Адаптация метода сентенелей для биологического контроля африканской чумы свиней в свинокомплексах

Джаилиди Г.А. Государственное управление ветеринарии Краснодарского края, г. Краснодар
Черных О.Ю. ГБУ КК"Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория", г. Кропоткин
Стрижакова О.М., Куриннов В.В. ГНУ ВНИИВВиМ, г. Покров

Введение. При острой и подострой формах течения африканской чумы свиней (далее, АЧС) размножение вируса в организме зараженной свиньи сопровождается экскрецией вируса во внешнюю среду носовыми и лакримальными секретами, слюной, калом, мочой уже в инкубационном периоде, а при развитии инфекции — и кровотечениями. В связи с тем, что при вспышке АЧС вирус хорошо сохраняется в белковых средах вне организма хозяина (то есть в указанных выше выделениях), всегда существует риск "остаточного" вируса в ранее контаминированных объектах, даже несмотря на хорошо выполненные мойку и дезинфекцию. Поэтому, имея в виду исключительно высокую инфекционность вируса АЧС, сроки ввода животных (комплектование хозяйств поголовьем), определённые инструкцией [4], обозначены 12-ю месяцами - в мелкие фермы и в I-ю угрожаемую зону, и 6-ю месяцами - в промышленный комплекс после отмены карантина, но с учётом постановки биологического контроля (отрицательных результатов).

В настоящее время, подтверждение отсутствия вируса АЧС (то есть контаминации) на поверхностях пола, стен, дверей кормушек, поилок, предметов или оборудования в помещениях свиноферм и свинокомплексов основано на выполнении бактериологического метода оценки качества дезинфекции [6], однако, реально, по результатам изоляции стафилококка можно оценить только качество дезинфекции, и только косвенно, отрицательные результаты могут свидетельствовать о полном уничтожении вируса. Однако, доказательств эффекта вирулицидного действия дезинфектанта (-ов) при этом нет, так как использование "тест-вируса" Правилами не предусмотрено. Поэтому, введением метода биологического контроля, указанного в разделе 6.5.1. Инструкции, можно получить больше гарантий для принятия заключения об эффективности ветеринарно-санитарных мероприятий (то есть отсутствие вируса АЧС и безопасность фермы). Второй интерес введения биологического контроля - это сокращение периода для ввода животных в промышленные комплексы, например, через 3 месяца вместо 6-ти, как предусмотрено инструкцией [4].

Принципы метода сентенелей описаны в статье 13 Руководства МЭБ "Репопуляция свиноферм после вспышек болезни" [7]. Основная идея метода заключается в том, что при содержании поро-сят-сентенелей в ранее неблагополучных помещениях в течение 45 дней, в случае остаточных количеств вирулентного вируса АЧС произойдёт пероральное инфицирование в результате контакта с конта-минированными вирусом поверхностями, и заражение будет обнаружено либо по клиническим признакам (изменение поведения, отказ от корма и угнетение, повышение температуры тела выше 40°С), либо серологически, по обнаружению специфических антител, либо проверкой сентенелей лабораторными методами в конце периода наблюдения.

Результаты исследований. Юридическое обоснование ? для выполнения биологического контроля. В "Инструкции о мероприятиях по предупреждению и ликвидации африканской чумы свиней" [4], в разделе 6.5.1 указано: "Комплектование поголовьем животных крупных свиноводческих комплексов может быть разрешено через 6 месяцев после снятия карантина и постановки биологического контроля с разрешения Главного управления ветеринарии МСХ СССР. Размещение в таких помещениях животных других видов (включая птиц) разрешается после снятия карантина".

После письменного подтверждения разрешения о проведении биологической пробы, разрабатывают "План проведения биологической пробы", с указанием этапов мероприятий (включая подготовку акта), сроков выполнения, ответственных исполнителей (в том числе наименование лабораторий, в которых будут выполняться тестирования). Все действия и плановые мероприятия должны быть, по возможности, согласованными с действующей инструкцией, но без послаблений пунктов последней. В связи с тем, что всё-таки существует вероятность риска "индуцированной" вспышки АЧС, биологический контроль проводят только с разрешения руководителей Департамента ветеринарии и Россельхознадзора МСХ РФ. С целью предупреждения распространения вируса сразу же после начала выполнения биологического контроля (введения поросят-сентенелей) статус свинофермы (свинокомплекса) изменяют на "подозреваемый" и выполняют ограничительные мероприятия по Разделу 6, пп. 6.2.2, 6.2.3, 6.3, 6.4 Инструкции.

Приобретение и характеристика индивидуального клинического статуса сентенелей, расчёт необходимого количества.

Партии поросят (группа доращивания или первого периода откорма) приобретают только в ферме (свинокомплексе) от одного владельца с подтверждённым статусом здоровья в отношении острых вирусных (АЧС, КЧС, болезнь Ауески) и бактериальных (рожа, пастереллёз, отёчная болезнь) болезней, энтеротоксемии, отравлений и любых других заболеваний.

Перед отправкой поросята должны быть маркированы, вакцинированы против КЧС и содержаться в изоляторе (у владельца) не менее 15 дней. Там же, проводят термометрию поросят, не менее 10% от количества группы, а также от всех животных отбирают по 2 пробы крови: одна - с содержанием ЭДТА, другая - без антикоагулянта (для получения сыворотки) - так называемые "нулевые" пробы. Пробы маркируют соответственно номера животного и вида исследований, например, N°1-с (сыворотка) и N°1-э (ЭДТА), направляют в лабораторию и хранят замороженными при минус 20°С.

Расчёт минимального количества поросят выполняют произведением количества всех станков в помещениях свинофермы (свинокомплекса), где содержались свиньи до подтверждения вспышки АЧС на необходимое количество поросят-сентенелей для каждого станка (для каждого станка количество вводимых поросят из расчёта 10% от оборота (например, если в станке по технологии содержится 30 голов, то необходимое количество сентенелей на станок будет 6 голов).

Для выполнения биологического контроля делают полный запас комбикорма для кормления поросят в течение всего периода биологического контроля.

Выполнение биологического контроля. Поросят-сенте-нелей маркируют и размещают во все станки каждого помещения, свинарника, цеха (независимо от места локализации установленной вспышки) и содержат с соблюдением всех технологических норм не менее 45 дней. Это время составляет примерно три 15-ти дневных инкубационных периодов [8].

Персонал и сотрудники фермы (в том числе и ветеринарный врач), выполняющие кормление и уход за животными, а также обеспечивающие работу оборудования, на период выполнения биологического контроля не должны иметь никаких прямых и косвенных контактов с живыми домашними свиньями (и дикими кабанами при охоте) или сырой продукцией свиноводства.

Контроль здоровья поросят-сентенелей выполняет один ветеринарный врач, который ведёт наблюдение клинического состояния с обязательным ежедневным измерением температуры тела не менее 10% животных каждого станка (случайная выборка) с внесением данных в специальный журнал, с указанием производственной площадки, номеров помещений, станков, поросят и показателей для каждого животного.

На 45-й день после введения поросят в станки, от каждого животного (выборка-100%) отбирают пробы крови с антикоагулянтом и без антикоагулянта, маркируют (по п.2., как для получения "нулевых" проб) и направляют для проверки ПЦР (обнаружение вируса АЧС) и непрямой ИФА (обнаружение специфических антител к вирусу) - "проверяемые" пробы.

Оценка результатов биологического контроля и последующие действия. Об отсутствии вируса АЧС в станке можно утверждать, если после периода содержания (то есть не менее 45 дней) у свиней не были обнаружены признаки заболевания (и/или гибели) и получены отрицательные результаты лабораторных методов "нулевых" и "проверяемых" проб при 100% выборке животных (отсутствие вируса в крови, подтверждённое ПЦР и отсутствие специфических антител к вирусу АЧС, подтверждённое непрямым ИФА).

Отсутствие клинических признаков и получение отрицательных результатов лабораторных исследований у всех свиней-сентене-лей гарантирует отсутствие у них АЧС и, следовательно, отсутствие вируса во всех станках и оборудования свинофермы (свинокомплекса).

В случае обнаружения признаков (угнетение, отказ от корма, повышение температуры тела выше 40°С или любые изменения поведения) хотя бы у одного животного, независимо от времени введения в станок, немедленно отбирают пробу крови с ЭДТА и направляют для лабораторных исследований на АЧС, КЧС, грипп и бактериальные инфекции (рожа, пастереллёз, гемофиллёз).

В случае получения сообщения о положительном результате ПЦР на АЧС, проводят действия в соответствии с разделами 4, 5, 6 Инструкции [4].

При обнаружении трупа(-ов) после спонтанной гибели (то есть без клинических признаков) - отбирают пробы крови, селезёнки лимфатических узлов и также направляют для экстренных лабораторных исследований. До получения результатов лабораторных исследований всех поросят термометрируют. При подтверждении АЧС - выполняют действия в соответствии с разделами 4, 5, 6 Инструкции [4]. При получении отрицательных результатов лабораторных исследований на АЧС биологический контроль продолжают.

Действия после получения заключения биологического контроля. Если биологическим контролем подтверждено отсутствие вируса АЧС в сроки, указанные в разделе 6 Инструкции, то есть через 6 мес. или более, после отмены карантина, свиней убивают на мясо и реализуют без ограничений.

Если биологический контроль выполнен с отрицательным результатом раньше указанных 6-ти месяцев - поросят-сентенелей группируют и откармливают до товарной кондиции, а в помещения репродуктора вводят свиноматок, хряков и выполняют технологические операции воспроизводства. Так как реализация продукции после ввода свиноматок и их осеменения до окончания откорма будет не ранее, чем через 6 месяцев (работа свинокомплекса только на ввоз), этот период также является контрольным.

В случае принятия решения об убое поросят-сентенелей на мясо, прирезку выполняют в специально обозначенном мясокомбинате или убойном пункте, имеющем холодильник на территории субъекта. Пробы селезёнок от всех поросят-сентенелей проверяют параллельно ПЦР и РПИФ и только после получения отрицательных результатов мясо и продукты убоя реализуют без ограничений. Процедуры введения животных для восстановления поголовья и выращивания выполняют без ограничений.

Документирование биологического контроля. Для документирования результатов биологического контроля составляют "Акт биологического контроля", в котором указывают основание для проведения биологического контроля (номер и дату приказа уполномоченного органа), перечень членов Комиссии и основных исполнителей, цель биологического контроля, время и место проведения и сформулированное заключение комиссии, подписи.

К акту прилагают протоколы наблюдения (температурные листы), акты отбора проб, вскрытия (если таковые имели место), результатов лабораторных исследований.

Заключение. АЧС вирус-интактные, серонегативные по-росята-сентенели в комбинации с лабораторными методами могут использоваться как биологические индикаторы, подтверждающие отсутствие вируса на ферме. При этом, уверенность в определении времени для благополучного введения свиней и выполнения дальнейших технологических процедур выращивания имеет лучшее основание, чем результаты бактериологического контроля (бактериологический контроль как индикатор качества дезинфекции также имеет высокий вес и его выполнение неукоснительно). Данные о высокой вирулентности вируса, циркулирующего в разные годы и в разных субъектах РФ [1, 2, 3] предполагают "хорошую работу метода сентенелей", так как высокая инфекционность вируса, даже после введения 1lg50 приводит к инфекции с коротким инкубационным периодом и гибели [2, 3], которая может быть легко установлена. 45 дней содержания, даже с учётом максимального инкубационного периода, указанного в Наземном Кодексе МЭБ [8] составляет 15 периодов. На самом деле, инкубационный период после инфицирования "российскими" изоля-тами 3 дня (2-4), то есть значительно короче [3], поэтому шансы для инфицирования, если имеется остаточный вирус и в минимальной концентрации, очень велики. В связи с риском "получить" вторичную вспышку АЧС при проведении биологической пробы, свинокомплексу присваивают статус "подозреваемого" и это может сдерживать введение биологического контроля в практику. С другой стороны, с учётом тех же самых аргументов, отсутствие инфекции у поросят-сентене-лей гарантирует отсутствие вируса и, таким образом, биологический контроль даёт экономическую выгоду владельцу за счёт сокращения сроков введения животных (время) и начала функционирования свинокомплекса (прибыль).

Список литературы.

1. Биологические свойства вируса африканской чумы свиней, выделенного в Российской Федерации. Балышев В.М., Куриннов В.В., Цыбанов С.Ж., Калантаенко Ю.Ф., Колбасов Д.В., Пронин В.В., Корнева Г.В. // Ветеринария.- 2010.-N° 7.- С. 25-27.
2. Вирулентность изолятов вируса АЧС Белянин С.А., Васильев А.П., Колбасов Д.В., Цыбанов С.Ж., Балышев В.М., Куриннов В.В., Черных О.Ю. //Ветеринария Кубани - Краснодар. - 2011г. - N°5- С. 9-10.
3. Белянин С.А. Динамика распространения и мониторинг эпизоотического процесса африканской чумы свиней //автореф. канд. дис., Покров, 2013, 27 с.
4. "Инструкции о мероприятиях по предупреждению и ликвидации африканской чумы свиней" (N° 115-6а от 21.11.1980 г.).
5. Коваленко Я.Р. Африканская чума свиней// Москва, 1965., 128 с.
6. "Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора" (Приложение 3.Методические указания по контролю качества ветеринарной дезинфекции объектов животноводства (Утв. Минсельхозом РФ 15.07.2002 n 13-5-2/0525).
7. Official Journal of the European Communities L 192/27 COUNCIL DIRECTIVE 2002/60/EC of 27 June 2002 laying down specific provisions for the control of African swine fever and amending Directive 92/ 119/EEC as regards Teschen disease and African swine fever.
8. OIE, Terrestrial Animal Health Code,2014. -http://www.oie.int/.

Резюме. При острой и подострой формах течения африканской чумы свиней размножение вируса в организме зараженной свиньи сопровождается экскрецией вируса во внешнюю среду.

В настоящее время подтверждение отсутствия вируса АЧС на поверхностях пола, стен, дверей кормушек, поилок, предметов или оборудования в помещениях свиноферм и свинокомплексов основано на выполнении бактериологического метода оценки качества дезинфекции, однако, реально, по результатам изоляции стафилококка, можно оценить только качество дезинфекции, и только косвенно, отрицательные результаты могут свидетельствовать о полном уничтожении вируса.

Перед отправкой партии поросят проводят термометрию, не менее 10% от количества группы, а также от всех животных отбирают по 2 пробы крови: одна - с содержанием ЭДТА, другая - без антикоагулянта (для получения сыворотки) - так называемые "нулевые" пробы. Пробы маркируют соответственно номера животного и вида исследований, например, N° 1-с (сыворотка) и N° 1-э (ЭДТА), направляют в лабораторию и хранят замороженными при минус 20°С.

При подтверждении АЧС - выполняют действия в соответствии с разделами 4, 5, 6 инструкции. При получении отрицательных результатов лабораторных исследований на АЧС биологический контроль продолжают.

Если биологическим контролем подтверждено отсутствие вируса АЧС в сроки, указанные в разделе 6 инструкции, то есть через 6 мес. или более, после отмены карантина, свиней убивают на мясо и реализуют без ограничений.

Если биологический контроль выполнен с отрицательным результатом раньше указанных 6-ти мес., - поросят-сентенелей группируют и откармливают до товарной кондиции, а в помещения репродуктора вводят свиноматок, хряков и выполняют технологические операции воспроизводства. Так как реализация продукции после ввода свиноматок и их осеменения до окончания откорма будет не ранее, чем через 6 месяцев (работа свинокомплекса только на ввоз) этот период также является контрольным.

Ключевые слова: африканская чума свиней, поросята, вирус, вирулентность, инкубационный период, вспышка, инактивация вируса, лабораторные исследования, антитела, биологический контроль, метод сентенелей.

Сведения об авторах:

Джаилиди Георгий Анастасович, кандидат биологических наук, руководитель государственного управления ветеринарии Краснодарского края; г. Краснодар, ул. Рашпилевская, 36; 8(861)262-19-23; e-mail: dga@uv.krasnodar.ru.

Куриннов Виктор Васильевич, доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий лабораторией диагностики ГНУ ВНИИВВиМ; 601120, Владимирская область, Петушинский район, г. Покров; (49243) 6-21-25; e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Стрижакова Ольга Михайловна, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник лаборатории диагностики ГНУ ВНИИВВиМ; 601120, Владимирская область, Петушинский район, г. Покров; (49243) 6-21-25; e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Черных Олег Юрьевич, доктор ветеринарных наук, директор ГБУ КК "Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория"; 352380, Краснодарский край, г. Кропоткин, ул.Красноармейская, д. 303; 8 (86138) 6-23-14; e-mail: gukkvl50@kubanvet.ru.

UDC 619:616.98:518.842.1

ADAPTATION OF SENTINEL METHOD FOR BIOLOGICAL CONTROL OF AFRICAN SWINE FEVER IN PIG FARMS

Dzhailidi G.A., Chernykh O.Yu., Kurinnov V.V., Strizhakova O.M.

Summary. Replication of the virus in the body of infected pigs at acute and subacute form of African swine fever is accompanied by excretion of the virus with nasal and lacrimal secrets, saliva, feces, urine already in the incubation period, and bleeding during the development of infection. The basic idea of biological control is the content of sentinel pigs in previously disadvantaged areas within 45 days, in the case of residual amounts of virulent ASF virus oral infection will happen through contact with contaminated surfaces, and it will be detected either by clinical signs (changes in behavior, loss of appetite and depression, increased body temperature above 40°C), or serologically by detection of specific antibodies, or laboratory methods at the end of the observation period. Piglets of rearing or first period of fattening group are to be bought only in the farm from one owner with confirmed health status in relation to acute viral (African swine fever, classical swine fever, Aujeszky’s disease), bacterial (erysipelas, pasteurellosis, hydropic disease) diseases, enterotoxaemia and poisoning. Sentinel piglets are labeled and placed regardless of the localization of the fixed outbreak and kept in compliance with all technological norms for at least 45 days (three 15-day incubation period). On the absence of ASF virus can be argued, if signs of disease or death were not detected after at least 45 days in pigs and results of laboratory methods with 100% sample of animals (absence of virus in the blood, confirmed with PCR and the absence of specific antibodies to ASF, vindicated indirect ELISA) were found to be negative. If biological control is carried out with negative results before mentioned 6 months, sentinel piglets are grouped and fed to marketable conditions, while sows, boars are moved to reproducer Keywords: African swine fever, pigs, virus virulence, incubation period, outbreak, virus inactivation, laboratory tests, antibodies, biological control, sentinel pigs method.

References:

1. Balyshev V.M., Kurinnov V.V., Tsybanov S.Zh., Kalantaenko Yu.F., Kolbasov D.V., Pronin V.V., Korneva G.V. Biologicheskie svoystva virusa afrikanskoy chumy sviney, vydelennogo v Rossiyskoy Federatsii [Biological properties of African swine fever virus isolated in the Russian Federation]. - Veterinariya. - Moscow, 2010 (7).- pp. 25-27.
2. Belyanin S.A., Vasilyev A.P., Kolbasov D.V., Tsybanov S.Zh., Balyshev V.M., Kurinnov V.V., Chernykh O.Yu. Virulentnost izolyatov virusa afrikanskoy chumy sviney [ASF virus isolates virulence]. - Veterinariya Kubani. - Krasnodar, 2011 (5). - pp. 9-10.
3. Belyanin S.A. Dinamika rasprostraneniya i monitoring epizooticheskogo protsessa afrikanskoy chumy sviney v Rossiyskoy Federatsii [Dynamics of distribution and monitoring of the epizootic process of African swine fever in the Russian Federation]. - Pokrov, 2013. - p.27.
4. Instruktsiya o meropriyatiyakh po preduprezhdeniyu i likvidatsii afrikanskoy chumy sviney [Instruction on measures to prevent and eliminate the African swine fever]. - 1980.
5. Kovalenko Ya.R. Afrikanskaya chuma sviney [African swine fever]. -Moscow, 1965. - 128 p.
6. Pravila provedeniya dezinfektsii i dezinvazii obyektov gosudarstvennogo veterinarnogo nadzora [Rules of disinfection and disinfestation of objects of state veterinary control]. - 2002.
7. -8. Vide supra.

Author affiliation:

Dzhailidi Georgy A., Ph. D. in Biology, Head of the State Veterinary Department of Krasnodar region; 36, Rashpilevskaya st., Krasnodar, 350000; phone: 8 (861) 262-19-23; e-mail: dga@uv.krasnodar.ru.

Kurinnov Viktor V., D.Sc. in Veterinary Medicine, professor, Diagnostics laboratory manager of the National Research Institute for Veterinary Virology and Microbiology; Pokrov, Petushki area, Vladimir region, 601120; (49243) 6-21-25; e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Strizhakova Olga M., Ph.D. in Veterinary Medicine, leading scientific researcher of the Diagnostics laboratory of the National Research Institute for Veterinary Virology and Microbiology; Pokrov, Petushki area, Vladimir region, 601120; (49243) 6-21-25; e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Responsible for correspondence with the editorial board: Chernykh Oleg Yu., D.Sc. in Veterinary Medicine, director of the Kropotkin territorial veterinary laboratory; 303, Krasnoarmeyskaya st., Kropotkin, 352380; phone: 8(86138) 6-23-14; e-mail: gukkvl50@kubanvet.ru.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей