Оценка эндогенной интоксикации по составу слюны крупного рогатого скота

УДК 619:616-07/616-008.8
DOI 10.33861/2071-8020-2023-1-9-11

Кузьминова Е.В., Абрамов А.А., Семененко М.П. Федеральное государственное бюджетное научное
учреждение «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии», г. Краснодар
Кощаев А.Г., Родин М.И. Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего образования «Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина»,
г. Краснодар

Эндогенная интоксикация — это патофизиологический процесс, характеризующийся образованием и накоплением в организме различных веществ и соединений в избыточных концентрациях или формах, не свойственных нормальному метаболизму, приводящий к запуску катаболических процессов, метаболическим и функциональным расстройствам. При этом данный процесс рассматривается как полиэтиологичный и полипатогенетичный, специфичный по инициирующим факторам, но всегда универсальный по мере развития аутоагрессии [6, 10].

В последние годы одним из приоритетных направлений научных исследований становится расшифровка патогенетических аспектов эндогенной интоксикации как универсального синдромокомплекса, выраженность которого выступает критерием тяжести заболевания и определяет его исход. Однако наряду со специфическими чертами, присущими той или иной нозологической форме заболевания, те, которые протекают с развитием синдрома эндогенной интоксикации, имеют много общих биохимических и патофизиологических механизмов. В изучении проблемы эндотоксикоза актуальными направлениями являются вопросы ранней диагностики и определения степени его тяжести, так как эти данные помогут определять своевременность выбора и тактику лечения, а также прогнозировать исход болезни. Среди широкого круга метаболитов организма, оказывающих токсическое действие, интегральным показателем эндогенной интоксикации является уровень молекул средней массы (МСМ), которые характеризуются общим свойством - молекулярной массой от 300 до 5000 дальтон. Определение оптической плотности исследуемых растворов при разных длинах волн позволяет условно выделить группы МСМ по максимуму поглощения спектров [8, 9, 11].

Поиск неинвазивных методов диагностики привлекает внимание исследователей к изучению состава слюны в норме и при различных патологических состояниях организма. В настоящее время получены убедительные доказательства роли слюны, с одной стороны, в обеспечении общего гомеостаза организма человека, а с другой - её тесной связи с кровью [1, 5]. У крупного рогатого скота научно-практические аспекты использования слюны в качестве биологической жидкости с диагностическим применением в мониторинге состояния здоровья и раннем выявлении заболеваний у животных остаются практически не изученными, особенно это касается маркеров эндогенной интоксикации.

К наиболее часто регистрируемым патологиям у высокопродуктивных молочных коров относятся болезни печени, которые наносят значительный экономический ущерб животноводческим хозяйствам из-за сокращения сроков использования и вынужденной выбраковки животных, снижения продуктивности, негативным влияниям на потомство и др. [2, 3, 4, 7].

С учетом этого цель работы состояла в сравнительной оценке маркеров эндогенной интоксикации в слюне условно здоровых коров и с патологией печени.

Материалы и методы исследования. Исследования проведены на голштинизированных коровах, из которых на основании клинических, биохимических и инструментальных исследований сформировали две группы по 50 животных в каждой: первая группа - условно здоровые коровы; вторая группа - животные с диагнозом «жировой гепатоз».

У коров отбирались пробы нестимулировнной слюны в утренние часы перед кормлением в период покоя жвачки, с учетом отличительной особенности слюноотделения жвачных, связанной с тем, что у взрослых животных околоушные железы секретируют постоянно, независимо от приема корма или жвачки. Предварительно ротовую полость ополаскивали кипячёной теплой водой, далее непосредственно в стерильные шприцы набирали слюну в объеме 3-5 мл.

Поскольку слюна крупного рогатого скота имеет в составе большое количество растительных остатков, которые могут влиять на получение стабильных и объективных биохимических результатов в пробе, было проведено предварительное изучение различных режимов центрифугирования слюны (подбирались время и частота вращения). Проведенные исследования показали, что для отделения супернатанта, пригодного для определения МСМ в слюне крупного рогатого скота, оптимальным режимом является центрифугирование пробы при 4 000 об/мин в течение 20 мин.

Уровень ЭИ у коров изучался по трем фракциям МСМ при длинах волн - Л = 238 нм (МСМ 238), Л = 254 нм (МСМ 254) и Л = 280 нм (МСМ 280). При лабораторном исследовании согласно методике в центрифужную пробирку вносится 1 мл подготовленной на преаналитическом этапе слюны, куда добавляется 0,5 мл трихлоруксусной кислоты. После чего все тщательно перемешивается и через 5 минут центрифугируется при 3 000 об/ мин в течение 30 минут, далее 0,5 мл надосадочной жидкости переносится в пробирку с 4,5 мл дистиллированной воды, перемешивается и спектрофотометрируется в кювете 1 см против дистиллированной воды, результаты выражают в единицах экстинкции (усл. ед.).

Центрифугирование проб проводили на лабораторной центрифуге «ПЭ-6926», для регистрации оптической плотности растворов использован спектрофотометр «Эковью УФ-1100».

Полученные цифровые данные обрабатывались с использованием пакета статистических программ Statistica 10.0.

Результаты исследований и их обсуждение. В результате проведенных исследований установлено, что клинические признаки гепатоза у коров проявлялись общим угнетением, снижением аппетита, жвачки и руминации, тусклостью и взъерошен-ностью волосяного покрова, гепатомегалией при отсутствии болезненности печеночной зоны у большинства животных, примерно у 40% больного скота проявлялась желтушность слизистых оболочек. При ультразвуковом исследовании гепатобилиарной системы у коров с гепатозом установлено следующее: контуры печени ровные с закруглениями, визуализируются неотчетливо, размеры увеличены; эхогенность изменена, преимущественно повышена; увеличено количество эхопозитивных сигналов «светлая печень»; в паренхиме лоцируются немногочисленные гиперэхогенные включения (наиболее вероятно очаги липоматоза); сосудистый рисунок преимущественно не изменен.

Диапазон концентраций фракций МСМ в слюне коров, полученный на основании проведенных лабораторных исследований представлен в таблице 1.

Таблица 1 Диапазон концентраций МСМ в слюне коров (M±m, n=50)

Показатели	Здоровые	Больные гепатозом
МСМ 238, усл. ед.	0,867-1,307	1,115-1,734
МСМ 254, усл. ед.	0,314-0,551	0,311-0,712
МСМ 280, усл. ед.	0,185-0,393	0,324-0,549

Из этих данных видно, что МСМ 238 регистрировались от 0,867 до 1,812 усл. ед., МСМ 254 - от 0,311 до 0,742 усл. ед., МСМ 280 - от 0,185 до 0,549 усл. ед. Следовательно, по концентрации молекулярных маркеров эндогенной интоксикации в слюне коров доминирует нуклеарная фракция - МСМ 238.

Сводные данные концентрации МСМ в слюне крупного рогатого скота по группам представлены на рисунке 1.

Рис. 1. Концентрация МСМ в слюне коров

Анализ полученных результатов показал, что при патологии печени у коров зарегистрировано увеличение всех определяемых в слюне молекулярных маркеров ЭИ при разнице относительно условно здорового поголовья: МСМ 238 - 18,8% (р<0,001); МСМ 254 - 23,1%, (р<0,01); МСМ 280 - 42,9% (р<0,001). Наиболее выражено увеличилось количество продуктов деградации белков, выявляемых при длине волны 280 нм.

Заключение. Систематический анализ содержания метаболитов в слюне - относительно новое направление. Однако к настоящему времени приведено уже достаточно много данных, показывающих, что ротовая жидкость человека функционально эквивалентна плазме крови в отражении физиологических и патологических процессов организма. При этом в ветеринарии научных работ по этому направлению практически не представлено. Проведенными исследованиями показан диапазон регистрируемых концентраций фракций МСМ в слюне условно здоровых коров и с патологией печени. При гепатопатологии у крупного рогатого скота зарегистрировано увеличение содержания всех определяемых в слюне фракций МСМ, при наиболее выраженном повышении МСМ 280. Полученные результаты расширяют перспективы для дальнейшего изучения слюны крупного рогатого скота с целью ранней диагностики и определения степени тяжести эндогенной интоксикации, что позволит применять в практической ветеринарии и клинической биохимии неинвазивные методы исследования при оценке физиологических и патологических процессов в организме крупного рогатого скота.

Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 22-26-20074 (https://rscf.ru/ project/22-26-20074/) и гранта Кубанского научного фонда.

Список литературы:

1. Брещенко, Е. Е. Биохимия полости рта, ротовой и десневой жидкостей: учебно-методическое пособие/ Е. Е. Брещенко, И. М. Быков. -Краснодар, 2018. - 63 с.

2. Гепатопатии животных: монография/ К. А. Сидорова, Е. П. Красно-лобова, Н. А. Череменина [и др.]. - Тюмень, 2019. - 159 с.

3. Клиническая эффективность гепатотропной терапии острого паренхиматозного гепатита коров/ В. А. Гринь, А. А. Абрамов, М. П. Семененко [и др.]// Ветеринария Кубани. - 2020. - № 2. - С. 6-8.

4. Латентные нарушения метаболизма и риск развития патологии крови и печени в транзитный период у коров/ Ю. Н. Алехин, В. И. Моргунова, Л. Н. Каширина, Ю. Е. Суханова// Ветеринарный фармакологический вестник. - 2019. - № 3 (8). - С. 105-116.

5. Неинвазивная диагностика состояния обменных процессов в организме: маркёры ротовой жидкости/ Ю. В. Мякишева, А. В. Колсанов, М. Ю. Власов, А. В. Соколов// Современные проблемы науки и образования. - 2017. - № 5. - С. 14.

6. Пашина, Е. В. Комплекс биохимических показателей в оценке формирования стадий эндогенной интоксикации в клетке/ Е. В. Пашина, М. Л. Золотавина// Современные проблемы науки и образования. - 2019. -№ 6. - С. 200.

7. Семененко, М. П. Клиническая фармакология нового комплексного гепатопротекторного препарата/ М. П. Семененко, М. Н. Соколов, Е. В. Кузьминова// Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета. - 2016. -№ 119. - С. 1077-1088.

8. Сидельникова, В. И. Эндогенная интоксикация и воспаление: последовательность реакций и информативность маркеров (обзор)/ В. И. Сидельникова, А. Е. Черницкий, М. И. Рецкий// Сельскохозяйственная биология. - 2015. - № 50 (2). - С. 152-161.

9. Узбеков, М. Г Эндогенная интоксикация и ее роль в патогенетических механизмах психических расстройств/ М. Г. Узбеков// Социальная и клиническая психиатрия. - 2019. - Т. 29. - № 4. - С. 14-20.

10. Kuzminova E. The spectrum of molecules of medium mass as endogenous intoxication indicator in quails with mycotoxicosis/ E. Kuzminova, E. Dolgov, M. Semenenko, [et al.]// E3S Web of Conferences. Innovative Technologies in Science and Education, ITSE 2020. - 2020. - P. 06010.

11. Massy Z.A. Middle-Molecule Uremic Toxins and Outcomes in Chronic Kidney Disease/ Z.A. Massy, S. Liabeuf. - doi: 10.1159/000479252// Contrib. Nephrol. Basel, Karger. - 2017. - No. 19. - P. 8-17.

Резюме. В последние годы одним из приоритетных направлений научных исследований становится расшифровка патогенетических аспектов эндогенной интоксикации как универсального синдромокомплекса, выраженность которого выступает критерием тяжести заболевания и определяет его исход. В изучении проблемы эндотоксикоза актуальными направлениями являются вопросы ранней диагностики и определения степени его тяжести, так как эти данные помогут определять своевременность выбора и тактики лечения, а также прогнозировать исход болезни. Авторами проведена сравнительная оценка маркеров эндогенной интоксикации, представленных молекулами средней массы (МСМ) в слюне условно здоровых коров и с патологией печени. На основании клинических, биохимических и инструментальных исследований было сформировано две группы коров (n=50): 1 - условно здоровые; 2 - с диагнозом жировой гепатоз. У животных в утренние часы перед кормлением в период покоя жвачки отбирали пробы нестимулировнной слюны, где определяли концентрацию МСМ при трех длинах волн - Л = 238 нм (МСМ 238), Л = 254 нм (МСМ 254) и Л = 280 нм (МСМ 280). Проведенными исследованиями показан диапазон регистрируемых концентраций фракций МСМ в слюне условно здоровых коров и с патологией печени. Установлено, что по концентрации молекулярных маркеров эндогенной интоксикации в слюне коров доминирует нуклеарная фракция - МСМ 238. При гепатопатологии у крупного рогатого скота зарегистрировано увеличение содержания всех определяемых в слюне фракций МСМ, при наиболее выраженном повышении МСМ 280. Полученные результаты расширяют перспективы для дальнейшего изучения слюны крупного рогатого скота с целью ранней диагностики и определения степени тяжести эндогенной интоксикации, что позволит применять в практической ветеринарии и клинической биохимии неинвазивные методы исследования при оценке физиологических и патологических процессов в организме крупного рогатого скота.

Ключевые слова: крупный рогатый скот, коровы, эндогенная интоксикация, молекулы средней массы, лабораторная диагностика, слюна, патологии печени, жировой гепатоз.

Сведения об авторах:

Кузьминова Елена Васильевна, доктор ветеринарных наук, доцент, главный научный сотрудник отдела фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-918-4198369; е-mail: niva1430@mail.ru.

Семененко Марина Петровна, доктор ветеринарных наук, доцент, заведующая отделом фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-918-4612663: е-mail: sever291@mail.ru.

Кощаев Андрей Георгиевич, доктор биологических наук, профессор, академик РАН, проректор по научной работе ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина»; 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13: тел.: 8-861-2214637: е-mail: koshhaev.a@kubsau.ru.

Родин Матвей Игоревич, аспирант ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина»: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13: тел.: 8-918-1181851: е-mail: matvei_rodin12345@mail.ru.

Ответственный за переписку с редакцией Абрамов Андрей Андреевич, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник отдела фармакологии ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии»; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1; тел.: 8-902-4061527; e-mail: abramov1527@mail.ru.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей