rus eng
Архив номеров / Номер 1, 2021 год Распечатать

Эффективность использования реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с сывороткой крови для диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота

УДК 619.616.98.579.841.935.07
DOI 10.33861/2071-8020-2021-1-8-10

Микаилов М.М., Яникова Э.А., Халиков А.А., Гулиева А.Т. Прикаспийский зональный научноисследовательский
ветеринарный институт - филиал ФГБНУ «Федеральный аграрный научный центр Республики Дагестан»,
Республика Дагестан, г. Махачкала
Черных О.Ю. Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего
образования «Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина», г. Краснодар

Введение. Среди инфекционных заболеваний животных бруцеллез занимает одно из первых мест, как по распространению, так и по наносимому ущербу овцеводству.

Характерной особенностью бруцеллеза овец и коз является склонность его к переходу в хроническую, часто латентную форму. При этом в организме животных длительное время сохраняются бруцеллы, которые экскретируются во внешнюю среду, представляя опасность для здоровых животных. Возбудитель бруцеллеза овец и коз Brucella melitensis весьма патогенен для других видов животных. Кроме того, он опасен для человека, поражая суставы, внутренние органы и нередко нервную систему, что часто приводит к инвалидности. Человек чаще всего заражается при контакте с больными животными (оказания помощи при родах, уход и кормление больных животных) или через полученную от них продукцию (мясо, молоко).

Поскольку клинические проявления бруцеллеза мелкого рогатого скота не характерны, традиционно эта инфекция считается хроническим заболеванием, но в современных условиях овцеводства при большой концентрации восприимчивых животных на ограниченной территории и длительном совместном их содержании, бруцеллез может протекать как типичная острая инфекция с быстрым перезаражением восприимчивого поголовья, с ярко выраженной клинической картиной в форме массовых выкидышей или рождения нежизнеспособного молодняка.

Экономический ущерб при бруцеллезе, наносимый хозяйствам, довольно велик. Убытки складываются из потерь приплода, снижения продуктивности скота, яловости овце- и козематок, выбраковки животных, а также больших затрат на проведение ветеринарно-санитарных мероприятий.

В Республике Дагестан, несмотря на большой объем проводимых противобруцеллезных мероприятий, связанных со значительными материальными, трудовыми и финансовыми затратами, эпизоотическая и эпидемиологическая ситуация продолжает оставаться сложной. Особую тревогу вызывает и то, что положительно реагирующие на бруцеллез животные выявляются в ранее оздоровленных хозяйствах или пунктах, считающихся благополучными по данной инфекции. Ежегодно, наряду с оздоровлением одних появляются непрогнозируемые новые неблагополучные пункты. Высокой, по сравнению с другими регионами, продолжает оставаться заболеваемость людей бруцеллезом. Только за 2018 год госпитализировано 134 человека с диагнозом бруцеллез [1].

Проведенный нами анализ результатов работы по борьбе с данной инфекцией за последние 10-15 лет свидетельствует о том, что недостаточно высокая эффективность мероприятий по оздоровлению хозяйств и причины рецидивов этого заболевания связаны не только с нарушениями в проведении организационно-хозяйственных и карантинно-ограничительных мероприятий, но чаще всего они обусловлены тем, что существующая система контроля эпизоотической ситуации из-за недостаточной чувствительности применяемых для массовой диагностики бруцеллеза серологических методов (РА, РСК, РИД), является несовершенной, поскольку эти реакции не выявляют значительный процент больных животных на ранних стадиях после заражения и в свежих случаях инфекции, когда особенно важно своевременное их выделение. Из-за ограниченной возможности существующих методов диагностики, которые не позволяют установить диагноз при однократном исследовании всех больных бруцеллезом овец и коз, зараженные животные длительное время остаются в общих отарах, являясь источником возбудителя инфекции животных и людей. В связи с этим возникает необходимость применения в системе профилактических и оздоровительных противобруцеллез-ных мероприятий для массовых исследований животных наиболее чувствительных и высокоэффективных методов диагностики, таких как РНГА и ИФА [1, 2, 7].

Имеющиеся данные многолетних исследований и результаты производственных испытаний свидетельствуют о том, что РНГА с эритроцитарным антигеном, разработанным Прикаспийским зональным НИВИ, ВГНКИ и ВНИИБТЖ, по диагностической эффективности превосходит широко применяемые в ветеринарной практике серологические методы вместе взятые и выявляет специфические антитела в более ранние сроки после заражения животного возбудителем бруцеллеза [6, 7].

По мнению авторов, тест-система ИФА перспективна для применения в качестве скрининговой при массовых исследованиях животных на бруцеллез, обеспечивая возможность прибегать к классическим методам (РА и РСК) лишь при исследовании проб сывороток крови животных с положительными и сомнительными результатами ИФА [3].

Её использование позволяет сэкономить время, затрачиваемое на проведение исследований, учет и интерпретацию полученных результатов, упростить воспроизводимость этих процессов за счет их инструментального обеспечения.

Исходя из вышеизложенного, научный интерес представляет испытание диагностического значения РНГА с эритроцитарным антигеном в сравнении с ИФА и другими серологическими методами при диагностике бруцеллеза овец и коз [2, 3, 4].

Материалы и методы исследований. С целью испытания диагностического значения РНГА в сравнении с ИФА, РА, РСК, РБП и РИД с О-ПС антигеном при бруцеллезе мелкого рогатого скота исследованиям были подвергнуты 50 проб сыворотки крови из благополучного и 54 пробы из хозяйства, неблагополучного по бруцеллезу овец и коз.

РБП, РА, РСК и РИД ставили согласно «Наставлению по диагностике бруцеллеза животных» (2003 г.) [5].

РНГА - в соответствии с «Инструкцией по применению набора для серологической диагностики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), утвержденной Россельхознадзором (2006 г.) с применением эритроцитарного антигена, изготовленного ООО «Ветмедсервис», РД, г. Махачкала.

Иммуноферментный анализ исследуемых сывороток крови проводили с применением тест-системы ИФА фирмы ООО НПФ «Сиббио-тест» согласно инструкции «Набора диагностического для выявления индивидуальных специфических антител класс G к бактериям рода Brucella в сыворотке (плазме) крови мелкого рогатого скота имму-ноферментным методом (ИФА)».

Результаты исследований и их обсуждение. С целью уточнения специфичности диагностических тестов нами было исследовано 50 проб сывороток крови животных из благополучного по бруцеллезу хозяйства. Во всех случаях получены отрицательные результаты (табл. 1).

Таблица 1 Результаты исследований сывороток крови животных из благополучного хозяйства

Количество исследуемых проб

РНГА с сывороткой крови

ИФА фирма фирмы ООО НПФ «Сиббиотест»

РА

РСК

РБП

РИД

пол

отр

пол

отр

пол

отр

пол

отр

пол

отр

пол

отр

50

 

50

 

50

 

50

 

50

 

50

 

50

В таблице 2 представлены результаты проведенных исследований от 54 голов мелкого рогатого скота из неблагополучного по бруцеллезу хозяйства.

Таблица 2 Результаты исследований сывороток крови животных из неблагополучного хозяйства

РНГА с сывороткой крови

ИФА фирмы ООО НПФ «Сиббиотест»

РА

РСК

РБП

РИД

1:25

1:50

1:100

1:200

1:400

Интерпретация данных

1

-

-

-

-

-

-

0-223

-

-

-

-

-

2

-

-

-

-

-

-

0-196

-

-

-

-

-

3

 

 

+++

++

-

пол

0-673

сом

-

1:20

пол

-

4

-

-

-

-

-

пол

0-677

сом

200

1:40

пол

пол

5

-

-

-

-

-

-

0-174

-

-

-

-

-

6

-

-

-

-

-

-

0-138

-

-

-

-

-

7

-

-

-

-

-

-

0-142

-

-

-

-

-

8

-

-

-

-

-

-

0-111

-

-

-

-

-

9

 

 

 

+++

++

пол

0-731

сом

-

1:5

пол

-

10

 

 

+++

++

-

пол

0-372

сом

-

1:5

-

-

11

-

-

-

-

-

-

0-486

сом

-

1:10

-

-

12

-

-

-

-

-

-

0-190

-

-

-

-

-

13

-

-

-

-

-

-

0-134

-

-

-

-

-

14

-

-

-

-

-

-

0-136

-

-

-

-

-

15

-

-

-

-

-

-

0-130

-

-

-

-

-

16

-

-

-

-

-

-

0-117

-

-

-

-

-

17

 

+++

++

-

-

пол

0-790

сом

-

1-20

-

-

18

-

-

-

-

-

-

0-141

-

-

-

-

-

19

-

-

-

-

-

-

0-167

-

-

-

-

-

20

-

-

-

-

-

-

0-182

-

-

-

-

-

21

-

-

-

-

-

-

0-137

-

-

-

-

-

22

-

-

-

-

-

-

0-248

-

-

-

-

-

23

-

-

-

-

-

-

0-117

-

-

-

-

-

24

-

-

-

-

-

-

0-159

-

-

-

-

-

25

-

-

-

-

-

-

0-127

-

-

-

-

-

26

-

-

-

-

-

-

0-125

-

-

-

-

-

27

-

-

-

-

-

-

0-139

-

-

-

-

-

28

 

 

+++

-

-

пол

0-221

-

-

-

-

-

29

-

-

-

-

-

-

0-180

-

-

1-20

-

-

30

-

-

-

-

-

-

0-114

-

-

-

-

-

31

-

-

-

-

-

-

0-137

-

-

-

-

-

32

-

-

-

-

-

-

0-153

-

-

-

-

-

33

-

-

-

-

-

-

0-141

-

-

-

-

-

34

-

-

-

-

-

-

0-159

-

-

-

-

-

35

-

-

-

-

-

-

0-140

-

-

-

-

-

36

-

-

-

-

-

-

0-123

-

-

-

-

-

37

-

-

-

-

-

-

0-110

-

-

-

-

-

38

-

-

-

-

-

-

0-134

-

-

-

-

-

39

 

 

+++

-

-

пол

0-650

сом

25

-

пол

-

40

-

-

-

-

-

-

0-136

-

-

-

-

-

41

-

-

-

-

-

-

0-187

-

-

-

-

-

42

+++

-

-

-

-

сом

0-485

сом

-

1-5

-

-

43

-

-

-

-

-

-

0-151

-

-

-

-

 

44

-

-

-

-

-

-

0-115

-

-

-

-

-

45

-

-

-

-

-

-

0-189

-

-

-

-

-

46

-

-

-

-

-

-

0-157

-

-

-

-

-

47

-

-

-

-

+++

пол

1-283

пол

-

1-40

пол

-

48

 

+++

++

-

-

пол

0-148

-

50

-

-

-

49

-

-

-

-

-

-

0-146

-

-

-

-

-

50

-

-

-

-

-

-

0-144

-

-

-

-

-

51

-

-

-

-

+++

пол

1-43

пол

-

1-20

пол

-

52

-

-

-

-

-

-

0-152

-

-

-

-

-

53

-

-

-

-

-

-

0-152

-

-

-

-

-

54

+++

-

-

-

-

сом

0-107

-

-

-

-

-

Всего  
положительный 10 2  2 7 6
сомнительный 2 8 1
отрицательный 42 44 54 44  48  53 

Примечание: «пол» - положительная реакция; «сом» - сомнительная реакция; «-» - отрицательная реакция

Как видно из приведенных в таблице 2 данных при исследовании на бруцеллез сывороток крови 54 овец и коз положительно в РНГА в титрах 1:50-1:400 реагировали 10 (18,5%), сомнительно 2 (13,7%) головы. Из них бруцеллез установлен с помощью ИФА у 2 (3,7%), РСК - 7 (13%), РА - 2 (2,37%), РБП - 6 (11,1%) и РИД с О-ПС антигеном у 1 (1,9%) головы. Проведенные исследования показали, что из всех испытанных 6 серологических тестов наиболее чувствительным методом диагностики бруцеллеза овец и коз является РНГА с применением эритроцитарного антигена. Эта реакция по диагностической эффективности значительно превосходила все остальные диагностические тесты, в том числе ИФА. В сравнении с РНГА, ИФА недовыяви-ла 8, РСК - 3, РА - 8, РБП - 4, РИД с О-ПС антигеном - 9 больных бруцеллезом животных.

Заключение. При сравнительном испытании реакции непрямой гемагглютинации с иммуноферментным анализом и другими серологическими методами диагностики установлено, что из всех испытанных тестов наиболее эффективным методом диагностики бруцеллеза овец и коз является РНГА с применением эритроцитарного антигена, разработанного Прикаспийским зональным НИВИ, ВГНКИ и ВНИИБТЖ. Применение этой реакции для исследования сывороток крови мелкого рогатого скота позволило установить бруцеллез в 10 случаях, тогда как ИФА выявила только 2-х больных животных. Наименее чувствительной оказалась РИД с О-ПС антигеном, с помощью которой бруцеллез установлен только в одном случае.

Список литературы:

  1. Годовой отчет Комитета по ветеринарии РД за последние 15 лет. - Махачкала.
  2. Димова А.С. Экспресс-метод массовой диагностики бруцеллеза животных на основе иммуноферментного анализа/ А.С. Димова, А.А. Сизов, С.К. Димов [и др.]// Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2014. - № 4 (239). - С. 84-90.
  3. Димов С.К. Экспресс-диагностика бруцеллеза животных с использованием ИФА/ С.К. Димов, А.С. Димова, А.А. Сизов [и др.]// Методическое пособие. - Новосибирск, 2014. - 21 с.
  4. Захарова О.И. Диагностика бруцеллеза северных оленей методом ИФА на основе моноканальных антител/ О.И. Захарова, Е.С. Слепцов, Н.В. Винокуров [и др.]// Сборник трудов Всероссийского научно-исследовательского института овцеводства и козоводства. - 2015. - Т. 1. - № 8. - С. 420-421.
  5. Наставление по диагностике бруцеллеза. Утв. Департ. вет. МСХ РФ 29.09.2003.
  6. Ромахов Б.Н. Испытание РНГА с эритроцитарным антигеном для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота и овец// Ветеринарная патология. - 2008. - № 1 (24). - С. 73-75.
  7. Юсупов О.Ю. Эффективность РНГА при бруцеллезе крупного рогатого скота, овец и коз/ О.Ю. Юсупов, С.Г. Хаиров, О.Д. Скляров [и др.]// Ветеринария. - 2015. - № 11. - С. 22-25.

Резюме. В нозоологическом профиле инфекционных болезней бруцеллез по распространенности занимает одно из первых мест. Особенностью бруцеллеза мелкого рогатого скота является его склонность к переходу в хроническую и скрытую формы, когда в организме животных долгое время сохраняются бруцеллы, выделяемые во внешнюю среду, являющихся источником инфекции, как для других восприимчивых животных, так и для человека. Анализ результатов борьбы с бруцеллезом животных за последние 10-15 лет свидетельствует, что слабая эффективность мероприятий по оздоровлению хозяйств и новые вспышки заболевания в ранее оздоровленных пунктах связаны не только с нарушением профилактических и карантинно-ограничительных мероприятий, но и обусловлены недостаточной чувствительностью применяемых для массовой диагностики серологических методов. Это подчеркивает необходимость применения новых, более чувствительных и специфических диагностических средств, предполагающих экспресс-тестирования и инструментальный учет результатов, таких как РНГА и ИФА. С целью изучения диагностического значения РНГА с эритроцитарным антигеном, в сравнении с ИФА, при диагностике бруцеллеза овец и коз было проведено испытание этих методов, в сравнении с традиционными (РА, РСК, РИД и РБП). По результатам исследования 54 проб сывороток крови мелкого рогатого скота из неблагополучного хозяйства бруцеллез установлен в РНГА - 18,5 %. Из них положительно реагировали в ИФА - 2,3%, РСК - 13%, РА - 2,37%, РБП - 11,1 и РИД - 1,9% исследуемых животных. Данные проведенных исследований свидетельствуют о высокой специфичности и чувствительности РНГА, что позволяет рекомендовать ее для массовой диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота в качестве дополнительного или альтернативного метода.

Ключевые слова: бруцеллез овец и коз, серологические методы, РНГА, ИФА, РА, РСК, РБП, РИД, эпизоотическая ситуация, диагностическая ценность, экономический ущерб.

Сведения об авторах:

Микаилов Микаил Муслимович, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник Прикаспийского зонального научно-исследовательского ветеринарного института - филиала ФГБНУ «ФАНЦ РД»; 367000, Республика Дагестан, г. Махачкала, ул. Дахадаева, 88; тел.: 8-8722-682702; e-mail: vetmedservis@mail.ru.

Халиков Ахмед Алиасхабович, научный сотрудник Прикаспийского зонального научно-исследовательского ветеринарного института - филиала ФГБНУ «ФАНЦ РД»; 367000, Республика Дагестан, г. Махачкала, ул. Дахадаева, 88; тел.:8-8722-682702; e-mail: vetmedservis@mail.ru.

Гулиева Атия Темирболатовна, младший научный сотрудник Прикаспийского зонального научно-исследовательского ветеринарного института - филиала ФГБНУ «ФАНЦ РД»; 367000, Республика Дагестан, г. Махачкала, ул. Дахадаева, 88; тел.: 8-8722-682702; e-mail: vetmedservis@mail.ru.

Черных Олег Юрьевич, доктор ветеринарных наук, доцент, профессор кафедры микробиологии, эпизоотологии и вирусологии ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина»; 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13; тел.: 8-918-4956659; e-mail: gukkvl50@kubanvet.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Яникова Эльмира Арслановна, старший научный сотрудник Прикаспийского зонального научно-исследовательского ветеринарного института - филиала ФГБНУ «ФАНЦ РД»; 367000, Республика Дагестан, г. Махачкала, ул. Дахадаева, 88; тел.: 8-8722-682702; e-mail: elya_09@mail.ru.

 

 
 
2011 © Ветеринария Кубани Разработка сайта - Интернет-Имидж