rus eng
Архив номеров / Номер 5, 2020 год Распечатать

Реакция непрямой гемагглютинации при инфекционном эпидидимите баранов для индикации антигена B. ovis в биоматериале

УДК 619.616.98.579.841.935.07
DOI 10.33861/2071-8020-2020-5-23-25

Яникова Э.А., Микаилов М.М.,Халиков А.А., Гулиева А.Т. Прикаспийский зональный научно-исследовательский
ветеринарный институт - филиал ФГБНУ «ФАНЦ РД», Республика Дагестан, г. Махачкала
Черных О.Ю. ГБУ КК «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», г. Кропоткин

Введение. Бруцеллезная природа инфекционного эпидидимита баранов установлена G. Simmons и W. Hall (1953), M. Buddle и B. Boyes (1953) в Австралии и Новой Зеландии, где это заболевание было установлено впервые и имело широкое распространение.

В Российской Федерации инфекционный эпидидимит баранов диагностирован серологически в 1967 году в Псковской области П.А. Три-ленко и др. (1968) и в Дагестане М.М. Далгат (1978) [3,7]. В последние годы это заболевание регистрировалось во многих хозяйствах целого ряда других областей, республик и краев, в том числе в Дагестане.

Прижизненная диагностика инфекционного эпидидимита баранов включает клинический осмотр животных, исследование сыворотки крови в реакции длительного связывания комплемента (далее, РДСК), реакции непрямой гемагглютинации (далее, РНГА), биоматериала - реакции нейтрализации антител (далее, РНАт) и бактериологически [2,5].

РДСК имеет ряд недостатков, обусловленных необходимостью использования многих компонентов, нестабильностью компонента, ан-тикомплементарностью антигена, сложности постановки реакции.

Клинический осмотр (пальпация семенников и придатков) служит только ориентировочным методом диагностики, так как орхиты и эпидидимиты у баранов наблюдаются и при ряде других инфекционных и неинфекционных заболеваний и, наоборот, эти признаки, нередко, могут отсутствовать у инфицированных B.ovis баранов.

Наиболее точным методом диагностики инфекционного эпидидимита, также как и бруцеллеза, является бактериологический. Однако, он не может быть использован для массовых прижизненных исследований в связи с необходимостью в ряде случаев убоя животных и значительной сложностью и длительностью проведения исследований. Кроме того, эффективность бактериологического метода зависит от качества питательных сред, концентрации возбудителя в исследуемом материале, степени загрязненности последнего посторонней микрофлорой и времени прошедшего с момента заряжения животного. Срок бактериологического исследования составляет 15-30 дней и более при постановке биологической пробы, в лучшем случае результаты известны лишь через 4-5 дней.

Нередко от животных, имеющих положительные серологические результаты или клинические признаки заболевания, выделить возбудителя не удается, поэтому отрицательные результаты бактериологической диагностики имеют относительное значение.

По литературным данным одним из перспективных методов обнаружения возбудителя болезни или антигена в исследуемом материале является РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом. Однако, при инфекционном эпидидимите баранов антительный эритроцитарный диагностикум для РНГА еще не разработан, а при бруцеллезе животных эта реакция изучена недостаточно [1, 4, 6, 8].

В связи с этим, разработка высокоэффективного, надежного, быстрого и точного метода диагностики инфекционного эпидидимита баранов, в частности, РНГА с антительным эритроцитарным диагнос-тикумом, предназначенным для индикации антигена в биоматериале, имеет большое научное и практическое значение.

Материалы и методы исследований. Исследования проводили на десяти баранах неблагополучных по инфекционному эпидидимиту хозяйств.

Бактериологическое исследование проводили по общепринятой методике. РНГА и РНАт ставили согласно утвержденной Россельхознадзором «Инструкции по применению набора препаратов для диагностики инфекционного эпидидимита баранов в РНГА и РНАт».

Специфичность антительного диагностикума изучали путем исследования экстракта гомогенизированных лимфоузлов и органов от 10 здоровых баранов и 4 овцематок, привитых бруцеллезной вакциной из штамма Rev-1, для чего исследовали 300 проб материала.

Результаты исследований и их обсуждение. Значительный объем научно-исследовательской работы выполнен нами по усовершенствованию диагностики инфекционного эпидидимита баранов.

В результате проведенных научных исследований был разработан способ получения антительного овисного диагностикума для РНГА путем сенсибилизации эритроцитов барана, стабилизированных по Вайнбаху в нашей модификации, гипериммунной овисной сывороткой с использованием в качестве конъюгата ализаринового синего индикатора.

Определены оптимальные параметры сенсибилизации эритроцитов гипериммунной сывороткой, обеспечивающие получение высокоактивного и специфичного антительного диагностикума для РНГА.

Изучена специфичность и активность антительного диагностикума для РНГА, изготовленного по разработанному новому способу.

Установлено, что антительный овисный диагностикум для РНГА, изготовленный по разработанному нами способу, обладает специфичностью и достаточно высокой чувствительностью. Применение его позволило выявить овисный антиген при его концентрации в исследуемом материале 0,045 мг в 1 мл.

С целью изучения диагностической эффективности антительного диагностикума для РНГА исследованию подвергли биоматериал от 10 баранов из хозяйств, неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов (53 объекта). При этом овисный антиген удалось выявить с помощью РНГА с антительным эритроцитарным диагнос-тикумом в 60,3%, РНАт - в 45,2% и бактериологического метода - в 24,5% случаев.

Специфичность диагностикума изучали путем исследования экстракта гомогенизированных лимфоузлов и органов от 10 здоровых баранов и 4 овцематок, привитых бруцеллезной вакциной из штамма Rev-1 (300 проб материала). Во всех случаях получены отрицательные результаты, что подтверждает специфичность антительного эритроцитарного диагностикума для РНГА (табл. 1).

Таблица 1 Результаты испытания антительногодиагностикума для РНГА, в сравнении с РНАт и бактериологическим методом для выявления антигена B.ovis

№ п/п

Группы животных

Количество и исследованных

Выделено культур

Положительная РНАт

Положительная РНГА с антительным диагностикумом

животных

объектов

всего

%

всего

%

всего

%

1.

Бараны-производители из хозяйств, неблагополучных по инфекционному эпидидимиту

10

53

13

24,5

24

45,2

32

60,3

2.

Бараны-производители из хозяйств благополучных по ИЭБ

10

240

-

-

-

-

-

-

3.

Овцематки привитые вакциной из штамма Brucella melitensis Rev-1 из хозяйств благополучных по инфекционному эпидидимиту

4

60

-

-

-

-

-

-

Для изучения пригодности использования сконструированного нами антительного эритроцитарного овисного диагностикума для индикации антигена Brucellaovis в РНГА, в сравнении с РНАт, были исследованы также биофабричный овисный антиген для РДСК, единый бруцеллезный антиген для РА и РСК, R-антигены для РСК из штаммов 16/4 и 1096 и смывы из объектов внешней среды (почва, корма, навоз), инфицированные Brucella ovis (табл. 2).

Таблица 2 Результаты испытания антительного диагностикума для индикации антигена Brucella ovis в сравнении с РНАт

№ п/п

Материал, подвергнутый исследованию

Коли­чество проб

Положительный результат

РНАт

%

РНГА с антительным диагностикумом

%

1.

Антиген B.ovis биофабричного приготовления (R-форма)

1

1

100

1

100

2.

Единый бруцеллезный антиген для РА, РСК (РДСК) (S-форма)

2

отр.

-

отр.

-

3.

Антигены, изготовленные из штаммов бруцелл B.abortus 16/4 и 1096 (R-форма)

2

2

100

2

100

4.

Смывы объектов внешней среды, искусственно инфицированные B.ovis

10

8

80

10

100

Приведенные в таблице 2 данные свидетельствуют о пригодности антительного диагностикума для РНГА для индикации антигена Brucellaovis в взвесях микроорганизмов и объектах внешней среды.

Таким образом, проведенные исследования показали специфичность и более высокую чувствительность РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом, по сравнению с РНАт и бактериологическим методом, и пригодность ее для использования в качестве экспресс-метода для индикации антигена B. ovis в биоматериале и объектах внешней среды. Также было установлено, что РНГА с анти-тельным диагностикумом намного оперативнее РНАти бактериологического метода.

Заключение. Исследования по усовершенствованию диагностики инфекционного эпидидимита баранов, вызываемого Brucella ovis, завершены разработкой антительного эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Установлена высокая специфичность и активность данного препарата. В результате исследований, проведенных по испытанию диагностического значения антительного диагностикума, установлена более высокая чувствительность РНГА с применением нового антительного диагностикума, по сравнению с реакцией нейтрализации антител (РНАт) и бактериологическим методом, и пригодность использования диагностикума для индикации антигена Brucella ovis в биоматериале, что отвечает требованиям предъявляемым к экспресс-методам выявления антигенов в патологическом материале.

На способ изготовления антительного диагностикума получен патент на изобретение № 2509306, от 10 марта 2014 года.

Список литературы:

  1. Абуталитов А.А. Сравнительная диагностическая эффективность РИФ и РНАт и бактериологического метода при бруцеллезе/ А.А. Абуталитов, М. Жан-бырбаев// Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана. 1982. 5. С. 7577.
  2. Аракелян П.К. Экологические аспекты инфекционной патологии у овец (бруцеллез и инфекционный эпидидимит баранов)/ П.К. Аракелян// Естественные науки и экология: Ежегодник Межвузовский сборник научных трудов. Омск. 2005. С. 175-176.
  3. Далгат М.М. О распространении инфекционного эпидидимита баранов в Дагестане. Сборн. научн. работ. ЗНИВИ. Махачкала. 1978. С 45-49.
  4. Дегтяренко Л.В. Разработка и совершенствование средств, методов диагностики бруцеллеза животных и инфекционного эпидидимита баранов: авто-реф. дис. ... д-ра вет. наук. Новосибирск. 2005. 39 с.
  5. Ромахов В.А. Разработка и совершенствование средств, методов диагностики и системы мероприятий по борьбе с инфекционным эпидидимитом баранов и бруцеллезом животных: автореф. дис. . д-ра вет. наук. М. 1992. 50 с.
  6. Садыков С.Ж. Диагностическая эффективность РНГА и РНАт при бруцеллезе/ Ветеринария. 1974. 6. С. 107-108.
  7. Триленко П.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. СПб.: Колос. 1976.280 с.
  8. Хаиров С.Г.Испытание эритроцитарного антигена в РНАт и РТНГА/ С.Г. Хаи-ров, О.Ю. Юсупов// Проблемы ветеринарной медицины в условиях реформирования сельскохозяйственного производства: материалы юбилейн. науч.-практ. конф. ГНУ Прикасп. ЗНИВИ. г. Махачкала. 2003. С. 42-44.

Резюме. Одним из перспективных методов выявления возбудителя инфекционных болезней или антигена является реакция непрямой гемагглютинации с антительным эритроцитарным диагностикумом. Для диагностики инфекционного эпидидимита баранов такой препарат до сих пор не разработан. В настоящей статье представлены результаты приготовления антительного эритроцитарного диагностикума в реакции непрямой гемагглютинации для обнаружения возбудителя инфекционного эпидидимита в различном биологическом материале. В результате проведенных научных исследований разработан способ получения оригинального антительного B.ovis диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации, путем сенсибилизации эритроцитов барана гипериммунной овисной сывороткой с использованием в качестве конъюгата ализаринового синего индикатора эпидидимитного возбудителя или антигена в биоматериале. Проведенные исследования показали специфичность и более высокую чувствительность реакции непрямой гемагглютинации с антительным эритроцитарны диагностикумом, по сравнению с реакцией нейтрализации антител и бактериологическим методом, и пригодность ее для индикации антигена Brucella ovis в биоматериале и объектах внешней среды. Также было установлено, что реакции непрямой гемагглютинации с антительным диагностикумом намного оперативнее реакции нейтрализации антители бактериологического метода. Исследования по усовершенствованию диагностики инфекционного эпидидимита баранов, вызываемого Brucella ovis, завершены разработкой антительного эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации. Установлена высокая специфичность и активность данного препарата. В результате исследований, проведенных по испытанию диагностического значения анти-тельного диагностикума, установлена более высокая чувствительность реакции непрямой гемагглютинациис применением нового антительного диагностику-ма, по сравнению с реакцией нейтрализации антител и бактериологическим методом, и пригодность использования диагностикума для индикации антигена Brucellaovis в биоматериале, что отвечает требованиям предъявляемым к экс-пресс-методам выявления антигенов в патологическом материале.

Ключевые слова: Республика Дагестан, мелкий рогатый скот, бараны, инфекционный эпидидимит баранов, Brucellaovis, реакция непрямой гемагглютинации, биоматериал, антиген, сенсибилизация эритроцитов.

Сведения об авторах:

Яникова Эльмира Арсланорвна, старший научный сотрудник Прикаспийского зонального научно-исследовательского ветеринарного института - филиала ФГБНУ «ФАНЦ РД»; 367000, Республика Дагестан, г. Махачкала, ул. Дахадаева, 88;тел.: 8-8722-682702;e-mail: elya_09@mail.ru.

Микаилов Микаил Муслимович, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник Прикаспийского зонального научно-исследовательского ветеринарного института - филиала ФГБНУ «ФАНЦ РД»; 367000, Республика Дагестан, г. Махачкала, ул. Дахадаева, 88; тел.: 8-8722-682702; e-mail: vetmedservis@mail.ru.

Халиков Ахмед Алиасхабович, научный сотрудник Прикаспийского зонального научно-исследовательского ветеринарного института - филиала ФГБНУ «ФАНЦ РД»; 367000, Республика Дагестан, г. Махачкала, ул. Дахадаева, 88; тел.: 8-8722-682702; e-mail: vetmedservis@mail.ru.

Гулиева Атия Темирболатовна, младший научный сотрудник Прикаспийского зонального научно-исследовательского ветеринарного института - филиала ФГБНУ «ФАНЦ РД»; 367000, Республика Дагестан, г. Махачкала, ул. Дахадаева, 88; тел.: 8-8722-682702; e-mail: vetmedservis@mail.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Черных Олег Юрьевич, доктор ветеринарных наук, профессор, директор ГБУ КК «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория»; 352391, г. Кропоткин, ул. Красноармейская, д. 303; тел.: 8-86138-62314; e-mail: gukkvl50@kubanvet.ru.

 

   
2011 © Ветеринария Кубани Разработка сайта - Интернет-Имидж