, что приводит к росту заболеваемости, и, следовательно, к повышенной потребности в антибиотиках для лечения животных [1, 4]. Формирование устойчи­вости к антибиотикам и распространение на фермах резистентных штаммов условно-патогенных микроорганизмов, таких как стафи­лококки, энтерококки, синегнойная палочка, протей происходит, в том числе, и по причине недостаточного предварительного контроля чувствительности микроорганизмов к препаратам, несоблюдения минимальных сроков лечения. Зачастую антибиотик для терапии выбирают исходя из его цены, а не эффективности в конкретном случае. Сочетание описанных выше условий (техногенное загряз­нение сельхозугодий, несбалансированный рацион, технологичес­кие погрешности, неадекватный выбор препарата и нарушение сроков терапии) способствует быстрой адаптации микрофлоры, снижению чувствительности к антибиотикам и резкому падению эффективности лечения, что, в свою очередь, приводит к увеличе­нию доз антибиотиков и, в конечном итоге, к формированию резистентности у микроорганизмов. Полный отказ от применения ан­тибактериальных препаратов в условиях постоянной стрессовой и токсической нагрузки на животных в настоящее время невозможен [2, 7, 8]. Поэтому требуются активные комплексные меры по повы­шению эффективности антибиотикотерапии и общей устойчивости к болезням организма животных, находящихся в неблагоприятных экологических 

условиях. Проведенные нами в период 2016-2018 гг. скрининговые исследования видового состава микробиоцено­зов на молочно-товарных фермах Свердловской области показали, что наиболее распространенными представителями условно-пато­генной микрофлоры являлись Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, и Pseudomonas aeruginosa, при этом Ent. faecium обнаруживали в 100% отобранных проб [3]. На­ибольшую опасность в настоящее время представляют полирезис- тентные и ванкомицин-резистентные энтерококки (VRE), вызываю­щие тяжелые энтериты, бактериемии и сепсис у людей и животных с иммунодефицитами физиологического (период новорожденнос- ти) и патологического характера (инфекционные, онкологические, токсические и др.) [7, 8, 9, 10].

В связи с этим, представляется актуальным изучение динамики антибиотикочувствительности энтерококков на молочно-товарных фермах, расположенных в районах с выраженной техногенной нагрузкой и характеризующихся значительным распространением вторичных иммунодефицитов у животных.

Целью исследования являлся анализ чувствительности к анти­биотикам выделенных штаммов Ent. faecium на молочно-товарных фермах, расположенных в районах с разной степенью техноген­ного загрязнения агроценозов. В ходе выполнения работы были решены следующие задачи: установлена структура патогенной и условно-патогенной микрофлоры на МТФ, определена чувствитель­ность к антибиотикам выделенных штаммов энтерококков, изучена взаимосвязь между чувствительностью микроорганизмов к анти­биотикам и техногенной нагрузкой на животных, опосредованной через загрязнение ферменных агроценозов.

Материалы и методы исследований. Проводили исследова­ние типовой патогенной и условно-патогенной микрофлоры на молочно-товарных фермах, расположенных в районах с разной степенью загрязнения окружающей среды ксенобиотиками техно­генного происхождения. Анализировали МТФ в трех районах: кон­трольный район (КР) - расположен на значительном удалении от промышленных источников техногенной эмиссии; опытный район 1 (ОР 1) - расположен на расстоянии 70-120 км от крупных про­мышленных предприятий; опытный район 2 (ОР 2) - находится в зоне наиболее интенсивного загрязнения, на удалении 20-60 км от крупных предприятий, с неблагоприятной розой ветров и многолет­ней стойкой контаминацией почв, водоемов, растений тяжелыми металлами и радионуклидами. Изучали родовой и видовой состав микробиоты, чувствительность микроорганизмов к классам анти­биотиков, наиболее часто применяемым в ветеринарной практике и кормлении: рифампицин (ансамицины), меронем (карбапенемы бета-лактамы), ампициллин, амоксициллин (полусинтетические пе­нициллины), цефазолин (цефалоспорины I поколения), энрофлокса- цин (фторхинолоны), азитромицин (макролиды и азалиды), тетра­циклин (тетрациклины) и ванкомицин (гликопептиды). Материалом для микробиологических исследований являлись пробы кормов, воды, воздуха, подстилки, навоза, молока; смывы с оборудования и инвентаря; со слизистых оболочек и кожного покрова стельных, отелившихся и лактирующих коров, а также телят. Всего было отоб­рано 386 проб. Бактериологические исследования выполняли по стандартным общепринятым методикам, пробы кормов исследо­вали в соответствии с «Правилами бактериологического иссле­дования кормов», чувствительность к антибиотикам определяли диско-диффузионным методом в соответствии с МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибакте­риальным препаратам. Методические указания». «Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда (проект № 18-16-00040)».

Результаты исследований и их обсуждение. При микробио­логическом анализе проб, отобранных на исследуемых МТФ, было установлено, что родовой и видовой состав условно-патогенной микрофлоры сравнительно одинаков, однако структура микроби­оценоза различается соотношением микроорганизмов в зависи­мости от предприятия, отделения и непосредственного объекта. Наиболее часто в пробах обнаруживали Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Echerichia coli, Bacillius subtilis, Enterobacter spp., реже выявляли Enterococcus durans, Citrobacter farmeri, Klebsiella spp. Кроме того, в значительном количестве проб обнаруживали Candida albicans, Aspergillus spp., Mucor spp., Penicillium spp, Fusaium spp. (табл. 1).

Таблица 1 Общая структура условно-патогенной микрофлоры на МТФ в районах с разной степенью техногенного загрязнения территорий

Микроорганизмы

Контрольный район

Опытный район 1

Опытный район 2

Enterococcus faecium

19,4%

15,8%

16,6%

Enterococcus faecalis

0,2%

11,8%

8,7%

Staphylococcus aureus

14,5%

13,4%

9,2%

Pseudomonas aeruginosa

9,8%

12,7%

12,9%

Aspergillus spp.

14,4%

8,6%

8,3%

Candida albicans

13,6%

9,9%

6,3%

Enterobacter spp.

9,7%

10,6%

7,5%

Echerichia coli

5,8%

0,4%

6,8%

Proteus spp.

4,7%

1,8%

8,7%

Staphylococcus saprophyticus

2,9%

0,7%

2,9%

Mucor spp.

2,8%

7,3%

8,1%

Staphylococcus epidermidis

1,8%

6,1%

3,2%

Прочие

менее 1%

менее 1%

менее 1%

В контрольном районе из 100% отобранных на фермах проб высевали Ent. faecium. В опытном районе 1 Ent. faecium выявля­ли в 85% проб, Ent. faecalis - в 65%. В опытном районе 2 Ent. faecium встречался в 79% отобранных проб, Ent. faecalis - в 41%. В родильных отделениях ферм обнаруживали преимущественно P. aeruginosa, S. aureus, Ent. faecium. Штаммы кишечной палочки, эпидермального стафилококка и фекального энтерококка высева­ли в единичных случаях. В отделениях дойных коров выявили про­тивоположную тенденцию - в основном из смывов и проб высева­ли E.coli, Ent. faecalis, S. epidermidis, S. saprophyticus и Proteus (в 86-90% случаев был представлен P. vulgaris, P. mirabilis - 10-14% от выделенных штаммов протея).

Наиболее интенсивно энтерококками были обсеменены инвен­тарь в отделениях (совки, скребки, ветоши, шланги, вёдра), под­стилка, пол, поилки и кормушки, а также рабочая одежда персона­ла (халаты, перчатки). В молоке для телят также выявляли штаммы Ent. faecium и Ent. faecalis.

Обращает на себя внимание тот факт, что в смывах со слизис­тых рта и носа у телят обнаруживали штаммы Ent. faecium с профи­лем антибиотикочувствительности как у штаммов, обнаруженных в родильном отделении этой фермы. Данный факт указывает на об­семенение новорожденного телёнка штаммами условно-патоген­ной микрофлоры при его контакте с подстилкой и поверхностями в родильном отделении.

Наиболее неблагоприятна ситуация, когда в родильном отделе­нии фермы присутствуют микроорганизмы с низкой чувствитель­ностью к антибиотикам. Так, при исследовании микрофлоры в ро­дильных отделениях МТФ в контрольном районе (КР) суммарная доля всех штаммов микроорганизмов, имевших резистентность к одному антибиотику, составляла около 11% от отобранных в отде­лении проб; резистентность к двум антибиотикам - 3,3%, полире­зистентность - 1,8%. В районе со средней степенью техногенного загрязнения (ОР-1) доля штаммов, резистентных к одному антибио­тику, составляла в среднем 17,5%, к двум - 4,8%, полирезистентные штаммы - около 5,5% от всех выделенных в родильных отделениях. В районе с наиболее сложной экологической обстановкой (ОР-2) на фермах в родильных отделениях обнаружили следующую картину: доля монорезистентных штаммов условно-патогенных и патоген­ных микроорганизмов составляла в среднем 16,8%, устойчивость к двум антибиотикам разных классов выявили у 13,5% штаммов, полирезистентых было в среднем 8,4% от всех выделенных штам­мов. Полирезистентность выявляли, в основном, у золотистого ста­филококка, энтерококков, протея, синегнойной палочки,

Анализ данных по антибиотикочувствительности всех штаммов микроорганизмов, выделенных в ходе всего исследования МТФ в контрольном и опытных районах, показал, что в общем по классам антибиотиков выявлена резистентность к полусинтетическим пени­циллинам у 21% штаммов, к карбапенемам - у 6,4%, к тетрацикли­нам - 11,5%, к цефалоспоринам I поколения - 3,8%, к фторхиноло- нам - у 2,5%, к макролидам - у 9,6%, к гликопептидам - у 8,3%, к ансамицинам у 1,9% штаммов.

Исследование антибиотикочувствительности энтерококков, про­веденное в 2018 году, показало, что на МТФ в контрольном районе штаммы Ent. faecium в среднем в 10,2% случаев были устойчивы к одному антибиотику (меропенем, тетрациклин или ампициллин); в 6,6% случаев - к двум АБП. Полирезистентные штаммы составляли 5% от всех выделенных из проб (резистентность к карбапенемам, полусинтетическим пенициллинам, тетрациклинам). При этом зна­чительное число полирезистентных штаммов энтерококков было выделено из смывов с инвентаря для ухода за телятами, из молока для телят, а также, подстилки в родильных отделениях. В опытном районе 1 (ОР 1) у 18,2% от всех выделенных штаммов Ent. faecium выявили устойчивость к антибиотикам одного класса; у 11% - к двум классам АБП (наиболее часто в сочетании: карбапененмы + ванкомицин, тетрациклины + ванкомицин). Полирезистентных было выявлено около 7,5%. Анализ штаммов Ent. faecalis обнару­жил наличие полирезистентных штаммов в пробах подстилки, смы­

вов с инвентаря родильных отделений МТФ, с ветоши для подмыва­ния дойных коров, со слизистой оболочки влагалища отелившихся коров и проб навоза из буртов разных МТФ. При этом профиль резистентности таких штаммов Ent. faecalis в подавляющем боль­шинстве случаев (89%) включал резистентность к карбапенемам, фторхинолонам, тетрациклинам и ванкомицину.

В опытном районе 2 (ОР 2) обнаружили, что наибольшее ко­личество эпизодов монорезистентности проявили штаммы Ent. faecium (более 50% от всех выделенных), а полирезистентности - S. aureus (28% выделенных штаммов имели устойчивость к АБП 3 и более классов). При этом устойчивость к двум АБП обнаружили у 36% выделенных энтерококков (табл. 2).

Таблица 2 Резистентность штаммов Enterococcus faecium на МТФ в трех районах в 2018 году

Ent. faecium

КР

ОР-1

ОР-2

Монорезистентность

10,2%

18,2%

50,0%

Резистентность к 2 АБП

6,6%

11,0%

36,4%

Полирезистентность

5,0%

7,5%

14,8%

Отдельное значение имеет чувствительность энтерококков к ванкомицину. Распространение ванкомицин-резистентных штам­мов представляет большую опасность, и требует отдельного контро­ля как в лечебно-профилактических учреждениях, так и на животно­водческих предприятиях [11, 13]. Проведенное нами исследование чувствительности обнаруженных штаммов Ent. faecium к ванкоми­цину показало, что в пробах из контрольного района отсутствовали штаммы ванкомицин-резистентных энтерококков. При этом 75% штаммов имели хорошую чувствительность, и 25% - сниженную чувствительность к ванкомицину. В опытном районе 2 половина от выделенных энтерококков имела низкую чувствительность, 42% - хорошую, а 8% были резистентны к ванкомицину. Большей час­тью это были полирезистентные штаммы, невосприимчивые также к тетрациклинам, полусинтетическим пенициллинам и карбапенен- мам. В опытном районе 1 доля ванкомицин-резистентных энтеро­кокков была выше, чем в ОР-2 и составляла 26% (рисунок 1).

Чувствительность к ванкомицину штаммов Ent. faecium и Ent. faecalis, выделенных на МТФ из разных экологических районов в 2018 г.

Рис. 1. Чувствительность к ванкомицину штаммов Ent. faecium и Ent. faecalis, выделенных на МТФ контрольного и опытных районов в 2018 году

Характерная для VRE комбинация «карбапенемы + ванкоми­цин» в профиле антибиотикочувствительности [6] встречалась у 12,6% выделенных штаммов энтерококков.

Выводы. Проведенные нами исследования показали, что услов­но-патогенная микрофлора на молочно-товарных фермах, располо­женных в районах со средним и интенсивным техногенным загряз­нением агроценозов (ОР-1 и ОР-2), в целом отличается сниженной чувствительностью к антибиотикам по сравнению с микрофлорой из контрольного района. В опытных районах было обнаружено больше штаммов энтерококков, имеющих резистентность к одному антибиотику, к двум антибиотикам разных классов, а также боль­ше полирезистентных штаммов Ent. faecium и Ent. faecalis, чем в контрольном районе. Резистентность к ванкомицину обнаружили у энтерококков в опытных районах 1 и 2, в контрольном районе таких штаммов выявлено не было. Таким образом, можно сделать выводы о том, что формирование резистентности и распростране­ние резистентных штаммов энтерококков происходит более интен­сивно на фермах, расположенных в экологически неблагополучных районах. Постоянная токсическая нагрузка на организм животных, вызванная техногенным загрязнением агроценозов, вероятно, яв­ляется одним из факторов, ускоряющих формирование резистент­ности и распространение резистентных к антибиотикам штаммов на животноводческих объектах.

Список литературы:

  1. Донник И.М. Физиологические особенности животных в районах тех­ногенного загрязнения / И.М. Донник, О.Г. Лоретц, М.И. Барашкин и др. // Ветеринария Кубани. - 2013. - № 1. - С. 21-22.
  2. Кальницкая О.И., Уша Б.В., Мишиев Э.А. Ветеринарно-санитарная оценка продуктов животного происхождения, содержащих антибиотики//Ве- теринария. - 2010. - № 2. - С. 61-63.
  3. Кривоногова, А.С. Антибиотикочувствительность микрофлоры крупного рогатого скота в районах с техногенным загрязнением/Кривоногова А.С., Моисеева К.В., Лысова Я.Ю.//Вопросы нормативно-правового регулирова­ния в ветеринарии. - 2017. - № 3. - С. 159-161.
  4. Ларцева, Л.В. Экологическая и биологическая опасность резистент­ности условно-патогенной микрофлоры к антибиотикам (обзор) /Ларцева Л.В., Обухова О.В., Бармин А.Н.// Российский журнал прикладной экологии. - 2015. - № 4 (4). - С. 47-52.
  5. Сборник материалов конференций часть XII под ред. Еделева Д.А/ Еде- лев Д.А, Майорова Н.В., Кальницкая О.И., Стахи Т.А., Тырсин Ю.А., Уша Б.В., Василиевич Н.В., Скляренко С.А., Сидоренко Ю.И., Кантере В.М., Мойсеяк М.Б., Гладько В.В., Долгин Ю.А., Решетова А.Е., Кузнецов А.Л., Будаева В.А. // Сборник материалов конференций в 15 ч. под общ. ред. Т.А. Стахи - М.: ИК МГУПП, 2015.
  6. Chung, Y.S., Kwon, K.H., Shin, S., Kim, J.H., Park, Y.H., Yoon, J.W., 2014. Characterization of veterinary hospital associated isolates of Enterococcus species in Korea, Journal of Microbiology and Biotechnology, 24, 386 - 393
  7. Iweriebor, B.C., Obi, L.C., Okoh, A.I., 2016. Macrolide, glycopeptide resistance and virulence genes in Enterococcus species isolates from dairy cattle, Journal of Medical Microbiology, 65, 641-648
  8. Jackson, C.R., Lombard, J.E., Dargatz, D.A., Fedorka-Cray, P.J., 2011. Prevalence, species distribution and antimicrobial resistance of enterococci isolated from US dairy cattle, Letters in Applied Microbiology, 52, 41 - 48.
  9. Kim, D.H., Chung, Y.S., Park, Y.K., Yang, S-J., Lim, S.K., Park, H.Y., Park, K.T., 2016. Antimicrobial resistance and virulence profiles of Enterococcus spp. isolated from horses in Korea, Clinical Immunology, Microbiology and Infectious Disease, 48, 6 - 13
  10. Pruksakom, C., Pimam, C., Boonsoongnem, A., Narongsak, W., 2016. Detection and phenotypic characterization of vancomycin-resistant Enterococcus in pigs in Thailand, Agriculture and Natural Resources, 50, 199 - 203
  11. Ventola, L.C., 2015. The antibiotic resistance crisis. Part I: causes and threats, Pharmacy and Therapeutics, 40, 1- 3
  12. von Wintersdorff, C.J.H., Penders, J., van Niekerk, J.M., Mills, N.D., Majumder, S., van Alphen, L.B., Savelkoul, P.H.M., Wolffs, P.F.G., 2016. Dissemination of antimicrobial resistance in microbial ecosystems through horizontal gene transfer, Frontiers in Microbiology, 7, 173
  13. Wurster, J.I., Saavedra, J.T., Gilmore, M.S., 2016.Impact of antibiotic use on the evolution of Enterococcus faecium, Journal of Infectious Diseases, 213, 1862 - 1865.

Резюме. В статье приведены результаты исследований условно-патоген­ной микрофлоры молочно-товарных ферм, расположенных в трех районах с разной степенью загрязненных промышленными поллютантами. Изучены структура условно-патогенной части микробиоценозов ферм, чувствитель­ность штаммов наиболее распространенных микроорганизмов к антибиоти­кам. Проведен детальный анализ антибиотикочувствительности Ent. faecium, выделенных с разных объектов на молочно-товарных фермах в контрольном

и опытных районах. Актуализированы данные по состоянию антибиотико- резистентности энтерококков на 2018 г. Установлена взаимосвязь между степенью техногенной контаминации окружающей среды и количеством штаммов энтерококков со сниженной чувствительностью и резистентностью к одному, двум, трем и более антибиотикам различных классов. Изучены тен­денции распространения полирезистентных штаммов Ent. faecium, на жи­вотноводческих объектах. Дана характеристика чувствительности штаммов энтерококков к ванкомицину. В ходе исследований обнаружили, что харак­терный для VRE-штаммов профиль антибиотикочувствительности, встречался у энтерококков только в районах с техногенным загрязнением. В пробах с ферм из контрольного района, отличающегося минимальным уровнем техно­генной контаминации, фактов резистентности энтерококков к ванкомицину не обнаружили. Результаты проведенных исследований показали, что фор­мирование и распространение резистентных штаммов энтерококков было более интенсивным на фермах, расположенных в экологически неблагопо­лучных районах, характеризующихся выраженной контаминацией воздуха, почв, водоемов, кормовых растений токсичными металлами и радионукли­дами промышленного происхождения. «Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда (проект № 18-16-00040)».

Ключевые слова: условно-патогенная микрофлора, Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, антибиотикочувствительность, антибиотико- резистентность, ванкомицин-резистентный энтерококк, крупный рогатый скот, техногенное загрязнение, тяжелые металлы, радионуклиды.

Сведения об авторах:

Донник Ирина Михайловна, вице-президент Российской академии наук, заведующий кафедрой инфекционной и незаразной патологии ФГБОУ ВО «Уральский государственный агарный университет»; 620075, г. Екатеринбург, ул. К. Либкнехта, 42; тел.: 8-343-371-33-63; e-mail: ktqrjp7@yandex.ru.

Быкова Ольга Александровна, доктор сельскохозяйственных наук, доцент, начальник управления по научно-исследовательской деятельности ФГБОУ ВО «Уральский государственный аграрный университет»; 620075, г. Екатерин­бург, ул. К. Либкнехта, 42; тел.: 8-343-2956131; e-mail: olbyk75@mail.ru.

Лысова Яна Юрьевна, научный сотрудник научно-исследовательского ин­ститута биологической безопасности ФГБОУ ВО «Уральский государственный аграрный университет»; 620075, г. Екатеринбург, ул. К. Либкнехта, 42; тел.: 8-922-1532003; e-mail: boris.wet@mail.ru.

Моисеева Ксения Викторовна, ассистент кафедры инфекционной и неза­разной патологии ФГБОУ ВО «Уральский государственный аграрный универ­ситет»; 620075, г. Екатеринбург, ул. К. Либкнехта, 42; тел.: 8-953-0475887; e-mail: moiseeva456@yandex.ru.

Кривоногова Анна Сергеевна, доктор биологических наук, доцент, стар­ший научный сотрудник отдела мониторинга и прогнозирования инфекцион­ных болезней ФГБНУ «Уральский федеральный аграрный научно-исследова­тельский центр УрО РАН»; 620142, г. Екатеринбург, ул. Белинского, 112а; тел.: 8-343-2951774; e-mail: tel-89826512934@yandex.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Исаева Альбина Геннадь­евна, доктор биологических наук, доцент, профессор кафедры инфекци­онной и незаразной патологии ФГБОУ ВО «Уральский государственный аграрный университет»; 620075, г. Екатеринбург, ул. К. Либкнехта, 42; тел.: 8-343-371-36-50; e-mail: isaeva.05@bk.ru.

 

 
2011 © Ветеринария Кубани Разработка сайта - Интернет-Имидж