Клиниколабораторные особенности эрлихиоза у собак

Карташов СМ., Ключников А.Г., Ермаков A.M., Приходько М.А.,
Левченко Н.В. ГНУ СКЗНИВИ, г. Новочеркасск
Миноранский В.А., Казадаев А.А. Южный федеральный
университет, г. Ростов-на-Дону

Эрлихиозы собак - природноочаговые. трансмиссивные инфекции которые вызываются внутриклеточными W микроорганизмами рода Ehrlichia и протекают в виде острых лихорадочных заболеваний. Различают моноцитарный (поражающий моноциты) и гранулоцитарный (поражающий нейтрофилы) эрлихиозы собак. Этиологию моноцитарного эрлихиоза собак связывают с Е. canis и Е. chaffensis. получившей самостоятельный видовой статус только в начале 90-х годов. Гранулоцитарный эрлихиоз у собак связывают с инфекцией Е. phagocytophila и Е. platus [2 3 4. 5] Эрлихии попадают в организм животного со слюной зараженного клеща По зарубежным данным инкубационный период продолжается от 1 до 21 дней, а манифестное заболевание - две-три недели. Клинические симптомы эрлихиоза весьма полиморфны. В острый период, кроме лихорадки и признаков интоксикации наблюдается тромбоцитопения. лейкопения, анемия, повышенные уровни аланинаминотрансферразы. креатинина [6 7] Клинически у таких животных может отмечаться субэктеричность и иктеричность склер, на фоне лихорадки у таких животных часто диагностируют пироплазмоз, кроме того эрлихиозы могут протекать на фоне пироплазмоза, что требует дифференциальной диагностики [1. 7].

Цель и задачи исследования. Исходя из вышеизложенного целью нашей работы явилось уточнение клинических, лабораторных и морфологических особенностей эрлихиоза. проведение морфологических исследований печени у собак при эрлихиозе.

Материл и методы исследования.

Для решения поставленных задач нами было обследовано 47 собак с диагнозом эрлихиоз, который был поставлен методом выделения ДНК возбудителя в ПЦР Все павшие животные были подвергнуты посмертному патологоанатомическому вскрытию с последующим морфологическим исследованием печени.

Из образцов печени, фиксированных в формалине и заключенных в парафин, изготовляли серийные срезы толщиной 4 мкм с последующей окраской гематоксилином и эозином С помощью ШИК-реакции (реакция Шифф-йодной кислотой. ГА. Меркулова. 1969) выявляли гликоген и гликопротеины. Углеводы, содержащие гексозу. окрашиваются в красно-лиловый цвет (эндотелий сосудов), а гликоген - в более интенсивный темно-красный

Результаты исследований.

В весенне-летний период 2009 года в ветеринарные клиники г. Ростова поступили 2384 собаки с острыми лихорадочными заболеваниями, возникшими после присасывания клещей. Из них у 47 животных методом ПЦР был установлен диагноз эрлихиоз. Всем этим животным было проведено детальное обследование Обследование включало получение подробных анамнестических и объективных данных осмотра животного на предмет неврологического дефицита, офтальмалогической патологи, были проведены неоднократные динамические общеклинические исследования (гемограмма, биохимический анализ крови с определением активности АЛат АСаТ мочевины, креатинина) Для исключения других сезонных инфекционных и инвазионных заболеваний были проведены дополнительные исследования с соответствующими диагнос-тикумами.

Анализ клинических проявлений в остром периоде болезни позволил выявить преобладание у большинства обследованных животных общеинфекционного синдрома, характеризующегося лихорадкой, анорексией адинамией и слабостью задних конечностей (Таблица 1).

Таблица 1. Клинические проявления эрлихиоза у собак

Клинические проявления	Число случаев	То же в процентах от общего числа больных
Лихорадка	47	100%
Озноб	14	29.79%
Слабость	22	46.81%
Изменения функциональных проб печени	41	87.23%
Рвота	3	6.38%
Миалгия	13	27.66%
Артралгии	2	4.26%
Катаральные явления (кашель, выделения из носа глаз)	5	10.64%
Гиперемия слизистых	3	6.38%
Увеличение периферических лимфоузлов	29	61.70%
Инъекция сосудов склер, конъюнктив	9	19.15%
Увеличение печени	47	100.00%
Парестезии	2	4.26%
Лимфоцитарный плеоцитоз	3	6.38%
Субэктеричность склер	17	36.17%
Анемия	29	61.70%
Тромбоцитопения	33	70.21%

Начальная стадия гипертермии у значительной части больных животных сопровождалась умеренным или незначительно выраженным ознобом. Температура часто достигала фебрильных цифр - от 39.5 С до 40.3 С. реже была субфебрильной. Длительность лихорадочной реакции в основном составляла 1-6 дней, но иногда продолжалась до 10-12 дней Катаральные явления со стороны верхних дыхательных путей отмечены у 1/4 больных собак. При осмотре кожных покровов и слизистых оболочек у трех собак была выявлена гиперемия слизистых, а у 9 больных собак - инъекция сосудов склер и конъюнктив. У 29 пациентов отмечалось увеличение подчелюстных лимфоузлов от 0.7 до 1.2 см в диаметре. Общемозговые симптомы в виде неуверенной походки, ригидности мышц, рвоты наблюдались практически у 10% животных. У двух собак выявлены парестезии, а у одной из них - имели место ме-нингеальные симптомы (ригидность затылочных мышц, симптом Кернига). В спинномозговой жидкости у троих пациентов выявлен лимфоцитарный плеоцитоз - от 25 до 431 кл в 1 мл. Изменений в количестве белка, глюкозы хлоридов не обнаружено. Поражение опорно-двигательного аппарата отмечалось в виде миалгий. преимущественно задних конечностей и артралгии. иногда возникали боли в области позвоночника. Вовлечение в патологический процесс сердечно-сосудистой системы проявлялось умеренной тахикардией (до 100 в минуту). У всех больных животных выявлено незначительное увеличение размеров печени, край которой выступал из под реберной дуги на 1-2 см. У 17 животных гепатомегалия сопровождалась субиктеричностью склер, темной окраской мочи, изменениями функциональных проб печени. У 41 собаки имело место повышение активности АЛаТ и АСаТ (257-455 Е/ л) и (или) увеличение креатинина (147-183 ммоль/ на л), однако клинические проявления острой почечной недостаточности не были выявлены ни у одного из животных.

Наиболее выраженные изменения были зарегистрированы в гемограмме больных эрли-хиозом собак. У 29 обследуемых животных наблюдалась гипохромная анемия со снижением количества эритроцитов до 3.1x1012/ на литр и гемоглобина до 80 мг/ л. У 33 собак имела место тромбоцитопения - 110-90х109/л. у 16 - лейкопения от 2.3 до 4 7х109/л у 14 - увеличение СОЭ от 27 до 56 мм/час. У 3 животных наблюдалось двухволновое течение заболевания, которое характеризовалось некоторыми особенностями. В большинстве случаев вторая волна имела более тяжелое течение что проявлялось высокой и длительной лихорадкой, выраженными симптомами интоксикации

Таким образом, анализ клинической картины эрлихиоза у собак позволил установить острое течение инфекции с непродолжительной инкубацией. Начальный период характеризуется развитием выраженного общеинфекционного синдрома при отсутствии патогномоничных признаков заболевания Превалирует фебриль-ная температура с продолжительностью лихорадочной реакции не более 10-12 дней. Органная патология проявляется поражением нервной системы. Нередко развивается серозный менингит, картина которого в целом не отличается от аналогичных менингитов другой этиологии. Поражение печени проявляется развитием острого безжелтушного гепатита с легким течением В то же время не исключается и возможность нарушения пигментной функции печени. К особенности наблюдавшегося нами эрлихиоза можно отнести частое развитие двухволнового течения, при котором вторая волна в большинстве случаев протекает тяжелее, с более выраженным общеинфекционным синдромом и серозным менингитом. Для диагностики раннего периода заболевания важны достаточно стереотипные изменения в гемограмме тромбоцитопения. лейкопения, повышение СОЭ. Отсутствие патогномоничных симптомов в клинической картине эрлихиоза существенно затрудняет распознавание инфекции без ее верификации в реакции ПЦР.

У 3-х павших от эрлихиоза собак были проведены морфологические исследования печени. Отмечено мозаичное изменение органа с чередованием различных участков поражения.

Изменения в участках поражения характеризовались одно-или многоцентральным распределением лимфоцитов и плазматической рассеянной инфильтрацией в портальной триаде и печеночных дольках (рис. 1) Гепатоциты были гистологически нормальными.

Отмечались участки характеризующиеся лимфоцитарными инфильтратами портальных триад и печеночных долек. Отмечались фокальные некрозы, локальные расширения синусов с инфильтрацией лимфоцитами и мононуклеарными клетками (рис. 2, 5).

Рис1. Перипортальный мононуклеарный инфильтрат. Гематоксилин с эозином, 10x40 Рис2. Ацидофильные тельца (Каунсипьмена). Трихром по Масону, 10x40 Рис3. Узел регенерации гепатоцитов, каликвационый некроз. Гематоксилин с эозином, 10x40 Pиc4. Геалиновокапельная дегенерация гепатоцитов. Трихром по Масону, 10x20 Рис5. Фокальные некрозы с инфильтрацией синусов и паренхимы лимфоцитами, гиперемия синусов. Гематоксилин с эозином, 10x10 Рис6. Жировая дегенерация гепатоцитов. Гематоксилин с эозином, 40x10 Рис7. Гидропическая и жировая дегенерация гепатоцитов. Гематоксилин с эозином, 40х10 Рис8. Гидропическая дегенерация гепатоцитов. расширение центральной вены. Гематоксилин с эозином, 40х10

Рис9. Обширные лимфоцитарные инфильтраты, в гепатоцитах сохранен гликоген, ШИК 40x10. Рис10. Обширные лейкоцитарные инфильтраты, в гепатоцитах отсутствует гилокоген, ШИК40х10.

В участках с выраженными изменениями они. чаще всего соответствовали портальному и лобулярному морфологическим вариантам поражения органа При портальном варианте обнаруживали отёк и расширение портальных трактов с инфильтрацией ихлимфо-гистиоцитарными элементами. Гепатоциты находились в состоянии гидропической и жировой дистрофии (рис. 6, 7,8). При лобулярном варианте гепатита чаще обнаруживались некрозы печёночных клеток (рис. 5). иногда они носили сливной характер, располагались преимущественно в центральных отделах печеночных долек. Отмечалась лимфоцитарная и моноцитарная инфильтрация портальных трактов от умеренной до выраженной, единичные ступенчатые некрозы гепатоцитов. гепатоциты в состоянии гидропической дистрофии слабой и умеренной степени (рис. 5, 6)

В портальных трактах отмечалась пролиферация эпителия в междольковых желчных протоках. Однослойное строение тяжей (балок) гепатоцитов местами было нарушена, отмечалась выраженная их извитость, и узлы регенерации, гепатоциты выстраивались в виде розеток, но уже в этих розетках регенерации отмечался каликвационный некроз (рис. 3). В синусоидах отмечалась дегенерация эндотелиальных клеток, местами их десквамация и гибелью гепатоцитов и пролиферацией клеток Купфера. В гепатоцитах центральных отделов долек отмечалась гидропической или баллонной дистрофии. Вместе с тем рассеяно по всем дольками печени встречались гепатоциты в состоянии гиалиновокапельной дегенерации которая местами доходила до формирования телец Каунсильмена (рис. 2), крайней степени гиалиновокапельной дегенерации с некрозом гепатоцита. В некоторых полях отмечалось проникновение инфильтрата из лимфоцитов, макрофагов, плазматических клеток через пограничную пластинку в печеночную дольку. Некрозы носили ступенчатый характер, но локально отмечались мостовидные и субмассивные поражения. Деструкция гепатоцитов сочеталась с очаговой или диффузной пролифе-рацией звездчатых ретикулоэндотелиоцитов и клетокхолангиол (рис. 5. 3).

Заключение.

Таким образом, на основании комплексного эпизоотологи-ческого и клинического исследования получены данные о клиническом течении эрлихиоза у собак которые следует рассматривать лишь как первый шаг в изучении этой новой для нашего региона проблемы инфекционной патологии.

Для диагностики раннего периода эрлихиоза собак характерны изменения в гемограмме тромбоцитопения лейкопения, повышение СОЭ. Отсутствие патогномоничных симптомов в клинической картине эрлихиоза существенно затрудняет распознавание инфекции без ее верификации в реакции ПЦР. Поражение печени проявляется развитием острого, безжелтушного гепатита. Гистологически отмечаются дистрофические и некробиотические изменения гепатоцитов с формированием ступенчатых некрозов, пролиферацией гепатоцитов с формированием розеток, и последующим их некрозом. На фоне гидропической и жировой дистрофии отмечается дессиминированная геалиновокапельная дегенерация гепатоцитов с формированием телец Каунсильмана.

Список литературы

1. Карташов С.Н Диагностическое значение цитологического исследования клеток печени при пироплазмозе у собак. Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова С.28-30. Кривко М.С.. Славинская Л.П.. Карташов С.Н.
2. DumlerJS BarbetAF Bekker CPJ. et al Reorganization of genera in the families Rickettsiaceae and Anaplasmataceae in the order Rickettsiales; unification of some species of Ehrlichia with Anaplasma. Cowdria with Ehrlichia, and Ehrlichia with Neorickettsia: description of five new species combinations: and designation of Ehrlichia equi and HGE agent as subjective synonyms of Ehrlichia phagocytophila. // Int i Syst Evol Mikrobiol. 2009 V.51. P. 2145-2165
3. Katavolos P. Armstrong PM Dawson JE et al Duration of tick attachment required for transmission of granulocytic ehrlichiosis. // J Infect Dis. 2004. V. 177. No. 5. P. 1422-1425.
4. Levin. M. L. des Vignes F.. Fish D. Disparity in the natural cycles of Borrelia burgdorferi and the agent of human granulocytic ehrlichiosis. // Emerg. Infect Dis.. 2008 V 5. P. 204-208.
5. Liz J.S. Ehrlichiosis in Ixodes ricinus and wild mammals. // Int J Med Microbiol. 2007 V. 291 Suppl 33. P. 104-105.
6. Long SW. Zhang X. Zhang J et al. Evaluation of transovarial transmission and transmissibility of Ehrlichia chaffeensis (Rickettsiales: Anaplasmataceae) in Amblyomma americanum (Acari: Ixodidae).// J Med Entomol. 2003. V 40. No. 6. P. 1000-1004.
7. Lotric-Furlan S. Avsic-Zupanc T. Petrovec M et al. Clinical and serological follow-up of patients with human granulocytic ehrlichiosis in Slovenia. // Clin Diagn Lab Immunol 2001. V 8. No. 5. P. 899-903.

Ключевые слова: эрлихиозы. собаки, тромбоцитопения. лей-коцитопения гепатоциты

Summary.

For diagnostics of the early period ehrlichiosis dogs changes in haemogram are characteristic: a thrombocytopenia, leycocytopenia. Absence the specific symptoms in a clinical picture ehrlichiosis essentially complicates recognition of an infection without its verification in reaction PCR. Liver defeat is shown by development sharp, hepatitis with an easy current generalized lymphadenopathy. hepatic atrophy with icterus and edema The results of this study confirm that histologic, were examined and scored for the types and tissue distribution of histologic lesions associated with ehrlichiosis

Key words: ehrlichiosis, dogs, thrombocytopenia, leycocytopenia. hepatocytes

Сведения об авторах

Карташов Сергей Николаевич, доктор биологических наук, профессор, зав. лаборатории ГНУ СКЗНИВИ г. Новочеркасск. Ростовское шоссе. ГНУ СКЗНИВИ. 88636227105:

Приходько Мария Андреевна, аспирант СКЗНИВИ г, Новочеркасск Ростовское шоссе. ГНУ СКЗНИВИ. 88636227105

Ключников Александр Генадьевич, старший научный сотрудник СКЗНИВИ. г. Новочеркасск. Ростовское шоссе. ГНУ СКЗНИВИ. 88636227105

Левчено Наталья Валерьевна, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник ГНУ СКЗНИВИ г. Новочеркасск. Ростовское шоссе ГНУ СКЗНИВИ 88636227105

Миноранский Виктор Аркадьевич, доктор сельскохозяйственных наук, профессор, заведующий кафедрой зоологии Южного федерального университета, г. Ростов-на-Дону. ул. Б. Садовая. 105 (863)2184031

КазадаевАнатолий Анисимович, докторбиологических наук, профессор кафедры зоологии Южного федерального университета, г. Ростов-на-Дону ул Б Садовая 105 (863)2184031

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей