Экспериментальные и полевые исследования специфических антител в тканях органов у инфицированных вирусом АЧС домашних свиней и кабанов с острым течением болезни

Куриннов В.В., Белянин С.А., Васильев А.П., Стрижакова ОМ., Лыска В.М., Ногина И.В.,
Зубаирова С.Н., Балышев В.М., ЦыбановС.Ж., КолбасовД.В. ВНИИВВиМ, г. Покров
Миронова ПЛ. ГБУ "Ростовская областная ветеринарная лаборатория"
Черных О.Ю. ГБУ "Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория"
Аликова Г.А. ГБУ "Волгоградская областная ветеринарная лаборатория"

АЧС распространяется в России с ноября 2007 г. и по настоящее время в популяциях домашних свиней (235 вспышек) и диких кабанов (80 вспышек), с ярко выраженным геморрагическим син­дромом и высокой летальностью (100%). Поэтому, для подтверждения АЧС в схеме лабораторных исследований в лабораториях РФ используют два метода для обнаружения вируса - реакцию прямой иммунофлуоресценции (РПИФ) и полимеразную цепную реакцию (ПЦР). При оценке диагностичес­ких характеристик реакций тестированием проб органов от 576 домашних свиней и кабанов, отобранных при вспышках АЧС. диагностическая чувс­твительность ПЦР и РПИФ была 97(93-100)%- 93(87-100)%. соответствен­но, специфичность-100%. При параллельном использовании указанных методов достигается диагностическая точность 100%.

Кроме прямого обнаружения вируса Международным эпизоотиче­ским бюро (МЭБ) рекомендованы исследования антител против вируса АЧС в тканях органов и в сыворотках крови для обнаружения хронической или субклинической инфекции [1]. Так. при эпизоотиях АЧС в Испании в 60-70-80 годы прошлого столетия детекция антител серологическими мето­дами широко использовалась для эпизоотологического мониторинга ферм и обнаружения инфицированных переболевших свиней [2.3.4].

В данной работе представлены предварительные результаты иссле­дования специфических антител против вируса АЧС у павших домашних свиней и диких кабанов после острого течения болезни, вызванной экс­периментальным заражением полевыми изолятами вируса, а также при вспышках АЧС в полевых условиях.

Материалы и методы

• экстракты 20% суспензий проб органов от 13 домашних и 2-х диких кабанов, экспериментально заражённых (интраназально или в/м) изолята­ми вируса АЧС выделенных при вспышках болезни в 2007. 2008. 2009. 2010. 2011 гг.. в Северо-Кавказском. Южном. Центральном. Северо-За­падном и Приволжском (Оренбургская обл.) федеральных округах;
• полевые пробы органов от павших домашних свиней и диких ка­банов, доставленных в лабораторию ВНИИВВиМ в 2007-2011 гг. для под­тверждения АЧС. Все пробы установлены положительными ПЦР- и в реак­ции прямой иммунофлуоресценции (РПИФ) в региональных лабораториях и ВНИИВВиМ;
• для обнаружения специфических антител использовали РНИФ. Ком­поненты для выполнения реакции - коммерческий Набор препаратов для дифференциальной иммунофлуоресцентной диагностики африканской чумы свиней, классической чумы свиней, б. Ауески (производство ВНИ­ИВВиМ). Для приготовления тест-препаратов использовали культуру клеток CV-1. выращенную на стеклянных пластинках, заражённую авирулентным негемадсорбирующим штаммом вируса АЧС "691/88" (получен в 1989 г. из Швейцарского института вакцин, г. Базель;
• люминесцентная микроскопия - "Nikon" (Eclipse Е200) с флуорес­центным модулем.

Результаты и обсуждение.

В результате экспериментальной инфекции домашних свиней и ди­ких кабанов полевыми изолятами. вызвавшие вспышки АЧС в РФ 2008, 2009. 2010 и 2011 гг. была установлена острая форма течения болезни. У павших животных на 8 и 13 день п.з. параллельно с обнаружением вирусспецифической ДНК ПЦР и антигенов вируса (РПИФ). в тех же самых органах (лимфоузлы, селезёнки) были также обнаружены специфические антитела против вируса АЧС РНИФ в титрах от 5.3(2.8-7.8)- 8.0(6.5-9.4)log2 , соответственно.

Для исследования специфических антител в полевых пробах тканей органы исследовали от павших свиней, поступивших во ВНИИВВиМ из очагов АЧС (для подтверждения диагноза). В исследования были включе­ны 222 павших от АЧС свиней, у которых ПЦР и РПИФ были обнаружены компоненты вируса - вирусспецифическая ДНК и вирусспецифический внутриклеточный антиген. Поэпизоотологическим данным, полученным на пробы, в фермах время от подозрения АЧС до гибели было 5(3-7) дней, а симптомы и посмертные изменения были характерны для острой или подострой форм течения болезни.

Результаты тестирования специфических антител в указанных пробах тканей органов, отобранные при вспышках АЧС в период 2008-2011 гг. представлены в таблице.

Таблица. Частота обнаружения специфических антител к вирусу АЧС в вируссодержащих пробах тканей органов (пулы), отобранных от павших диких кабанов и домашних свиней при вспышках АЧС

ФО	Вид	Кол-во (ПЦР+) (РПИФ+) всего.	в т.ч. содержащие антитела				Частота обнаруже­ния AT
			2008	2009	2010	2011	Σ	%
СК+ФО	Дик	47	1	5	5	3	14	30%
	Дом	155	26	14	23	12	75	48%
	Итого:	202	27	19	28	15	89	44%
с-з	дом	7			1	1	2
	Дик	2				2	2	100%
Ц	Дом	22	1		1	10	12	55%
	Итого:	24	1		1	12	14	58%
П	дом	1	1				1
	дик	49	1	5	5	5	16	33%
Итого:	дом	185	28	14	25	23	90	49%
	Итого:	234	29	19	30	28	106	45%

ФО-(федеральный округ). С-К (Северо-Кавказский). Ю (Южный). С-З(Северо-Западный). Ц(Центральный). П(Приволжский. Оренбургская обл.)

Специфические антитела были обнаружены и у диких кабанов (пав­ших и отстрелянных) и у домашних свиней ( в фермах любого типа) неза­висимо от времени отбора, т.е. 2008. 2009. 2010. 2011 гг. Поскольку вы­борка проб для анализа была значительно выше в Северо-Кавказском и Южном ФО. как самых неблагополучных в пространстве и времени (202 животных), все итоговые эпизоотологические тенденции отражены в этих регионах. Так. в энзоотичных по АЧС территориях, расположенных в этих ФО, в пробах от павших диких кабанов, обнаруженных при вспышках (или случаях) на территории Чечни (2009). Северной Осетии (2008). Ставро­польского края (2009). в предгорьях Кавказа Краснодарского края (2009, 2010) Карачаево-Черкессии (2011), антитела были обнаружены уже при вторичных вспышках АЧС. Также, антитела были обнаружены и при вспыш­ках в Астраханской и Ростовской областях, а также в Тверской. Таким об­разом, антитела в тканях органов у павших от АЧС диких кабанов обнару­живали независимо от продолжительности эпизоотии и распространения АЧС. В популяциях домашних свиней (ЛПХ. фермы, свинокомплексы) при вспышках АЧС антитела обнаруживали также во все годы АЧС в России: 2008. 2009. 2010. 2011 гг. при первичных и вторичных вспышках. Коли­чественно, из всех тестированных пулов (животных) процент обнаружения антител в тканях свиней всех видов составил 45%. Относительно видов, отношение составило 33% диких и 49% домашних, то есть пали от острой и подострой формы АЧС, а 67% диких кабанов и 51% домашних свиней (антитела не обнаружены) пали от сверхострой и острой формы.

Уровни специфических антител у домашних и у диких кабанов варь­ировали от 4.3 до 9.0 log2.

Заключение

С диагностической точки зрения, специфические антитела в тканях органов инфицированных свиней пока не являются диагностически зна­чимым объектом, так как они обнаружены только у 45% животных. ПЦР и РПИФ-положительных с острой или подострой формой течения, при которой методы обладают высокой чувствительностью и специфичностью (особен­но при параллельном использовании). В отрицательных пробах органов, а также в 5056 пробах сывороток крови от домашних свиней инфицирован­ной зоны (СК и Южный ФО) специфические антитела против вируса АЧС не были обнаружены. Удивительно, что антитела, даже в довольно высокой концентрации, не блокируют внутриклеточные антигены и не мешают об­наруживать их РПИФ или иммуноферментным анализом (последний - дан­ные не представлены). Остаётся важной необходимость постоянной оценки и понимания диагностического значения вирусологических и серологичес­ких тестов в будущем.

Список литературы

1. Клименко А.И.. Миронова Л.П.. Карташов С.Н.. Ермаков A.M.. Мироно­ва А.А. Африканская чума свиней в Ростовской области // Ветеринарная патология. 2011. N°3. С. 29-32.
2. Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines (http://www.oie.int)
3. S.Botija, and A.Ordas. Rapid diagnosis by identification of antibodies extracted from tissues using indirect immunofluorescence // Hog Cholera/Classical swine fever and African swine fever .Luxembourg. 1977. c.658-659:
4. Jose Nanuel Sanchez-Vizcaino. African Swine Fever. В 9th Edition Diseases of Swine. Blackwell.2006.c.291-298.

Реферат

Обнаружение антител к вирусу АЧС у значительного количества инфицирован­ных павших домашних свиней и кабанов (вероятно после острого или подострого течения) болезни необходимо относить к патогенетическим механизмам естествен­ного развития болезни. Специфические антитела у свиней при острой инфекции АЧС также можно рассматривать как возможный фактор риска селекции циркулирующего (патогенного) вируса и с последующим распространением вируса умеренной виру­лентности.

Ключевые слова: африканская чума свиней, антитела, болезнь, вирус, виру­лентность.

Сведения об авторах

Куриннов Виктор Васильевич, доктор ветеринарных наук, профессор, заведую­щий лабораторией ВНИИВВиМ: 601120. Владимирская область. Петушинский район, г. Покров: (49243)6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Белянин С.А.. аспирант ВНИИВВиМ: 601120. Владимирская область. Петушин­ский район, г. Покров: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Васильев А.П.. кандидат биологических наук, старший научный сотрудник ВНИ­ИВВиМ: 601120. Владимирская область. Петушинский район, г. Покров: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Стрижакова О.М.. кандидат ветеринарных наук, стар­ший научный сотрудник ВНИИВВиМ: 601120. Владимирская область. Петушинский район, г. Покров: (49243) 6-21-25: е-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Лыска В.М.. кандидат биологических наук, старший научный сотрудник ВНИИВВиМ: 601120. Владимирская об­ласть. Петушинский район, г. Покров: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Ногина И.В.. кандидат биологических наук, старший научный сотрудник ВНИИВВиМ: 601120. Владимирская об­ласть. Петушинский район, г. Покров: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Зубаирова С.Н., кандидат биологических наук, старший научный сотрудник ВНИИВВиМ: 601120. Владимирская об­ласть. Петушинский район, г. Покров: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Миронова Людмила Павловна, доктор ветеринарных наук, профессор, директор ГБУ РО "Ростовская областная ве­теринарная лаборатория": 344010. г. Ростов-на-Дону. пер. Ах-тарский. 4: (863)232-09-63: e-mail: brucella@aaanet.ru.

Балышев В.М.. доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий лабораторией ВНИИВВиМ: 601120. Владимирская область. Петушинс­кий район, г. Покров: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Цыбанов С.Ж., доктор биологических наук, профессор, заведующий лабора­торией ВНИИВВиМ: 601120. Владимирская область. Петушинский район, г. Покров: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Аликова Г.А.. заместитель директора ГБУ "Волгоградская областная ветеринар­ная лаборатория": 400120. г. Волгоград, ул. Неждановой. 4: (8442)902987.

Колбасов Денис Владимирович, доктор ветеринарных наук, профессор, ди­ректор ВНИИВВиМ: 601120. Владимирская область. Петушинский район, г. Покров: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Черных Олег Юрьевич доктор ветеринарных наук, директор ГБУ КК -Кропоткинская краевая ветеринарная ла­боратория"; 352140, Краснодарский край, ст. Кавказская, ул. Ленина, 325, кв. 1. 8(238) 6-54-85.

UDC 619:616.98:578.842.1

EXPERIMENTAL AND FIELD RESEARCHES OF SPECIFIC ANTIBODIES IN TISSUES OF THE HOUSE PIGS INFECTED WITH VIRUS ASF AND WILD BOARS WITH A SHARP CLINICAL COURSE

Kurlnnov V.V., Belyanin S.A., Vasllyev A.P., Strlzhakova O.M, Lyska V.M., Noglna I.V., Zubairova S.N., Mronova LP, Chernykh O.Y., Balyshev V.M, Tsybanov S.Zh., Allkova G.A., Kdbasov D.V.

Summary

Detection of antibodies to ASF virus at significant amount of the infected fallen house pigs and wild boars (it is probable after sharp or subacute current) is necessary to carry diseases to pathogenetic mechanisms of natural development of an illness. Specific antibodies at pigs at sharp infection of ASF can be considered as possible risk factor of selection of circulating (pathogenic) virus and with the subsequent distribution of a virus of a moderate virulence.

Key words: African swine fever, antibodies, disease, virus, virulence.

References

1. Klimenko A.I.. Mironova LP., Kartashov S.N.. ErmakovA.M., Mironova A.A. Afrikanskaya chuma sviney v Rostovskoy oblasti [African swine fever in Rostov area]. - Veterinarnaya patologiya. 2011. #3. - pp. 29-32.
2. -4. Vide supra. Author affiliation

Kurinnov Viktor V. D.Sc. in Veterinary Medicine, professor, laboratory manager of the National Research Institute for Veterinary Virologyand Microbiology: Pokrov. Petushki area. Vladimir region. 601120: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Belyanin S.A.. post-graduate student of the National Research Institute for Veterinary Virology and Microbiology: Pokrov. Petushki area. Vladimir region. 601120: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

VasilevA.P. Ph.D. in Biology, senior researcher of the National Research Institute for Veterinary Virologyand Microbiology: Pokrov. Petushki area. Vladimir region. 601120: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Strizhakova O.M.. Ph.D. in Veterinary Medicine, senior researcher of the National Research Institute for Veterinary Virologyand Microbiology: Pokrov. Petushki area. Vladimir region. 601120: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Lyska V.M., Ph.D. in Biology, senior researcher of the National Research Institute for Veterinary Virologyand Microbiology: Pokrov. Petushki area. Vladimir region. 601120: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Nogina I.V., Ph.D. in Biology, senior researcher of the National Research Institute for Veterinary Virologyand Microbiology: Pokrov. Petushki area. Vladimir region. 601120: (49243) 6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Zubairova S.N.. Ph.D. in Biology, senior researcher of the National Research Institute for Veterinary Virology and Microbiology: Pokrov. Petushki area. Vladimir region. 601120: (49243)6-21-25: e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru.

Mironova Lyudmila P.. D.Sc. in Veterinary Medicine, professor, director of the Rostov territorial veterinary laboratory: 4. Akhtarsky lane. Rostov-on-Don. 344010: phone: (863) 232-09-63: e-mail: brucella@aaanet.ru.

Balyshev V.M.. D.Sc. in Veterinary Medicine, professor, laboratory manager of the nesearcn insuiuieTor veterinary viroiogyana MicroDioiogy: KOKrov. retusnKi area, viaaimir region. 601120: (49243)6-21-25: e-mail: vniiwim@niiv.petush.elcom.ru.

Alikova G.A.. deputy director of the Volgograd territorial veterinary laboratory: 4. Nezdanova St., Volgograd: phone: (8442)902987.

Responsioie таг correspondence wim ine eon on a Doara: Chernykh 01 eg Yn, D.Sc. in Veterinary Medicine, director of the Kropotkin territorial veterinary laboratory; 303, Krasnoarmeyskaya St., Kropotkin, 352380; phone: 8(86138)6-23-14; e-mail: gukkvl50@kubanvet.ru.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей