Коррекция иммунного статуса и повышение эффективности диагностики лейкоза у крупного рогатого скота

Дмитриев А.Ф. ФГОУ ВПО "Ставропольский государственный аграрный университет"
Новосельцев Г.Г. ГБУ КК "Управление ветеринарии Гулькевичского района"
Черных О.Ю. ГБУ КК "Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория"

Прижизненная диагностика лейкоза крупного рогатого скота осуществляется с использованием иммунологических реакций (РИД, ИФА), гематологических и генетических исследований с помощью ПЦР [1, 2, 7, 8]. По результатам исследований при исользовании упомянутых реакций не представляется возможным выявить одномоментно всех инфицированных или гематологически больных животных. Это связано с особенностями развития и проявления инфекционного процесса и иммунологической реактивности животных. Эти процессы тесно взаимосвязаны, взаимообусловлены, противоположны, характеризуются взаимоисключением и определяются комплексом генотипических и паратипических факторов.

Серологические исследования молодняка проводятся с 6-ти месячного возраста и предусматриваются лишь в комплексах по выращиванию нетелей и племенных животных, а так же в хозяйствах, занимающихся реализацией поголовья. В неблагополучных хозяйствах, при инфицированности стада 30% и более, серологические исследования действующими правилами не предусматриваются.

Важной особенностью инфекционного процесса при лейкозе крупного рогатого скота является и то, что в период беременности имеет место внутриутробное инфицирование. Считается, что через плаценту в пренатальный период инфицируется 3-20% плодов, причем, частота зависит от уровня инфицированности коров-матерей, а более высокий процент пренатальной передачи отмечали у телят, родившихся от коров с клинико-гематологическим и опухолевым проявлением лейкоза [4, 9].

У новорожденных животных при внутриутробном инфицировании или заражении в период новорожденности наблюдается иммунологическая толерантность [3]. Состояние ареактивности трудно диагностируется, хотя такие животные надолго остаются в стаде и являются источником возбудителя в течение длительного промежутка времени.

В связи с тем, что вирус лейкоза обладает иммунодепрессив-ными свойствами и не исключается возможность внутриутробного инфицирования потомства весьма важно осуществлять раннюю и достоверную диагностику тёлок.

Целью нашей работы явилась оценка эффективности применения ронколейкина для коррекции иммунного статуса и повышения достоверности серологической диагностики лейкоза у молодняка крупного рогатого скота.

Методологической основой планируемых исследований явилось то, что вирус лейкоза крупного рогатого скота не только индуцирует иммунодефициты, а потомство инфицированных коров характеризуется признаками пониженной жизнеспособности, но и в крови инфицированных вирусом лейкоза коров в 34 % случаев обнаруживается вирус иммунодефицита [7].

Гипотеза исследований - если применение ронколейкина обеспечит коррекцию иммунной системы, то результаты иммунологической диагностики (серологического тестирования) будут более достоверными.

Объектом исследований служили телки 6-ти месячного возраста до и после коррекции иммунной системы предлагаемым препаратом. Исследования проводились в неблагополучных хозяйствах Гулькевич-ского района Краснодарского края.

Для исследования были отобраны животные (потомство) от инфицированных, интактных и гематологически больных коров, у которых диагноз был поставлен при контрольном убое. Для исследований были подобраны четыре группы животных по 15 голов 6 - ти месячного возраста:

• первая группа - серонегативные телки, потомство коров виру-соносителей;
• вторая группа - нетестированное потомство инфицированных коров;
• третья группа - нетестированное потомство, не подвергавшееся иммунной коррекции;
• четвертая группа - потомство гематологически больных коров. Все группы животных, за исключение третьей, подвергались иммунной коррекции.

Наблюдения за животными и серологическое тестирование проводилось ежеквартально (в 6, 9, 12-ти месячном возрасте).

Ронколейкин применялся за 20 дней до серологических исследований подкожно в дозе 1000МЕ на кг двукратно с интервалом 24 часа. Исследования проводились в Кропоткинской краевой ветеринарной лаборатории. Серологическое тестирование осуществлялось с использованием иммуноферментного анализа и реакции иммуно-диффузии.

По результатам проведенных исследований (табл. 1) самый высокий процент животных (50), реагирующих позитивно в реакции иммунодиффузии, выявлен в четвёртой группе, которая представлена потомством гематологически больных коров. Это объясняется тем, что вероятность трансплацентарной и конгенитальной передачи вируса у гематологически больных коров значительно выше, чем у инфицированных.

Таблица 1. Результаты серологического тестирования молодняка крупного рогатого скота на лейкоз

Группы животных	Исследовано, кол-во голов	Выявлено реагирующих животных (%) в возрасте			Примечание
		6 месяцев	9 месяцев	12 месяцев
1 и 2*	30	6,6	16,6	16,6	Потомство инфицированных коров
3	15	25,0	25,0	33,3	Потомство интактных коров
4*	12	50,0	50,0	-	Потомство гембольных коров

Примечание: * животные 1, 2 и 4 группы за 20 дней до исследований подвергались целенаправленной коррекции ронколейкином.

У животных первой и второй групп уровень инфицированности в 6-ти месячном возрасте составил 6,6 %, а в последующие месяцы 16,6 %.

Среди потомства интактных коров (третья группа) в возрасте 6 и 9 месяцев процент серопозитивных животных составил 25,0, а в 12-ти месячном возрасте 33,3%.

При анализе результатов применения рон-колейкина согласно методики было установлено, что среди животных 1, 2 и 3 групп самый высокий процент серопозитивных зарегистрирован в третьей группе. Так, в первой группе уровень инфици-рованности составил 6,6 %, во второй - 26,6 %, а в третьей - 33,3 %. Поскольку животные третьей группы иммунной коррекции (в отличие от первой и второй групп) не подвергались, то говорить об эффективности диагностики после применения ронколейкина не представляется возможным. Сравнивать результаты серологического тестирования животных 3 и 4 групп нельзя (методически не верно), так как животные четвёртой группы представлены потомством гематологически больных коров.

Таким образом, наша гипотеза о том, что ронколейкин после его применения будет в результате иммунной коррекции повышать эффективность серологической диагностики лейкоза у молодняка крупного рогатого скота не подтвердилась.

Несмотря на это, есть основание полагать, что применение ронколейкина могло стимулировать иммунную систему организма и профилактировало возможность распространения (инфицирования) в условиях совместного содержания животных рождённых инфицированными, интактными и гематологически больными коровами. Доказательством этого положения является то, что за 6 месяцев наблюдения за животными (по результатам серологического контроля), которые подвергались иммунной коррекции, уровень инфицированности в 1 и 2 -ой группах составил 16,6%, а в четвёртой, - не подвергавшейся иммунной коррекции, - 33,3 %.

По результатам диагностических исследований скота различными методами в 2010 году (табл. 3) было установлено, что больший процент инфицированных животных 46,9 выявляется при помощи (ПЦР) полимеразной цепной реакции.

Таблица 2. Результаты исследований крупного рогатого скота на лейкоз с использованием реакций иммунодиффузии (РИД) и иммуноферментного анализа (ИФА) в возрасте 6, 9 и 12 месяцев

Группы животных	Количество голов	Методы исследований и результаты			Процент реагирующих
		РИД	ИФА	ИФА
1	15	0/15	1/14	1/14	6,6
2	15	2/13	4/11	4/11	26,6
3	15	3/12	3/12	5/10	33,3
4	12	6/6	6/6	-	50,0

Примечание: в числителе приводится количество инфицированных особей, а в знаменателе - интактных.

Таблица 3. Анализ результатов диагностических исследований крупного рогатого скота различными методами в 2010 году

Метод исследования	Количество голов	Результаты исследований	% реагирующих
РИД	427	56 / 371	13,1
ИФА	419	55 /344	13,1
ПЦР	32	15 /17	46,9
ГЕМ	24	5/19	20,8

Список литературы

1. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота: Методические рекомендации. / П. Н. Смирнов, В. В. Храмцов, В. В. Смирнова, В. В. Разумовская // РАСХН. Сиб. отд-ние, ИЭВС и ДВ. - Новосибирск, 2000. - 21 с.
2. Гулюкин, М. И. Система мониторинга лейкоза крупного рогатого скота в Российской Федерации. / М. И. Гулюкин, // Ветеринарный консультант - 2007. - N° 17. - С.5-18.
3. Крикун, В. А. Лейкоз крупного рогатого скота и иммунологическая толерантность. / В. А.Крикун // Ветеринария. - 2003. - N°6. - С. 7-9.
4. Лейкоз крупного рогатого скота (диагностика и оздоровительные мероприятия) /В. А. Апалькин, М. И. Гулюкин, Н. И. Петров //:Рекомендации .- Петролазер: - Санкт - Петербург - 2005. - 87 с
5. Амироков, М. А. Основные положения комплексной системы оздоровления и профилактики лейкоза крупного рогатого скота на с.х. предприятиях Новосибирской области. /М. А. Амироков, В. В. Храмцов, С. Н.Магер // Ветеринарный врач. - 2007. - N° 3. - С. 5 - 6.
6. Зиннапов, Ф.Ф. Молекулярная генодиагностика лейкоза крупного рогатого скота: Автореф. дисс. канд.биол.наук/ Ф.Ф Зиннатов.- Казань.- 2008.25 с.
7. Ковалюк, Н.В. Современные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота /Н.В. Ковалюк, В.Ф. Сацук , Е.В. Мачульская// Ветеринария Кубани. - N° 1. - 2007.
8. Галеев, Р. Ф. Внутриутробное инфицирование эмбрионов вирусом лейкоза крупного рогатого скота / Р.Ф. Галлеев, Р. Ф. Хусаинов, А. Н. Чернов // Ветеринарный Врач - N° 6.- 2008. - С. 24 - 26.
9. Разумовская, В. В. Совершенствование системы управления эпизоотическим процессом лейкоза и бруцеллёза крупного рогатого скота: Автореф. дисс. докт. вет. наук. Барнаул. - 2004.- 39 с.

Реферат

Уровень инфицированности потомства гематологически больных коров по сравнению с потомством инфицированных коров был самым высоким и составлял 50%. Это свидетельствует о том, что частота инфицирования потомства (пренатального и постнатального периодов) у больных лейкозом коров значительно выше, чем у инфицированных (26.6%). По результатам исследований установлено, что иммунная коррекция блокировала возможность распространения вируса лейкоза, но не обусловливала повышения достоверности серологических исследований.

Ключевые слова: диагностика, вирус лейкоза, крупный рогатый скот, инфицированность, иммунологическая толерантность, иммунодефициты, ронколейкин, серология, иммунная система, мониторинг

Сведения об авторах

Дмитриев Анатолий Фёдорович, доктор биологических наук, профессор Ставропольского госагроуниверсите-та; тел.: 89620187475; e-mail: anatolidmitriev@yandex.ru.

Черных Олег Юрьевич, доктор ветеринарных наук, директор ГБУ КК "Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория"; г. Кропоткин, ул. Красноармейская, 303; тел.: 8(918)4956659; е-mail: gukkl50@kubanvet.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Новосельцев Георгий Георгиевич, заслуженный ветеринарный врач кубани, начальник ГБу кк "управление ветеринарии Гулькевичского района"; тел.: 8(918)4448381; e-mail: gyargyar1@gmail.com.

UDC 619:616-006.446.-07 22/28

CORRECTION OF IMMUNE STATUS AND INCREASE OF EFFICIENCY OF BOVINE LEUCOSIS' DIAGNOSTIC Dmitriev A.F., Novoseltsev G.G., Chernykh O.Yu.

Summary

The aim of our work is the evaluation of efficiency of roncoleukin use for immune status correction and increase of reability in diagnostics of young bovine leucose. Bovine leucose virus has immunosuppresive properties, what can develop different pathology and the possibility of intrauterine infection of offsprings is not excluded. Herewith, it is important to do early and accurate diagnosis of heifers. Correction of the young bovine's immune system can increase the realibility of serological diagnosis. The heifers (57 heads) born from the cows with different level of predisposition to the leucosis have been tested. The cow's immune correction by the roncoleukin didn't influence on the increase of the efficiency of immune diagnostics of young bovine leucose.

Key words: diagnosis, virus of bovine leucose, cattle, infection, immunotolerance, immunodeficiency, roncoleukin, serology, immune system, monitoring.

References

1. Smirnov P.N., Khramtsov V.V., Smirnova V.V., Razumovskaya V.V. Diagnostika leykoza krupnogo rogatogo skota: Metodicheskie rekomendatsii [Diagnostics of bovine leucose: Methodic recommendations]. - Novosibirsk. - 2000. - 21 p. Print. (in Russ.).
2. Gulyukin M.I. Sistema monitoringa leykoza krupnogo rogatogo skota v Rossiyskoy Federatsii [Monitoring system of bovine leucose in the Russian Federation]. - Veterinarny consultant (2007): pp. 5-18. - Print. (in Russ.).
3. Krikun V. A. Leykoz krupnogo rogatogo skota i immunologicheskaya tolerantnost [Leucose of large horned cattle and immunological tolerance]. -Veterinariya (2003): pp. 7-9. - Print. (in Russ.).
4. Apalkin V.A., Gulyukin M.I., Petrov N.I. Leykoz krupnogo rogatogo skota (diagnostika i ozdorovitelnye meropriyatiya): Rekomendatsii [Leucose of large horned cattle (diagnostics, recreational measures)]. - Saint-Petersburg - 2005. - 87 p. - Print. (in Russ.).
5. Amirokov M.A., Khramtsov V.V., Mager S.N. Osnovnye polozheniya kompleksnoy sistemy ozdorovleniya i profilaktiki leykoza krupnogo rogatogo skota na s/kh predpriyatiyakh Novosibirskoy oblasti [Basic positions of an integrated system of rehabilitation and treatment of bovine leucose in enterprises of Novosibirsk Region]. - Veterinarny vrach (2007): pp. 5-6. - Print. (in Russ.).
6. Zinnapov F.F. Molekulyarnaya genodiagnostika leykoza krupnogo rogatogo skota [Molecular gene diagnostics of bovine leucose]. - Kazan. - 2008. - 25 p. - Print. (in Russ.).
7. Kovalyuk N.V., Satsuk V.F., Machulskaya E.V. Sovremennye metody diagnostiki leykoza krupnogo rogatogo skota [Modern methods of diagnostics of bovine leucose]. - Veterinariya Kubani (2007). - Print. (in Russ.).
8. Galeev R.F., Khusainov R.F., Chernov A.N. Vnutriutrobnoe infitsirovanie embrionov virusom leykoza krupnogo rogatogo skota [Intrauterine infection of embryos by virus of bovine leucose]. - Veterinarny Vrach (2008): pp. 24-26. - Print. (in Russ.).
9. Razumovskaya V.V. Sovershenstvovanie sistemy upravleniya epizooticheskim processom leykoza i brutsellyoza krupnogo rogatogo skota [Improvement of management system of epizootic process of leucose and brucellose in cattle]. - Barnaul. - 2004. - 39 p. - Print. (in Russ.).

Author affiliation

Dmitriev Anatoly F., D.Sc. in Biology, professor of the Stavropol State Agrarian University; phone: 8(962)0187475; e-mail: anatolidmitriev@yandex.ru.

Chernykh Oleg Yu., D.Sc. in Veterinary Medicine, director of the Kropotkin regional veterinary laboratory; 303, Krasnoarmeyskaya st., Kropotkin, 352380; phone: 8(918)4956659; e-mail: gukkl50@kubanvet.ru.

Responsible for correspondence with the editorial board:

Novoseltsev Georgy G., honored veterinarian of the Kuban, chief of the veterinary service of Gulkevichsky district; 6, Severnaya st., Gulkevichi, 352190; phone: 8(918)4448381; e-mail: gyargyar1@gmail.com.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей