Морфологическая структура органов иммунной системы и ответная ре

Александрова С. С.  СГАУ им. Н.И. Вавилова., г. Саратов

В условиях современного животноводства, актуальной остается проблема иммунодефицитов животных, особен­но молодняка.

Иммунодефицитами считают нарушения нормального им­мунологического статуса, обусловленные дефектом одного или нескольких механизмов иммунного ответа. В зависимости от уровня нарушений различают гуморальные клеточные и комби­нированные формы иммунодефицитов. По происхождению раз­личают врожденные (первичные), приобретенные (вторичные) и возрастные (физиологические).

Наибольшее практическое значение имеют приобретенные иммунодефицитные состояния [2. 6. 8]. Бактериальные и вирус­ные инфекции могут быть как следствием, так и причиной вторич­ных иммунодефицитов. При острых инфекционных заболеваниях, прежде всего, страдает Т-система иммунитета со снижением реп­родукции Т-хелперов. нарушением дифференцировки популяций, снижением гиперчувствительности замедленного типа. В меньшей степени поражается В-система. При развитии инфекции на фоне уже имевшегося иммунодефицита показатели иммунного статуса снижаются до минимума, заболевание приобретает тяжелое тече­ние с нередким летальным исходом.

Фармакологические вещества так же индуцируют иммуносупрессию. Антибиотики и сульфаниламиды, такие как хлорамфеникол. сульфаметоксипиридазин. клиндамицин. линкомицин. гризеофульвин. интенсивно применяемые при лечении, вызывают дисбактериозы. что также приводит к развитию иммунодефицитов [1].

Иммунодефицитные состояния в совокупности с загрязнени­ем внешней среды микроорганизмами способствует нарушению взаимоотношений между макро- и микроорганизмами, что приво­дит к развитию различных заболеваний и в частности желудочно-кишечного и респираторного тракта и др. Снижение иммунологи­ческой реактивности так же оказывает влияние на эффективность специфической профилактики инфекционных болезней. [6]. Сни­жается эффективность вакцинирования, что также приводит к до­полнительным затратам [9].

Применение современных средств иммунокоррекции в жи­вотноводстве позволяет повысить эффект традиционной терапии, значительно снизить заболеваемость и смертность животных, и тем самым уменьшить затраты на лечение и повысить экономи­ческую эффективность производства [6].

В настоящее время существует большое количество иммуно-коррегирующих препаратов, которые по химической структуре и биологическим свойствам можно разделить на несколько групп. В том числе микробного происхождения (продигиозан, пирогенал, Рибомунил, ликопид, бронхомунал, имудон), тимические препара­ты (т-активин, тимопоэтин, тимоген), костномозговые регуляторы (миелопид и др.), цитокины (лейкинферон, суперлимф), производ­ные нуклеиновых кислот (полудан, инозин, анобекс, метилурацил, натрия нуклеинат, риботан) [7].

Натрия нуклеинат, представляет собой натриевую соль низ­комолекулярной РНК. Его активным биологическим компонентом являются нуклеотиды Препарат по своему химическому составу мало чем отличается от эндо - и экзогенных нуклеиновых кислот, обычно присутствующих в организме, в связи с чем, при его при­еме моделируются некие естественно возникающие ситуации.

С лечебной целью препараты РНК использовались еще с кон­ца прошлого столетия, и уже в первом десятилетии XX века они ста ли применяться при инфекционных заболеваниях, авитаминозах, нарушениях обмена веществ. Однако скоро об РНК забыли. Инте­рес к препаратам рибонуклеиновой кислоты в нашей стране сно­ва возник в 70-х годах. Было разрешено применение нуклеината натрия в медицинской практике, а также его промышленное про­изводство в латвийском городе Олайне Однако с распадом СССР НПО "Биолар", где производился препарат, закрылось.

ЗАО "Ветзвероцентр" совместно с ЗАО "Биоамид" разрабо­тали новый способ получения субстанции препарата гидролизом хлебопекарских дрожжей Sarcchomyces cerevisiae. Процесс полу­чения препарата стал включать специальную стадию ферментной очистки от белковых примесей, чего ранее не было.

Поданным ряда авторов [4. 6], ранее производимый НПО "Биолар- препарат обладает широким спектром биологической ак­тивности. Стимулирует лейкопоэз, процессы регенерации, функци­ональную активность нейтрофилов, усиливает антиинфекционную устойчивость организма, повышает функциональную активность Т-хелперов и Т-киллеров, пролиферацию клеток и синтез антител, является выраженным индуктором интерферона.

В результате разработки нового способа получения натрия нуклеината встал вопрос о детальном изучении влияния данного препарата на иммунный статус различных видов животных, и в том числе свиней. Нам представилась возможность в полной мере изучить влияние натрия нуклеината производимого ЗАО "Биоамид" на организм свиней, а именно поросят.

Материалы и методы исследования. Эксперимент прово­дился на поросятах 3 месячного возраста. По принципу аналогов были сформированы 2 группы по 5 голов. Эксперимент продол­жался в течение 21 дня. Опытной группе вводили натрия нуклеинат в дозе 1.0 мл 0.2% раствора внутримышечно, на первый день опыта, вторая являлась контрольной. Кровь исследовали в начале эксперимента для получения исходных данных, а также на 7.14 и 21 дни эксперимента. Для этого применяли утвержденные методи­ки по оценке иммунного статуса. После окончания эксперимента провели диагностический убой для выявления морфологических изменений в иммунных органах.

Результаты исследований и обсуждение. Учитывая, что морфологическая структура органов и тканей иммунной системы является важным показателем становления клеточной и гумо­ральной системы защиты организма, мы посчитали необходимым изучить структуру лимфатических узлов, селезенки, пейеровых бля­шек кишечника. Также исследовались печень и мозг для изучения токсического влияния препарата на организм животных.

При гистологическом исследовании в лимфоузлах животных контрольной группы (рис.1) выявлены изменения характерные для иммунодефицитныхсостояний. Отмечена гипоплазия лимфоидной ткани. Фолликулы уменьшены в размере. Нет четкой границы между зонами Т и В лимфоцитов. В центре фолликулов отмечается разрешение клеток. Синусы лимфоузлов расширены, наблюдается отек стромы.

В лимфоузлах животных опытной группы (рис. 2) отмечено увеличение количества лимфофолликулов, в которых наблюдается выраженная гиперплазия. Границы их четкие, хорошо заметны зоны Т и В лимфоцитов. Клетки хорошо воспринимают окраску гематоксилин-эозином. Хроматин ядер окрашен в густой темно-фиолетовый цвет. Это свидетельствует о повышении иммунного статуса под влиянием препарата.

В антителообразовании особое значение имеет белая пульпа селезенки. В селезенке животных опытной группы (рис. 3) наблю­дается значительное увеличение лимфоидных фолликулов в поле зрения микроскопа. Все они имеют четкую границу. В фолликулах четко видны зоны Т и В лимфоцитов. Клетки лимфофолликулов хо­рошо восприняли краску и поэтому четко различаются по архитек­тонике. Среди клеток лимфоидного ряда выявляются крупные клет­ки - мегакариоциты. Пролиферация клеток захватывает и строму селезенки. Увеличена красная пульпа селезенки в виде повышен­ного кровенаполнения. Все это говорит об активизации функций селезенки как иммунного органа.

В селезенке животных контрольной группы (рис. 4) боль­шинство фолликулов уменьшены в объеме, их центры находятся в состоянии разрежения, во многих отмечается некроз клеточ­ных элементов переходящий в некробиоз. Это говорит об имму-нодефицитном состоянии.

Кишечник, а точнее пейеровы бляшки, расположенные в подслизистом слое играют немаловажную роль в формировании иммунного ответа. У животных опытной группы (рис. 5) видна бо­лее четкая структура всех слоев стенки кишечника. Строение же­лезистого аппарата кишечника выражено более четко, чем у поро­сят контрольной группы. Пейеровы бляшки увеличены в размере, наблюдается усиление процесса гиперплазии. Наряду с этим уве­личено количество лимфоидных клеток. Клетки лимфоидного ряда выходят за границы бляшек, скапливается в подслизистом слое кишечника, захватывая и слизистую оболочку. Все эти признаки говорят об усилении иммунных процессов под действием иммуномодулятора.

В кишечнике животных контрольной группы (рис. 6) лимфо-фолликулы не имеют четких границ. Пейеровы бляшки увеличены в размере, наблюдается усиление процесса гиперплазии. Границы их расширены, клетки лимфоидного ряда выходят за границы бля­шек, скапливаясь в подслизистом слое кишечника, захватывая и слизистую оболочку.

Иммуностимулятор, как и любой лекарственный препарат, помимо положительного влияния не должен оказывать отрицатель­ного действия на организм животного. В связи с этим, мы изучили влияние препарата на такие жизненно-важные органы, как пе­чень и головной мозг.

Структура ткани головного мозга (рис. 7) четко выражена. Встречается пролиферация лимфоидных клеток внутри кровеносных сосудов. В отдельных участках наблюдается пролиферация глиальных клеток. Возможно эти изменения возникают как усиление иммунной реакции у поросят под влиянием препарата.

В печени животных опытной группы (рис. 8) отмечается нор­мальное балочное строение, меньше участков мутного набуха­ния гепатоцитов. Границы клеток печени обозначены четче, чем в контрольной группе. По ходу стромы стало больше лимфоидных клеток Никаких дистрофических и некробиотических изменений не выявлено Заметно повышение желчеобразовательной функции печени Клетки печени хорошо воспринимают окраску.

Результаты изучения морфологической структура органов иммунной системы животных после применения натрия нуклеина­та подтверждают, что под действием препарата происходит актив­ное становление иммунной системы. Кроме того, исследование гистологического строения печени и мозга доказывает отсутствие токсического действия препарата на организм животных.

Важную роль в иммунных реакциях играют лимфоциты, ко­торые посредством клеточных рецепторов распознают антигены. Поэтому их называют антигенреактивными, или иммунокомпетентными, клетками.

Многообразие функций, которые выполняют Т-лимфоциты в рамках реализации иммунного ответа организма связано с существованием различных субпопуляций Т-лимфоцитов, "за­программированных" на выполнение конкретной функции при формировании иммунных реакций. Иммунокомпетентные клетки находятся в определенном кооперативном взаимодействии Фун­кцию обеспечения иммунокомпетентности лимфоидных клеток и регуляции функции В- системы выполняет Т- система.

Очевидна необходимость изучения реакции Т-клеток на различные медикаментозные препараты, используемые в насто­ящее время клиникой в качестве иммуномодуляторов. для объек­тивизации их назначения в каждом конкретном случае. Т-активная субпопуляция представляет собой преимущественно клетки, несущие супрессорную функцию (есть исследования, характери­зующие их и как клетки-помощники).

Теофиллинчувствительные клетки представлены субпопуляцией супрессоров а теофилли-нустойчивые — клетками-помощниками. Т-клетки, образующие розетки с аутоэритроцитами, как полагают, несут киллерную функцию и играют основную роль в механизмах аутоагрессии. В  лимфоциты, ответственны за синтез и секрецию различных изотипов иммуноглобулинов. Мигрируя в периферические лимфоидные органы они расселяются в тимуснезависимых, или В - зонах. Такими зонами являются мозговой и герминативный центры лимфатических узлов, периферический слой лимфатичес­ких фолликулов, перифолликулярная область и красная пульпа селезенки групповые лимфатические фолликулы. В-лимфоциты являются предшественниками антителообразующих (плазмати­ческих) клеток, которые после антигенной стимуляции секретиру-ют молекулы антител специфически реагирующих с антигенны­ми детерминантами.

Проведенные исследования количества Т и В лимфоцитов в крови животных показывают, что количество Т лимфоцитов (рис. 9) в опытной группе несколько снизилось на 7 день опыта, однако на 14 день наблюдалось повышение на 13 %. На 21 день их уро­вень составил 44.00±4 82 109/л., что в 1-3 раза выше показате­лей контрольной группы.

Рис.9. Тлимфоциты, 10/л

Количество В лимфоцитов (рис. 10) так же снижалось на 7 день исследования в обеих группах, но затем возросло, достигнув максимального значения в крови животных опытной группы на 21 день опыта составив 26.20±2.18 109/л.

Рис.10. В лимфоциты, 10/л

Таким образом на основании проведен­ных исследований мы пришли к выводу, что натрия нуклеинат способствует увеличению количества Т- лимфоцитов в 1,8 раза. В- лим­фоцитов соответственно в 3,2 раза. Результаты изучения морфологической структуры органов иммунной системы, подтверждают, что препа­рат стимулирует активное становление имму­нологической устойчивости организма.

Применение данного препарата порося­там позволяет повысить иммунологическую устойчивость организма кинфекциям. вызван­ным патогенной и условно-патогенной микрофлорой, и тем самым снизить заболеваемость животных и повысить их сохранность.

Список литературы

1. Бочкарев В.Н.. Иванов В.И.. Кузьменков И.И. и др. При­обретенные иммунодефицитные состояния у КРС в зоне экологи­ческого неблагополучия // Ветеринарная патология - N° 2 - 2003.- С. 8 -14.
2. Золотарева.НА. Иммунодефициты: профилактика и борь­ба с ними // Ветеринарная патология. - 2003. - N° 2. - С. 55 - 56.
3. Мищенко В.А.. Кононов А.В.. Мищенко В.А. Влияние фи­зиологического и иммуно-биологического статуса крупного рогато­го скота на уровень поствакционного иммунитета. // Ветеринария Кубани N°2 - 2008 С. 12-13
4. Соловьева Т.Е. Метод повышения эффективности вак­цинации убитой вакциной про-тив сальмонеллеза с применением натрия нуклеината // Ветеринарная патология - 2003. - N°1 С. 15-18
5. Федоров Ю. Н. Иммунокоррекция: применение и меха­низм действия иммуномодулирующих препаратов// Ветеринария- 2005.- N°3 - С.15-18.
6. Федоров ЮН. Иммунокоррекция приминение и меха­низм действия иммуномодулирующих препаратов // Ветеринария 2005 N°2
7. Хаитов P.M.. Пинегин Б.В. Основные принципы иммуно-модулирующей терапии/ P.M. Хаитов. Б.В. Пинегин // Аллергия, астма и клиническая иммунология. 2000. N° 1. 9-16.
8. Хлопицкий В. П.. Хмылов А. Г. Основные иммунодефици­ты свиней и средства борьбы с ними // Промышленное и племен­ное свиноводство - N°5.-2006 С. 37-39
9. Шахов А. Г.. Масьянов Ю. Н.. Бригадиров Ю. Н. и др. При­менение иммуномодуляторов при вакцинации животных против сальмонеллеза// Вете-ринария - 2006. - N°6 - С. 21-26

Реферат

Нами изучено влияние иммуномодулятора натрия нукле­ината на иммунологическую систему защиты организма поросят. Результаты эксперимента позволяют сделать вывод, что натрия нуклеинат оказывает стимулирующее действие на факторы кле­точного иммунитета.

Ключевые слова: иммунобиологическая система, иммуно­дефицит иммуномодуляция, иммуностимуляторы, натрия нукле­инат, свиньи.

Summary

We have studied influence of natrn nucleinate on immune system of pigs. Our researches have shown, that natrii nucleinate improves cellular factors of immunity.

Key words: immunobiological system, immunodeficiency, immunomodulation, Immunostimulation, natrii nucleinas, pigs.

Сведения об авторе

Ответственный за переписку с редакцией: Александрова Светлана Сергеевна аспирант кафедры "Морфология и патоло­гия животных" СГАУ им. Н.И. Вавилова. 410005 г. Саратов ул. Соколовая, 335 т. 8 (8452) 69-25-31; svetavlad66@yandex.ru. т.8 917 3140485