Фармако-токсикологические свойства фитоиммунопрепарата Каргмэз

УДК 619:835.2]636.2
DOI 10.33861/2071-8020-2022-3-26-28

Кощаев А. Г., Гугушвили В. М. Федеральное государственное бюджетное образовательное
учреждение высшего образования «Кубанский государственный аграрный университет
имени И.Т. Трубилина», г. Краснодар

В настоящее время животноводство стремительно развивается, что зачастую оказывает неблагоприятное воздействие на животных, нарушая иммунитет и снижая естественную резистентность организма, что способствует возникновению инфекционных заболеваний, в частности лептоспироза, широко распространенного во всех регионах нашей страны. Как правило, степень заболеваемости лептоспирозом возрастает в местах высокой концентрации поголовья сельскохозяйственных животных. У жвачных возбудитель чаще выявляется в пастбищный сезон [6, 7, 11, 12, 16, 17].

В центре внимания ветеринарной медицины была и остается проблема создания полноценного иммунного статуса организма животных и индукции специфической невосприимчивости путем их активной или пассивной иммунизации. В нашей стране и за рубежом проводятся исследования по коррекции иммунного статуса, а также работы по созданию препаратов и методов иммунизации на основе использования веществ, обладающих иммуностимулирующей активностью [9].

Необходимость развития исследований в области изучения проблем иммуностимуляции в ветеринарии объясняется тем, что при современной системе ведения животноводства, животные нередко находятся в постоянном иммунодефицитном состоянии, что приводит к повышению заболеваемости и снижению продуктивности [1, 2, 15].

В настоящее время иммуностимулятором считается вещество, которое путем избирательного действия на отдельные этапы иммунного ответа, вызывает активацию процессов связывания и обработки антигенного материала, созревание иммунокомпетентных клеток, усиления их функциональных свойств, а также различных регуляторных механизмов, в частности, гормонального и медиаторного [5, 13, 14].

Разнообразие веществ со сходной иммуностимулирующей активностью, но с различной химической структурой, затрудняет изучение механизма их действия. У стимуляторов иммунного ответа имеются различные механизмы действия. В основе механизма фармакологического действия иммунотропных средств заложен эффект стимуляции факторов неспецифической защиты. Наиболее изученными из них являются фагоцитоз, комплемент, опсонин-пропердин, лизоцим, интерферон. В комплексную систему защиты входит также спонтанная клеточная цитотоксичность, эффекторами которой являются NK-клетки, макрофаги, полиморфноядерные лейкоциты, Т-клеточные предшественники, Т- и В-лимфоциты. Спонтанная клеточная цито-токсичиость в значительной мере зависит от продуцируемых этими клетками медиаторов [8, 9].

В связи с изучением биологических механизмов взаимодействия клеток иммунной системы, возникла необходимость подбора фармакологических средств избирательной стимуляции или ингибиции отдельных звеньев иммуногенеза, в результате чего было создано много новых иммуностимулирующих веществ, таких как тимоген, Т-активин, тималин и др. [3, 4,].

Поиск в ряду адаптогенов и иммунокорректоров среди лекарственных растений является перспективным направлением иммунофармакологии. Так как содержащиеся в растениях биологически активные вещества сбалансированы самой природой, их действие комплексно и безопасно. Кроме того, немаловажным фактором является доступность сырья и простота технологии приготовления лекарственной формы.

Цель работы: разработка фитопрепаратов и применение их для повышения иммунобиологической реактивности организма животных.

Материал и методы исследований. По регламентированным методам ГФ XI изучали физико-химические свойства фитопрепаратов, по ВФС 42-2371-94 определяли концентрацию действующего вещества (оксикоричные кислоты), входящего в состав лекарственного растения эхинацея пурпурная.

Фармако-токсикологическую оценку фитоиммунопрепарата Каргмэза осуществляли на лабораторных животных (белых крысах и мышах). При этом изучали острую и субхроническую токсичность, аллергизирующее и местно-раздражающее действие, влияние на массу тела и органов животных, сердечно-сосудистую систему, функциональную активность мочевыделительной системы, патологоанатомические изменения органов и тканей, гематологические, иммунологические и биохимические показатели. Полученные результаты были подвергнуты биометрической обработке по И. А. Ой-вину (1960), степень достоверности установлена по распределению Стьюдента.

Результаты исследований и их обсуждение. Нами разработан фитоиммунопрепарат «Каргмэз» из недефицитного, экологически чистого сырья на основе лекарственных трав. Каргмэз - комплексный препарат, за счет сочетанного применения водно-спиртовой настойки с ионами серебра (Аргерит-40) и травы эхинацеи пурпурной, зверобоя, листья крапивы двудомной и травы мелисы (листья и верхушечные побеги). По внешнему виду фитоиммунопрепарат «Каргмэз» представляет собой жидкость темно-коричневого цвета со специфическим травяным запахом и вкусом.

Действующим веществом «Каргмэз» являются оксикоричные кислоты, флавоноиды, эфирные масла, рутин, кверцитрин, изокверцитрин; витамины, В1, В2, аскорбиновая кислота, каротиноиды, РР, холин, дубильные и белковые вещества, следы алкалоидов, ионы серебра.

Препарат обладает иммуномодулирующим, общеукрепляющим, секретолитическим действием, повышающим функцию половых желез, противовоспалительным, противомикробным, спазмолитическим, гипотензивным, кардиотоническим, антигипоксантным, гипертензивным, кардиотоничесим, мочегонным, кровоостанавливающим, седативным, бронхолитическим, анальгезирующим, вяжущим, репаративным, потогонным, ветрогонным, повышающим аппетит, желчегонным и десенсибилизирующим действием.

Определение острой токсичности проводили на 25 белых мышах (масса 19-20 г) и 25 белых крысах (масса 160-180 г). Опытным группам фитопрепарат вводили внутрижелудочно с помощью атравматического зонда с тупым наконечником в максимальном объеме для белых мышей 0,5 мл, белых крыс - 3 мл. Контрольным аналогам в тех же дозировках вводили физиологический раствор. После введения препарата в течение четырнадцати суток за животными осуществляли наблюдение. При этом у лабораторных животных отмечали общее состояние организма, аппетит, подвижность, поведенческие реакции.

У белых мышей и белых крыс через 3-5 минут после перорального введения препарата в максимально возможном объеме наблюдали развитие релаксации и глубокого сна (продолжительностью 1,5 - 2 ч) без летального исхода. Данное действие мы связывали с влиянием алкоголя, входящего в состав препарата. Развитие побочных эффектов (парезы, параличи, угнетение) у животных отмечено не было. В связи с отсутствием гибели животных после введения максимального возможного объема препарата их LD50 и LD100 не установлена, что позволяет отнести препараты к разряду малотоксичных.

Таким образом, данные токсикометрии, а также наблюдение за лабораторными животными на протяжении 14-ти суток в постинтоксикационном периоде острого отравления, позволяет отнести препарат каргмэз по ГОСТу 12.1.007-76 «Вредные вещества» к четвертому классу опасности - вещества малотоксичные, для которых диапазон доз LD50 при внутрижелудочном введении в опытах составляет 5000 мг/кг.

Субхроническую токсичность изучали на белых беспородных крысах со средней массой тела 170,30±4,83 г., для чего было сформировано 4 группы животных в количестве 25 в каждой. Препарат Каргмэз вводили животным 1, 2 и 3 опытным группам. Животным первой опытной группы препарат вводили в количестве 1/10 дозы от максимально введенной при установлении острой токсичности (0,3 мл на одно животное); второй опытной группе - 1/20 дозы от введенной при установлении острой токсичности (0,15 мл на одно животное); третьей опытной группе - 1/50 дозы от введенной при установлении острой токсичности (0,06 мл на одно животное). Животным четвертой группы (контрольной группы) в максимальной дозировке (1/10) вводили физиологический раствор в количестве 0,3 мл на одно животное. Препарат животным вводили с помощью пипетки в разведенном состоянии до объема 1 мл в течение 30 дней.

Установлено, что длительное принудительное введение изучаемого препарата не привело к возникновению и развитию признаков токсикоза у всех подопытных крыс. На основании полученных результатов установлено, что препарат Каргмэз не обладает токсическими свойствами.

Аллергизирующее действие препарата каргмэза изучали на морских свинках методом накожных аппликаций, и на кроликах - методом конъюнктивальной пробы.

Методом эпикутаных аппликаций на морских свинках применяли провокационные кожные пробы. Предварительно проводили сенсибилизацию животных путем многократного нанесения на кожу Каргмэза. По окончании инкубационного периода, на 14 день на свежевыстриженный участок кожи наносили разрешающую дозу препарата Каргмэза (0,3 мл). На протяжении всего периода проводили наблюдение за опытными животными: термометрию тела, измерение толщины кожной складки на месте эпикутирования, определяли температуру на месте введения испытуемых препаратов.

Изменений общего состояния животных и на месте аппликации препаратов не было выявлено как в период эксперимента, так и после его отмены. У морских свинок оставалась неизменной упругость кожи, эластичность и подвижность. Отсутствовала болевая реакция при пальпации места аппликации, отек кожи, трещины, корочки и геморрагии. На основании полученных результатов ответную реакцию оценивали как отрицательную.

Изучение местно-раздражающего действия препарата Каргмэза на кроликов показало, что влияние на слизистые оболочки глаз выражалось незначительной гиперемией конъюнктивы, слезотечением, которое проходило в течение 3-5 минут. Изъязвления конъюнктивы, рубцовых изменений век, помутнения роговицы не регистрировали. При последующих наблюдениях негативного воздействия препарата на слизистые оболочки глаз (гиперемия конъюнктивы, слезотечение и сужение зрачка) не наблюдалось.

Кожно-резорбтивное действие препарата Каргмэза изучали на белых крысах методом погружения хвоста. Учет реакции кожно-резорбтивного действия препарата проводили через четыре часа по наличию на хвосте местных изменений, степени выраженности интоксикации и смертельных исходов. Результатами экспериментов не были установлены признаки интоксикации у подопытных животных. Таким образом, исследуемый препарат Каргмэз не оказывает местного токсического действия на организм животных.

В результате проведенных исследований установлено, что препарат стимулирует рост массы тела и внутренних органов в пределах физиологической нормы, что свидетельствует об отсутствии негативного влияния на развитие органов и тканей организма животных.

Гематологические исследования. При анализе периферической крови крыс, получавших Каргмэз, установлена некоторая тенденция к снижению общего количества эритроцитов. При этом общее количество гемоглобина несколько повышалось. Скорость оседания эритроцитов и цветной показатель у контрольных и подопытных животных была практически на одном уровне. Количество лейкоцитов у подопытных животных отмечено в пределах физиологической нормы, однако, прослеживалась четкая дозозависимая тенденция к их снижению. В лейкоцитарной формуле подопытных крыс значительных сдвигов не обнаружено, выявлено снижение содержания лимфоцитов на 22% (Р<0,05) палочкоядерных нейтрофилов - в 1,6 раза и, напротив, повышение сегментоядерных нейтрофилов в 2 раза у крыс, получавших Каргмэз в дозе 0,15 мл/кг массы животного, относительно контрольной группы (табл. 1).

Таблица 1 Показатели периферической крови крыс после введения Каргмэза (M±m; n=25)

Пока­затель	Через один месяц
	Контроль­ные	Каргмэз
		0,3 мл	0,15 мл	0,06 мл
Эритроциты (10 12/л)	4,05±0,35	4,16±0,05	4,12±0,11	4,01±0,19
Гемоглобин (г/л)	88,36±8,16	96,29±5,23**	94,20±5,33*	92,84±4,34*
Лейкоциты (10 9/л)	10,18±0,58	9,43±0,63 *	9,32±0,46*	9,32±0,50*
Нейтро­филы: Юные	0,00±0,00	0,00±0,00	0,00±0,00	0,00±0,00
Палочко­ядерные	1,94±0,28	0,82±0,52**	0,89±0,24**	0,90±0,56***
Сегменто­ядерные	28,09±0,63	34,27±0,74*	44,43±0,27***	35,30±0,72*
эозинофилы	0,72±0,32	0,62±0,44	0,64±0,33	0,62±0,64
базофилы	0,00±0,00	0,00±0,00	0,00±0,00	0,00±0,00
моноциты	0,70±0,16	0,64±0,07**	0,65±0,07*	0,80±0,48*
лимфоциты	68,55±0,03	63,65±0,06	53,39±0,16**	62,38±0,37*

Примечание: * - P < 0,05; ** P > 0,01; *** P > 0,001

При биохимических исследованиях сыворотки крови у животных, получавших препарат, обнаруживали сдвиги в количественном содержании белка, глюкозы, мочевины и активности аминотрансфераз. Они были в пределах физиологической нормы и достоверно не отличались от таковых у крыс контрольной группы (табл. 2).

Таблица 2 Биохимические показатели сыворотки крови крыс после введения Каргмэза и отмены (M±m; n=25)

Показатель		Каргмэз
		0,3 мл	0,15 мл	0,06 мл
Опыт
Белок (г/л)	71,40±0,35	72,00±0,51	72,23±0,43	69,43±0,37
Глюкоза (ммоль/л)	5,30±0,47	6,14±0,36	5,74±0,28	5,76±0,51
Мочевина (ммоль/л)	7,35±0,56	6,58±0,32*	6,63±0,41*	6,54±0,28*
Креатинин- (ммоль/л)	115,23±1,20	108,12±2,10	107,32±2,39	104,15±1,09*
Аланина­мино­трансфераза (мкмоль мл.час)	0,90±0,06	0,98±0,07	0,89±0,08	0,93±0,10
Аспартата­мино­трансфераза (мкмоль мл.час)	0,92±0,16	0,94±0,12	1,12±0,05*	0,85±0,23
После отмены
Белок (г/л)	72,20±0,24	73,75±0,30	73,48±0,62	72,83±0,44
Глюкоза - (ммоль/л)	5,47±0,30	6,10±0,20 *	6,12±0,26 *	5,82±0,34
Мочевина- (ммоль/л)	7,42±0,62	7,30±0,82	8,23±0,38	7,38±0,37
Креатинин- (ммоль/л)	116,86±1,69	110,28±1,45	112,14±1,67	111,29±1,28
Аланина- минот- рансфераза (мкмоль мл.час)	0,83±0,09	0,84±0,19	0,82±0,16	0,76±0,15
Аспарта­тамино- трансфераза (мкмоль мл.час)	1,10±0,30	1,12±0,23	1,16±0,09*	1,14±0,26

Примечание: * - P < 0,0

Полученные данные свидетельствуют о позитивном действии Карг-мэза на обмен веществ и функциональную активность внутренних органов (печени, почек, поджелудочной железы).

Анализ проведения функциональной пробы с феноловым красным позволил установить, что как у животных, получавших препараты, так и у интактных животных, концентрация красителя в моче была практически на одном уровне, что свидетельствовало об отсутствии нарушения метаболических процессов в мочевыделительной системе.

На основании наблюдений при применении фитоиммунопрепарата Каргмэз отклонений функциональной активности со стороны сердечно-сосудистой системы не было выявлено. Ритмичность и частота сердечных сокращений находились в пределах физиологической нормы.

При вскрытии контрольных и получавших Каргмэз у 10 % крыс определялись мелкоточечные образования темно-красного цвета, расположенные субплеврально в области правого или левого легкого. Остальные органы грудной и брюшной полости у контрольных и подопытных животных были в пределах физиологоанатомических размеров, а у животных, получавших препараты в субтоксических дозах, несколько гиперемированы. Серозные оболочки были блестящие и гладкие. Патологоанатомических изменений органов и тканей не было выявлено.

Выводы. На основании полученных результатов нами установлено, что при длительном применении фитоиммунопрепарата Каргмэз не оказывает негативного влияния на внутренние органы и ткани животных, их структуру, морфо-биохимический состав крови и основные обменные процессы. Препарат не вызывает местно-раздражающее и аллергизирующее действие.

Список литературы:

1. Гугушвили Н.Н. Иммунобиологическая реактивность коров и методы ее коррекции/ Н.Н. Гугушвили// Ветеринария. 2003. № 12. С. 34-36.
2. Гугушвили Н.Н. Использование фитопрепаратов при иммунодефицитных состояниях крупного рогатого скота/ Н.Н. Гугушвили, И.А. Доми// Сб. науч. тр. КубГАУ. 2007. Вып. 426(454). С. 70-75.
3. Гугушвили Н.Н. Применение фитоиммуностимуляторов телкам/ Н.Н. Гу-гушвили, В.М. Мирцхулава, И.А. Доми// Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии: материалы третьего междунар. симпоз. СПб ГАВМ (11-13 мая 2005 г.). 2005. С. 215-219.
4. Гугушвили Н.Н. Эффективность использования иммуномодуляторов в предродовой и послеродовой периоды у крупного рогатого скота/ Н.Н. Гугушви-ли, В.М. Гугушвили// Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии: сб. материалов четвертого междунар. симпоз. СПб ГАВМ (6-8 мая 2008 г.). 2008. С. 154-156.
5. Кощаев А.Г. Влияние иммуномодуляторов на клеточный иммунитет телок/ А.Г. Кощаев, В.М. Гугушвили// Труды Кубанского государственного аграрного университета. 2014. Вып. 5 (50). С. 129-131.
6. Летягина Е.Н. Значимые и особо опасные заболевания сельскохозяйственных животных/ Е.Н. Летягина, Е.И. Бобкова// Научная жизнь. 2018. № 12. С. 208-215.
7. Лучкин А.Г Инфекционная и инвазионная патология животных - составляющая суммарной их патологии/ А.Г. Лучкин, В.Н. Тиханов, З.С. Кирзон и др.// Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. 2017. № 2. С. 39-44.
8. Федоров Ю.Н. Иммунодефициты крупного рогатого скота/ Ю.Н. Федоров// Ветеринария. 2006. № 1. С. 3-6.
9. Федоров Ю. Иммунодефициты крупного рогатого скота: характеристика, диагностика и пути коррекции/ Ю. Федоров// Ветеринария с.-х. животных. 2009. № 3. С. 4-8.
10. Dmitrieva E.G. Immunomodulators a Vegetative and Animal Origin at Treatment of the Infections caused Staphylococcus aureus/ E.G. Dmitrieva// Transl Med (Sunnyvale). 2016. V. 6 (3). Р. 235-240.
11. Ellis W. A. Animal leptospirosis/ W. A. Ellis// Current topics in microbiology and immunology. 2015. 387. P. 99-137.
12. Fentahun T. Leptospirosis and its public health significance, a review/ T. Fentahun, M. Alemayehu// Europ. J. of Applied Scien. 2012. V. 4 (6). P. 238244.
13. Gotlieb W. H. Immunology of pregnancy/ W. H. Gotlieb// Rev. Med. Bruxelles. 2008. V. 13. 4. P. 97-101.
14. Lin X. Chimeric epitope vaccine against Leptospira interrogans infection and induced specific immunity in guinea pigs/ X. Lin, G. Xiao, D. Luo// BMC Microbiol. 2016. V. 16 (1). P. 241-250.
15. Velikanov V. I. The Level of Metabolic and Immunoligical status of newborn calves under the Action of timogen on the body of down-calving cows/ V. I. Velikanov, A. V. Klyapnev, L. V. Kharitonov// Biosciences biotechnology research ASIA. 2016. V. 13 (2). Р. 1247-1252.
16. Yupiana Y. On-farm risk factors associated with Leptospira shedding in New Zealand dairy cattle/ Y. Yupiana, E. Vallee, P. Wilson// Epidemiol Infect. 2020. P. 1-24.
17. Zmudzki J. First overall report of Leptospira infections in wild boars in Poland/ J. Zmudzki, A. Jablonski, A. Nowak// Acta Veterinaria Scandinavica. 2016. V. 58. P. 1-5.

Резюме. В результате проведенных исследований, нами установлено, что после применения фитоиммунопрепарата Каргмэз не было выявлено отклонений функциональной активности со стороны сердечно-сосудистой системы у животных. Ритмичность, частота сердечных сокращений находились в пределах физиологической нормы. Нарушения метаболических процессов в мочевыделительной системе не выявлены. Препарат оказал позитивное действие на обмен веществ и функциональную активность внутренних органов (печени, почек, поджелудочной железы). Каргмэз стимулирует рост массы тела и внутренних органов в пределах физиологической нормы, что свидетельствует об отсутствии негативного влияния на развитие органов и тканей организма животных. Препарат способствует повышению сегментоядерных нейтрофилов - клеток, регулирующих иммунный ответ. При вскрытии контрольных и получавших Каргмэз у 10 % крыс определялись мелкоточечные образования темно-красного цвета, расположенные субплеврально в области правого или левого легкого. Остальные органы грудной и брюшной полости у контрольных и подопытных животных были в пределах физиологоанатомических размеров, а у животных, получавших препараты в субтоксических дозах, несколько гиперемированы. Серозные оболочки были блестящие и гладкие. Патологоанатомических изменений органов и тканей не было выявлено. При длительном применении фитоиммунопрепарат Каргмэз не оказывает негативного влияния на внутренние органы и ткани животных, их структуру, морфо-биохимический состав крови и основные обменные процессы. Препарат не вызывает местно-раздражающее и аллерги-зирующее действие. По степени токсичности фитопрепарат каргмэз относится к IV классу опасности - вещества малоопасные (ГОСТ 12.1.007-76). Введение препарата лабораторным животным в максимальной дозе (3,0 мл) не вызывает гибели и острой интоксикации, не оказывает отрицательного действия на их общее состояние и поведение. Длительное применение препарата не оказывает негативного влияния на внутренние органы и ткани животных, структуру, морфо-биохимический состав крови и основные обменные процессы. Препарат не обладает местно-раздражающим и аллергизирующим действием.

Ключевые слова: фитоиммунопрепарат, Каргмэз, фармако-токсикологическая оценка, гематологические исследования, биохимические показатели, лабораторные животные, острая и субхроническая токсичность, аллергизирую-щее и местно-раздражающее действие, сердечно-сосудистая система, мочевыделительная система.

Сведения об авторах:

Гугушвили Владимир Малхазиевич кандидат биологических наук, научный сотрудник ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина»; 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13; тел.: 8-918-3295644; e-mail: gugushvili.nino@yandex.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Кощаев Андрей Георгиевич, доктор биологических наук, профессор, академик Российской академии наук, проректор по научной работе ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина»; 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13; тел.: 8-861-2215637; e-mail: kagbio@mail.ru.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей