Выявление крупного рогатого скота со скрытым течением туберкулезной инфекции

УДК619:579.872.21

Макаров Ю.А., Горковенко Н.Е. ФГБОУ ВПО "Кубанский государственный аграрный университет", г. Краснодар

Проблема персистирования бактерий является в настоящее время одной из наиболее актуальных в инфекционной патологии животных.

Микробы, сохраняющие жизнеспособность в тканях макроорганизма, способствуют переходу заболевания в хроническую или латентную форму, затем, реверсируя в исходный бактериальный вид, они могут вызывать обострение инфекционного процесса. Феномен микробного персистирования опасен, как для самого носителя, так и для контактирующих с ним животных, так как может явиться источником распространения инфекции.

Как наиболее распространенные формы микробного персистирования многие исследователи рассматривают L-формы бактерий. Превращение в L-формы - свойство, присущее всем микроорганизмам. Способность различных микробов под влиянием антибиотиков и ряда других факторов образовывать в организме L-формы и близкие им варианты бактерий, длительное их персистирование в условиях макроорганизма и, особенно, возможность реверсии требует ревизии наших взглядов на роль различных форм существования возбудителя в инфекционной патологии. Наблюдения последних лет [1, 2, 3] показывают, что подобные формы могут возникать в организме под влиянием его защитных сил и других, еще не известных факторов, когда роль антимикробного агента ничтожно мала или практически сведена к нулю, так как он совсем не применялся. В этих условиях микроб оказывается способным достигать в макроорганизме полностью сбалансированного состояния, тогда он не пролиферирует, и не разрушается, а длительно персистирует, сохраняя потенциальную способность к реверсии в исходный бактериальный вид со всеми вытекающими отсюда последствиями. Это создает определенные трудности и для выявления инфицированных животных при плановой аллергической диагностике туберкулеза крупного рогатого скота. Метод аллергического исследования основан на выявлении у больных животных гиперчувствительности замедленного типа к специфическому аллергену.

В настоящее время аллергическое исследование крупного рогатого скота на туберкулез включает постановку внутрикожной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и последующий учет и оценку аллергической реакции [4]. Реагирующих животных подвергают дополнительным исследованиям офтальмопробой или внутривенной пробой с применением туберкулина.

Однако данный способ не позволяет выявить прижизненную латентную инфекцию. Чувствительность к туберкулину у животных со скрытым течением туберкулезной инфекции выражена слабее, а реакции на туберкулин подвержены колебаниям. В таком случае инфицированные возбудителем туберкулеза, но не выявленные при исследовании животные остаются в стаде и могут являться причиной заболевания в хозяйстве [1, 5].

Сопоставление этих положений с данными многочисленных наблюдений о выраженном полиморфизме возбудителя туберкулеза явилось предпосылкой для проведения настоящего исследования, цель которого заключалась в повышении точности диагностики туберкулеза, своевременном прижизненном выявлении крупного рогатого скота со скрытым течением туберкулезной инфекции методом аллергической диагностики.

Материал и методы. В диагностируемом стаде из 200 голов крупного рогатого скота перед проведением аллергических исследований на туберкулез выбрали группу индикаторных животных (n=10). у которых произвели забор венозной крови по две пробы от каждого животного. Одна проба крови с антикоагулянтом гепарином, разведенным в изотоническом растворе натрия хлорида из расчета 25 ЕД/ мл для определения индекса завершенности фагоцитоза (ИЗФ). Вторая проба - без антикоагулянта для определения среднего цитохимического коэффициента (СЦК) миелопероксидазы. Определение ИЗФ и СЦК проводили по общепринятым методикам [6]. Затем проводили постановку внутрикожной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и последующий учет реакции. Исследования проведены дважды с интервалом 60 дней (опыт 1 и опыт 2).

Результаты и обсуждение. В период проведения 1-го опыта в группе индикаторных коров индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ) в среднем составлял 0,9±0,03, а средний цитохимический коэффициент (СЦК) миелопероксидазы 1,88±0,1 ед. (табл. 1). Затем провели аллергическое исследование стада на туберкулез, включающее постановку внутрикожной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и последующий учет и оценку аллергической реакции. В стаде выявили одно положительно реагирующее на ППД-туберкулин животное.

Таблица 1. Результаты определения индекса завершенности фагоцитоза и активности миелопероксидазы у индикаторных коров, n=10

Показатели	1 опыт	2 опыт
Показатель ИЗФ	0,9±0,03	1,0±0,0
СЦК миелопероксидазы, ед.	1,88±0,1	2,15±0,06
Количество реагирующих на ППД- туберкулин животных в стаде, голов	1	4

Через 60 дней после проведения 1-го опыта в том же стаде у индикаторных животных повторно произвели забор венозной крови по две пробы от каждого животного для определения ИЗФ и СЦК ми-елопероксидазы.

Установлено, что индекс завершенности фагоцитоза в этот период, в среднем по группе составлял 1, а средний цитохимический коэффициент миелопероксидазы - 2,15+0,06 ед. (табл. 1). Затем провели аллергическое исследование стада на туберкулез, включающее постановку внутрикожной пробы с ППД туберкулином для млекопитающих и последующий учет реакции. В стаде выявлено 4 реагируюших на ППД-туберкулин животных. От убитых с диагностической целью реагирующих животных выделен возбудитель туберкулеза.

Из полученных данных следует, что при средних показателях индекса завершенности фагоцитоза, равного 1, и среднего цитохимического коэффициента миелопероксидазы, равного 2,15+0,06 ед., организм животного дает более полноценный ответ на введение аллергена, что позволяет выявить крупный рогатый скот со скрытым течением туберкулезной инфекции.

Заключение. В результате проведенных исследований разработан и запатентован "Способ выявления крупного скота со скрытым течением туберкулезной инфекции" [7], включающий постановку внутрикожной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и последующий учет реакции. В отличие от традиционного метода аллергической диагностики разработанный способ предполагает пред-варительноеопределение в крови животных уровня фагоцитарной активности и цитохимическое исследование лейкоцитов на миелопе-роксидазу. После чего при средних показателях индекса завершенности фагоцитоза, равного 1, и среднего цитохимического коэффициента миелопероксидазы, равного 2,15±0,06 ед., проводят постановку внутрикожной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и последующий учет реакции.

Способ прост в применении, повышает точность диагностики, позволяет своевременно выявлять животных со скрытым течением туберкулезной инфекции. В результате сокращается срок нахождения в стаде инфицированных животных и снижается напряженность эпизоотической ситуации по туберкулезу. Использование данного метода позволяет определять и корректировать сроки проведения аллергических исследований крупного рогатого скота на туберкулез.

Список литературы:

1. Макаров Ю.А. L-формы микобактерий туберкулеза: монография / Ю.А. Макаров. - Благовещенск, 1997. - 172 с.
2. Макаров Ю.А. Патоморфология экспериментального туберкулеза у лабораторных животных / Ю.А. Макаров, И.Ю. Макаров. - Благовещенск. Даль-ГАУ, 2008. - 120 с.
3. Макаров Ю.А. Персистирование L-форм микобактерий туберкулеза в организме лабораторных животных / Ю.А. Макаров, Н.Е. Горковенко // Труды Кубанского госуд. аграр. университета, 2014. - № 5 (50). - С. 148-151.
4. Наставление по диагностике туберкулеза животных (утв. Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации 18 ноября 2002 г.) - М., 2002. - С. 8-25.
5. Найманов А.Х. Сравнительная оценка прижизненных методов диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / А.Х. Найманов // Ветеринария, 2009. - № 2. - С. 7-14.
6. Кисляк Н.С. Клетки крови у детей в норме и патологии / Н.С. Кисляк, Р.В. Ленская. - М. : Медицина, 1978. - 256 с.
7. Способ выявления крупного рогатого скота со скрытым течением туберкулезной инфекции / Макаров Ю.А., Сорокина А.И., Кандыбина Т.В. и др. - Патент РФ № 2476877 (Заявка № 2010130277, приоритет от 19.07.2010, опубл. 27.02.2013. - Бюл. № 6).

Резюме. Микроорганизмы, сохраняющие жизнеспособность в тканях макроорганизма, способствуют переходу заболевания в хроническую или латентную форму. Этот феномен обозначается термином "персистенция". Чаще всего микроорганизмы персистируют в виде L-форм. Практически все микробы способны образовывать в макроорганизме L-формы и близкие им варианты бактерий, что дает им возможность длительно персистировать в усло-виях макроорганизма, при этом сохраняется возможность их реверсии в исходный бактериальный вид. Скрыто протекающая туберкулезная инфекция представляет серьезную опасность в эпизоотическом отношении, так как под влиянием неблагоприятных факторов внешней среды латентная инфекция может переходить в прогрессирующий активный туберкулез. Кроме того, это создает определенные трудности и для выявления инфицированных животных при плановой аллергической диагностике туберкулеза крупного рогатого скота. Цель исследования заключалась в повышении точности диагностики туберкулеза, своевременном прижизненном выявлении крупного рогатого скота со скрытым течением туберкулезной инфекции методом аллергической диагностики. Перед проведением аллергической диагностики на туберкулез у индикаторной группы животных проводили исследование фагоцитарной активности крови и цитохимическое исследование лейкоцитов на миелопероксидазу. Проведенными исследованиями установлено, что при определенном уровне иммунного статуса (ИЗФ=1 и СЦК миелопероксидазы - 2,15+0,06 ед.) организм животного дает более полноценный ответ на введение аллергена, что позволяет выявить крупный рогатый скот со скрытым течением туберкулезной инфекции. Разработан и запатентован "Способ выявления крупного скота со скрытым течением туберкулезной инфекции", который повышает точность диагностики, позволяет своевременно выявлять животных со скрытым течением туберкулезной инфекции.

Ключевые слова: туберкулез, микобактерии, персистенция, L-формы, аллергическая диагностика, крупный рогатый скот, индикаторная группа, фагоцитоз, индекс завершенности фагоцитоза, миелопероксидаза, цитохимический коэффициент.

Сведения об авторах

Макаров Юрий Анатольевич, доктор ветеринарных наук, академик РАН, профессор, профессор кафедры микробиологии, эпизоотологии и вирусологии ФГБОУ ВПО "Кубанский государственный аграрный университет"; 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13; e-mail: prof-makarov@mail.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: ГорковенкоНаталья Евгеньевна, доктор био-логических наук, профессор кафедры прикладной экологии ФГБОУ ВПО "Кубанский государственный аграрный университет"; тел.: 8-962-861-99-72; 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13; e-mail: gorkovenko-n@mail.ru.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей