Изучение некоторых биохимических показателей крови средиземноморской черепахи никольского (testudo graeca nikolskii, 1986), содержащейся в полувольных условиях сафари-парка

УДК619:616.995.1-081598.132.4

Перетокина Е.И., Лысенко А.А. ФГБОУ ВО "Кубанский государственный аграрный университет", г. Краснодар
Беретарь И.М. ГКУ КСББЖ "Краснодарская", г. Краснодар

На территории Краснодарского края существует целый ряд программ по сохранению краснокнижных видов животных, увеличению их популяций и возвращению этих видов в естественную среду обитания. Такая работа по адаптации и размножению краснокнижных видов проводится в районе Мархотхского хребта (г. Геленджик), где в полувольных условиях содержится краснокнижный вид средиземноморской черепахи Никольского (T. graeca Nikolskii) [1, 2, 4].

Черепахи (лат. Testudines) относятся к наиболее древней группе современных рептилий. Они появились в триасовом периоде, более двухсот миллионов лет назад, и, почти не изменившись, дожили до нашего времени. В ходе эволюции они переходили от наземного к водному образу жизни и, наоборот, возвращались из воды на сушу.

На территории Российской Федерации средиземноморская черепаха Никольского (Testudo graeca Nikolskii) встречается на Кавказе, где ее ареал представлен двумя изолированными участками: один находится на черноморском побережье от Анапы до Сухуми; второй включает Восточную Грузию, Армению. Из долины Аракса в Армении описана армянская черепаха, Testudo graeca Armeniaca Ckhikhvadze et Bakradze, 1991 [1, 13].

Однако, на сегодняшний день численность черепах начала быстро сокращаться в результате резкого увеличения антропогенной нагрузки. Так, состояние подвида T. graeca Nikolskii является крайне неблагополучным. Его ареал существенно сократился и разделен на ряд, вероятно, изолированных популяций, численность которых неуклонно снижается [5, 6].

Основным фактором, негативно влияющим на сохранение средиземноморской черепахи, является деградация мест обитания в результате интенсивного рекреационного использования и хозяйственного освоения территорий в пределах ее ареала [8].

Для предотвращения снижения численности вида были созданы полувольные условия с целью изучения морфологии и физиологии данного краснокнижного вида. Актуальными остаются вопросы кормления черепах с использованием кормовых добавок и пробиотиков, для профилактики заболеваний различной этиологии [11, 12].

Не изучены вопросы, связанные с влиянием внешней среды на иммунный статус, жизненный цикл, развитие, заболеваемость и выживаемость черепахи. Так, актуальными представляются вопросы влияния гельминтов и эктопаразитов, паразитирующих на сухопутной черепахе T. graeca и их воздействие на численность популяции. Не изученными остаются вопросы иммунитета черепах, содержащихся в полувольных условиях Сафари-парка, где необходимо постоянно осуществлять ветеринарно-санитарный контроль за состоянием здоровья черепах на всех стадиях развития.

В доступной нам литературе мы не нашли сведений по изучению биохимических показателей у краснокнижной черепахи Никольского, а также влияния иммунного статуса на плодовитость самок, устойчивость к гельминтозным и паразитарным заболеваниям черепах.

Д.А. Бондаренко указывал, что к паразитам черепахи в большинстве случаев относятся индифферентно. Однако высокая численность гельминтов может способствовать ослаблению организма [3].

Изучение биохимических показателей, которые нужно учитывать при анализе иммунного статуса черепах имеет большое значение при диспансеризации рептилий, содержащихся в полувольных условиях сафари-парков.

Нами изучены такие биохимические показатели как общий белок, щелочная фосфатаза и уровень креатинина, которые варьировали у черепах в широких пределах. Вероятнее всего, эти показатели в большей степени зависят от их возраста, чем от условий, в которых они содержатся. Уровень калия, кальция и фосфора в крови обследованных черепах был более стабильным. В связи с полученными данными необходимо индивидуально контролировать биохимические показатели крови каждой особи и продолжать поиск более наглядных биохимических тестов иммунного статуса черепах.

В связи с вышеизложенным перед нами была поставлена задача изучить основные биохимический показатели крови, а также влияние этих показателей на состояние здоровья черепах.

Материалы и методы. Исследования проведены на базе Геленджикского сафари-парка на группе черепах Никольского, содержащихся в полувольных условиях. Исследования проводили на группе из 18-ти черепах, постоянно проживающих в вольере Сафари-парка (рисунок 1, 2, 3, 4, 5, 6). Состояние здоровья черепах изучали комплексно, учитывали клинические признаки, массу тела, поведение особей, поедаемость корма. Показатели крови черепах изучались на гематологическом анализаторе MindrayBC-2800vet и биохимическом анализаторе StatFax 1904+R. Исследованы такие показатели как гамма-глутамил транспептидаза (ГГТ), лактатдегид-рогеназа (ЛДГ), аспартатаминотрансфераза-(АСТ), мочевина и хлориды.

Обсуждение полученных данных. С 2010 года нами проводятся наблюдения за состоянием данного краснокнижного вида, особенностями поведения и питания, осуществляется мониторинг основных заразных и незаразных заболеваний. Проводятся эксперименты по искусственному выведению черепах в условиях полуволь-ного содержания. Изучается влияние различных антигельминтных и противопаразитарных препаратов на организм черепах [7, 9, 10]. В 2011 году впервые в условиях вольера было получено потомство

средиземноморской черепахи: 2 новорожденных сеголетка. В 2014 году от черепах, содержащихся в вольере по разработанной нами технологии [9, 10], впервые были выведены сеголетки, которые успешно перезимовали. Для получения специального разрешения Министерства природных ресурсов и экологии Российской Федерации на то, чтобы выпускать черепах в естественную среду обитания, необходима гарантия, что животные способны адаптироваться к жизни в естественной среде обитания. С этой целью нами осуществляется строгий ветеринарно-санитарный контроль за состоянием здоровья черепах. В данной статье приводятся данные по результатам исследования биохимических показателей краснокнижного вида - черепахи Никольского. Основная цель программы доведение популяции черепах до такой численности, чтобы их можно было выпускать в естественную среду обитания, не опасаясь за существование этого краснокнижного вида. Одним из факторов лимитирующих размножение черепахи Никольского являются различные заболевания [3, 7, 9]. В полувольных условиях необходимо постоянно осуществлять ветеринарно-санитарный контроль над состоянием здоровья черепах на всех стадиях развития. Для изучения иммунного статуса земноводных проведен анализ таких показателей как гамма-глута-мил транспептидаза (ГГТ), лактатдегидрогеназа (ЛДГ), аспартат-ами-нотрансфераза-(АСТ), мочевина и хлориды.

ЛДГ или лактатдегидрогеназа, фермент, участвующий в процессе окисления глюкозы и образовании молочной кислоты. Лактат (соль молочной кислоты) образуется в клетках в процессе дыхания. ЛДГ содержится почти во всех органах и тканях животных и человека, особенно много его в мышцах. При полноценном снабжении кислородом лактат в крови не накапливается, а разрушается до нейтральных продуктов и выводится. В условиях гипоксии накапливается, нарушает процесс тканевого дыхания. Анализ биохимии крови на ЛДГ проводят для диагностики заболеваний миокарда, печени, опухолевых заболеваний. У черепах в доступной литературе нами не найдено результатов исследований ЛДГ. В связи с этим за норму нами взяты показатели из медицинской практики (норма ЛДГ - до 250 Ед/л).

Увеличение ЛДГ происходит при циррозе печени, инфаркте миокарда и заболеваниях кровеносной системы - анемии, атрофии, заболеваниях почек, злокачественных опухолях различных органов, гипоксиях, анемиях.

ГГТ - это гамма-глутамилтранспептидаза - аномально высокий или низкий уровень может указывать на заболевание костей и печени. Исследования гамма-глутамилтранспептидазы у черепах также не проводилось. Из медицинской практики известно, что нормальный уровень ГГТ находится в диапазоне от 0 до 45 МЕ/л. Тест на определение уровня ГГТ проводится с целью дифференцировать заболевания печени от заболеваний скелета, когда в сыворотке крови уровень щелочной фосфатазы увеличивается.

Аспартатаминотрансфераза (далее, АСТ) - фермент, участвующий в обмене аминокислот. Катализирует перенос аминогруппы от аспарагиновой кислоты на альфа-кетоглутаровую кислоту с образованием щавелевоуксусной кислоты и глутаминовой кислот. Фермент содержится в тканях сердца, печени, скелетной мускулатуры, нервной ткани и почек, в меньшей степени - в поджелудочной железе, селезёнке и лёгких. В эритроцитах аспартатаминотрансфераза содержится в количестве в 10 раз больше, чем в сыворотке.

В доступной литературе нам не удалось найти результатов исследований АСТ у черепах, в связи с этим за основу нормальных показателей нами взяты медицинские показатели - 35-40 МЕ.

Мочевина - осмотически активное вещество, играющее важную роль в механизмах концентрирования мочи. Выводится мочевина преимущественно почками. Уровень её в крови обусловлен соотношением процессов образования и выведения. В клинической диагностике определение мочевины в крови обычно используют для оценки выделительной функции почек. Образование мочевины зависит от характера питания: при преобладании в диете белковых продуктов концентрация мочевины может повышаться до верхних границ нормы, а при растительной диете - снижаться. При патологии печени вследствие нарушения ее синтетической способности уровень мочевины в крови может снижаться. С возрастом уровень мочевины повышается. Уровень мочевины в крови в норме варьирует от 1,8 до 7,5 ммоль/л.

Определение хлоридов в крови назначают для диагностики заболеваний почек. Содержание хлора в организме зависит от баланса процессов: поступления с пищей, распределения в организме и выведения с хлора мочой и калом. Норма хлора в сыворотке крови - 98 - 107 ммоль/л. Значительное повышение уровня хлора крови вызывает следующие патологические состояния в организме: обезвоживание (недостаточное поступление воды в организм), острая почечная недостаточность, алкалоз - заболевание, связанное с повышением уровня щелочных элементов - хлора.

Нехватка хлора в крови организма может развиться на фоне различных нарушений работы организма: ацидоз (заболевание, связанное с повышенным выведением хлора почками с мочой), почечная недостаточность (при полиурии), травмы.

Данные по результатам исследования представлены в таблице 1 и на рисунках 1 и 2.

Таблица 1. Биохимические показатели крови средиземноморской черепахи Никольского (Testudo graeca Nikolskii)

№		Возраст, лет	Мочевина, Ммоль/л	АСТ, МЕ	Хлориды, Ммоль/л	ГГТ1, МЕ/л	ЛДГ, МЕ/л
1		23	0,7	71	73,3	0,5	118
2		24	1,2	69,7	97,1	2,0	165,3
3		45	1,3	86,5	109,9	22,1	237,0
4		23	0,5	31,8	75,5	1,0	390,0
5		24	0,8	58,0	97,4	1,6	318,0
6		33	0,8	79,3	92,6	1,5	289,0
7		33	0,9	51,3	85,3	16,7	265,0
8		24	1,6	61,8	93,4	18,6	247,0
9		33	0,4	40,4	103,1	1,4	390,0
10		24	1,2	28,0	89,3	1,2	146,0
11		24	0,6	50,7	93,2	1,5	142,9
12		34	0,9	47,7	101,8	1,0	269,0
13		33	1,5	41,4	99,1	1,8	390,0
14		30	0,7	61,1	139,2	1,7	163,8
15		36	0,7	86,2	78,4	12,6	311,7
16		25	1,3	54,0	125,8	0,7	239,3
17		23	1,6	52,6	98,3	1,7	253,8
18		24	1,3	20,0	90,5	1,2	198,0

Рис. 1. Уровень мочевины и ГГТ1 в сыворотке крови средиземноморской черепахи Никольского

Рис. 2. Уровень ACI, АД1 и хлоридов в сыворотке крови средиземноморской черепахи Никольского

Как видно из представленных данных такой показатель как мочевина в крови у всех обследованных черепах (n = 18) варьировал от 0,5 до 1,6 ммоль/л. Этот разброс показателей можно принять за норму у черепах и использовать его при характеристике функционального состояния почек. Известно, что при белковом типе кормления животных концентрация мочевины может повышаться до верхних границ нормы, а при растительной диете - снижаться. Уровень мочевины у исследуемых черепах показывает, что черепахи в полувольных условиях питаются растительной пищей.

Показатель гамма-глутамилтранспептидазы, как видно из данных таблицы 1 и рисунка 1 находится у всех обследованных черепах в пределах физиологических норм (n = 0 - 45 МЕ/л). Однако, у 4-х черепах (№ 3, № 7, № 8 и № 15) он превышал показатели по исследуемой группе в 20 и более раз. Необходимо провести дополнительные исследования функционального состояния этих черепах, чтобы исключить у них заболевание костей или печени. Данный показатель необходимо использовать при проведении диспансеризации черепах, содержащихся в полувольных условиях сафари-парков.

Показатели аспартатаминотрансферазы обследованных черепах представлены в таблице 1 и на рисунке 2. Они варьируют от 20,0 до 86,5 МЕ, при норме 35-40 МЕ. Таким образом, у черепах (№ 2, № 3, № 6 и № 14) выявлено практически двукратное превышение нормы данного фермента в сыворотке крови - 69,7 МЕ, 86,5 МЕ, 79,3 МЕ и 86,2 МЕ, соответственно. Необходимо провести дополнительные исследования черепах, для контроля функционального состояния печени рептилий. Показатель аспартатаминотрансфераза (АСТ) также необходимо учитывать при контроле биохимических показателей сыворотки крови черепах, который характеризует функциональное состояние печени.

Анализ биохимии крови на лактатдегидрогеназу (ЛДГ) проводят для диагностики заболеваний миокарда, печени, опухолевых заболеваний. Проведение анализов на ЛДГ помогает вовремя выявить многие заболевания сердца, печени, почек и мышц, однако анализ требует максимальной точности. Как отмечалось ранее, увеличение ЛДГ происходит при циррозе печени, инфаркте миокарда и заболеваниях кровеносной системы. Из данных таблицы 1 и рисунка 2 видно, что показатель ЛДГ находится у большинства обследованных черепах в пределах физиологических норм (до 250 МЕ/л). Тем не менее, у 5 из 18 обследованных (27,8%) показатель лактатдегидрогеназы выше нормативного от 24% до 56%. Следовательно, необходимо провести дополнительное исследование печени и сердечно-сосудистой системы у черепах (№ 4, № 5, № 9, № 13 и № 15). Показатель ЛДГ также необходимо учитывать при контроле биохимических показателей сыворотки крови черепах, который характеризует функциональное состояние печени и сердечно-сосудистой системы.

Определение хлоридов в крови назначают для диагностики заболеваний почек. Содержание хлора в организме зависит от баланса процессов: поступления с пищей, распределения в организме и выведения с хлора мочой и калом. Норма хлора в сыворотке крови - 98 - 107 ммоль/л. Значительное повышение уровня хлора крови вызывает обезвоживание и острую почечную недостаточность, алкалоз. Из данных таблицы 1 и рисунка 2 видно, что показатель хлоридов находится у большинства обследованных черепах в пределах физиологических норм - 98-107 ммоль/л. Только у черепах (№ 14, № 16) этот показатель выше нормы на 18,8 ммоль/л и 32,2 ммоль/л, соответственно. Это указывает на то, что у данных двух особей выявлены признаки почечной недостаточности.

Рис. 1. Средиземноморская черепаха Никольского (Testudo graeca Nicolskii, 1986) Рис. 2. Опытная группа черепах (n=18) в вольере Геленджикского сафари-парка Рис. 3. Кладка яиц Рис. 4. Вылупление черепашат Рис. 5. Маленькая черепашка Рис. 6. Обработка черепах от эктопаразитов

Заключение. В связи с полученными данными необходимо индивидуально контролировать биохимические показатели крови каждой особи, а все перечисленные показатели - гамма-глутамил транспептидазу (ГГТ), лактатдегидрогеназу (ЛДГ), аспартат-аминотран-сферазу-(АСТ), мочевину и хлориды необходимо использовать при диспансеризации краснокнижной черепахи Никольского, содержащейся в полувольных условиях сафари-парка для контроля за состоянием здоровья этого редкого вида рептилий.

Список литературы

1. Ананьева Н.Б., Орлов Н.Л. Атлас пресмыкающихся Евразии. - Спб. - 2004. - с.232.
2. Ананьева Н. Б., Мильто К. Д., Островских С. В., Пестов Г. М., Пестов М. В. Проект по изучению и охране средиземноморской черепахи (Testudo graeca Nikolskii^ Западном Кавказе — первые итоги и перспективы // Вопросы герпетологии. Материалы Ill съезда Герпетологического общества им. А. М. Никольского, 9-13 октября 2006 г., Пущино-на-Оке. С.пб.: [б. и.], 2008. С. 25-30.
3. Бондаренко Д.А. Взаимоотношения Среднеазиатской черепахи (Agrionemys horsfieldii ) с паразитами в природе. /Д.А. Бондаренко // Зоологический журнал, 2015,том 94, №7, с. 801-815
4. Галлямов Р.Р., Леонтьева О.А. Биотопическое распределение средиземноморской черепахи (Testudo graeca nikolskii) на северо-восточном побережье Черного моря // Природа полуострова Абрау (ландшафты, растительность и животное население). М.: МГУ, 2000. С. 92-99.
5. Леонтьева О.А., Пестов М.В., Перешкольник С.Л. Современное состояние и проблемы охраны Testudo graeca nikolskii на северо-западе ареала // Вопросы герпетологии. Материалы Пятого съезда Герпетологического общества им. А.М. Никольского. -Минск. - 2012. - С.155-159.
6. Леонтьева О.А., Сидорчук Е.А. Состав популяции и морфологические характеристики средиземноморской черепахи на полуострове Абрау. Биоразнообразие полуострова Абрау: Сб. науч. тр. М.: Изд-во МГУ. -2002. - С. 90 - 98.
7. Лысенко А.А., Перетокина Е.И., Пономаренко Ю.Ю. Черепаха Никольского TESTUDOGRAECA (NIKOLSKII,1986) : гельминтозы, их профилактика и лечение в условиях полувольного содержания / А.А.Лысенко, Е.И. Перетокина, Ю.Ю. Пономаренко // В сб.научных трудовСКНИИЖ по материалам 8-й научно-практической конференции "Научные основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных". -Краснодар, 2015.-с.172-175.
8. Пестов М.В., Маландзия В.И., Мильто К.Д. и др. Средиземноморская черепаха Никольского (TestudograecaNikolskii) в Абхазии//Современная герпетология. - 2009. - Том.9. - Выпуск1/2. - С.41-51.
9. Перетокина Е.И. Ветеринарные аспекты сохранения краснокнижного вида черепах TESTUDO GRAECA (NIKOLSKII,1986) / Е.И. Перетокина //-В сб.: Материалы 3-й Международной конференции "Современные проблемы ветеринарии и животноводства".-Краснодар,2015г.-с.167-175.
10. Перетокина Е.И., Лысенко А.А. Лечение и профилактика гельминтозов средиземноморской черепахи Никольского TESTUDO GRAECA (NIKOLSKII,1986)/Е.И. Перетокина, А.А. Лысенко //-В сб.: Материалы 3-й Международной конференции "Современные проблемы ветеринарии и животноводства". -Краснодар, 2015 г. -с.175-182.
11. Перспективы использования микробиологических препаратов / И. В. Щукина, А. В. Степовой, В. В. Борисенко, В. И. Николаенко // Молодой ученый. - 2015. — № 5-1 (85). — С. 25—28.
12. Пробиотическая кормовая добавка с антибиотическими свойствами для птицеводства / С. А. Волкова, А. В. Степовой, В. В. Борисенко, В. И. Николаенко // Молодой ученый. — 2015. — № 5-1 (85). — С. 4—6.
13. Туниев Б.С. Пресмыкающиеся Reptilia/ Б.С.Туниев// В кн. Красная книга Республики Адыгея. Майкоп, 2000.-с.313-320

Резюме. Впервые нами изучены такие биохимические показатели крови краснокнижного вида черепахи Никольского (Testudo Graeca Nikolskii, 1986) содержащегося в полувольных условиях, как гамма-глутамил транспептидаза (ГГТ), лактатдегидрогеназа (ЛДГ), аспартат-аминотрансфераза (АСТ) мочевина и хлориды. У 4-х черепах из 18 обследованных (22,2%) выявлено практически двукратное превышение нормы АСТ в сыворотке крови. Результат биохимических исследований говорит о нарушении функционального состояния печени рептилий. Показатель хлоридов находится у большинства обследованных черепах в пределах физиологических норм - 98 - 107 ммоль/л. Однако у 2-х черепах (11,1%) этот показатель выше нормы на 18,8 ммоль/л и 32,2 ммоль/л соответственно, что позволяет выявить признаки почечной недостаточности. У 5 из 18 обследованных (27,8%) черепах показатель лактатдегидрогеназы (ЛДГ) выше нормативного от 24% до 56%. Это дает основание констатировать у этих рептилий заболевания печени и сердечно-сосудистой системы. Показатель ГГТ-гамма-глутамил транспептидазы, находился у всех обследованных черепах в пределах физиологических норм (n= 0 - 45МЕ/л). Однако, у 4-х черепах (22,2%) он превышал показатели по исследуемой группе в 20 и более раз. Это дает основание провести дополнительные исследования функционального состояния этих черепах, чтобы исключить у них заболевания костей или печени. Такой показатель как мочевина в крови у всех обследованных черепах (n-18) варьировал от 0,5 до 1,6 ммоль/л. Этот разброс показателей можно принять за норму у черепах и использовать его при характеристике функционального состояния почек. В связи с полученными данными необходимо индивидуально контролировать биохимические показатели крови каждой особи, а все перечисленные показатели - гамма-глутамил транспептидазу (ГГТ), лактатдегидрогеназу (ЛДГ), аспартат-аминотрансферазу-(АСТ), мочевину и хлориды необходимо использовать при диспансеризации краснокнижной черепахи Никольского, содержащейся в полувольных условиях сафари-парка, для контроля за состоянием здоровья этого редкого вида рептилий.

Ключевые слова: черепаха Никольского, краснокнижный вид, сафари-парк, биохимические показатели, гамма-глутамил транспептидаза (ГГТ), лак-татдегидрогеназа (ЛДГ), аспартатаминотрансфераза-(АСТ), мочевина, хлориды, диспансеризация

Сведения об авторах:

Перетокина Елена Ивановна, аспирант кафедры терапии и фармакологии ФГБОУ ВО "Кубанский государственный аграрный университет"; 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13; тел.: 8-861-221-58-20; e-mail: safari-park-gel@ yandex.ru.

Беретарь Инна Муратовна, кандидат ветеринарных наук, начальник отдела противопаразитарных и ветеринарно-санитарных мероприятий ГКУ КСББЖ "Краснодарская"; 350004, г. Краснодар, ул. Калинина, 15/1; тел.: 8-861-22162-39; e-mail: bertarinna@gmail.com.

Ответственный за переписку с редакцией: Лысенко Александр Анатолиевич, доктор ветеринарных наук, профессор кафедры терапии и фармакологии ФГБОУ ВО "Кубанский государственный аграрный университет"; 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13; тел.: 8-861-221-58-20; e-mail: vet.kubgau@mail.ru.

	Полезные ссылки
Департамент ветеринарии Краснодарского края Ассоциация Практикующих Ветеринарных Врачей