УДК 619:616.9-092.9:615.281.8:639.3.09
DOI 10.33861/2071-8020-2023-6-29-31
Щелкунова Ю. П., Кропочева И. Ю., Рекордатова С. А. Филиал по пресноводному рыбному хозяйству Федерального
государственного бюджетного научного учреждения «Всероссийский научноисследовательский
институт рыбного хозяйства и океанографии» Федерального агентства по рыболовству,
Московская область
Герпесвирусная болезнь сибирского осетра в настоящее время является единственной вирусной болезнью осетровых рыб, установленной в нашей стране, которая наносит большой ущерб осетровым предприятиям и приводит к гибели до 90% поголовья молоди рыб [1]. Интенсификация аквакультуры, связанная с повышением плотностей посадки и температуры выращивания гидробионтов, а также неконтролируемые перевозки икры и посадочного материала, приводят к возникновению и распространению вирусных болезней, лечение которых в настоящее время не разработано. В связи с этим разработка мер профилактики и борьбы с вирусными заболеваниями рыб является весьма актуальной. Противовирусный препарат Ацикловир -синтетический аналог ациклического пуринового нуклеозида - обладает высоким избирательным действием на вирусы герпеса и вместе с тем - низкой токсичностью для организма [2].
Целью данной работы было определить возможность использования ацикловира для лечения герпесвирусной болезни у молоди сибирского осетра.
Материалы и методы исследований. В эксперименте использовали сеголетков сибирского осетра (возраст 6 мес., средней массой 100 г). Заражение 40 экземпляров рыб проводили методом ванн. Для этого рыб помещали в емкость с аэрируемой водой, в которую была внесена вируссодержащая культуральная жидкость (герпесвирус сибирского осетра (SbSHV), штамм SK 1/0406) до конечной концентрации 104 ТЦД50/см3 воды. Время экспозиции составило 1 час с поддержанием температуры воды в пределах 15-16°С. После заражения рыб разделили на две группы: группу положительного контроля (20 экз.) и опытную группу (20 экз.).
Группу рыб отрицательного контроля (20 экз.) и группу контроля токсичности препарата (20 экз.) обрабатывали аналогичным образом, но вместо вируссодержащей культуральной жидкости в воду вносили культуральную жидкость незараженной культуры клеток WSS-2. Все группы рыб кормили комбикормом для осетровых видов рыб два раза в сутки (табл. 1).
Таблица 1 Схема постановки эксперимента
| № п/п | Группа | Обработка | Кормление |
|---|---|---|---|
| 1 | Отрицательный контроль | Часовая экспозиция в культуральной жидкости неза- раженной культуры клеток WSS-2 | Осетровый комбикорм 2 раза в сутки |
| 2 | Положительный контроль | Часовая экспозиция в вируссодер- жащей культуральной жидкости (SbSHV) | Осетровый комбикорм 2 раза в сутки |
| 3 | Контроль токсичности препарата | Часовая экспозиция в культуральной жидкости неза- раженной культуры клеток WSS-2 | Осетровый комбикорм 2 раза в сутки с добавлением ацикловира в дозе 50мг/кг рыбы/сут- ки (через 9 дней после заражения в течение 10 дней) |
| 4 | Опытная группа | Часовая экспозиция в вируссодер- жащей культуральной жидкости (SbSHV) | Осетровый комбикорм 2 раза в сутки с добавлением ацикловира в дозе 50мг/кг рыбы/сут- ки (через 9 дней после заражения в течение 10 дней) |
В эксперименте использовали коммерческий препарат «Ацикловир» (производитель АО «Акрихин», Россия), форма выпуска - таблетки 100 мг. Препарат задавали рыбе с кормом 2 раза в день. Для этого таблетки ацикловира измельчали в ступке, готовили суспензию в небольшом количестве воды и орошали ей суточную навеску корма. После подсушивания на воздухе, корм делили на 2 части и скармливали рыбе опытной группы (после появления первых клинических признаков заболевания) и группе контроля токсичности препарата утром и вечером в дозе 50 мг/кг массы рыбы в сутки в течение 10 дней. Каждый день готовили новую порцию корма с ацикловиром.
Каждая группа рыб содержалась в отдельном аквариуме с проточной аэрируемой водой при температуре 15-16°С. Наблюдение за сеголетками вели в течение 60 дней (до окончания эпизоотического процесса). На 13 и 61 сутки после заражения от рыб был отобран патологический материал (образцы грудных и брюшных плавников) для реизоляции герпесвируса сибирского осетра на перевиваемой клеточной линии WSS-2 (селезенка белого осетра, Acipenser transmontanus) в соответствии с методическими рекомендациями [3, 4]. Титр вируса рассчитывали по методу Рида и Менча в соответствии с методикой [5].
Результаты исследований и их обсуждение. В результате проведенного эксперимента заболевание герпесвирусной инфекцией у сеголетков сибирского осетра воспроизведено в группе положительного контроля и опытной группе рыб. Терапия ацикловиром была начата на 9 сутки после заражения, после появления характерных симптомов заболевания, которые выражались появлением белых полупрозрачных бляшек диаметром примерно 1 мм на боковых поверхностях тела рыб, у основания жучек, на плавниках (рисунок 1).
Рис. 1. Клинические признаки SbSHV: дымчато-белые бляшки на поверхности тела и плавниках больных осетров
Спустя 14 дней после заражения в опытной группе рыб и в группе положительного контроля отмечали вялость рыбы, апатию, число бляшек на теле увеличивалось, развивались эрозии и язвы. Однако в опытной группе количество рыб с поражениями кожных покровов было меньше, чем в группе положительного контроля (табл. 2).
Таблица 2 Развитие клинических признаков опытной группы и группы положительного контроля
| Количество дней после заражения, сутки | Группа | |
|---|---|---|
| Положительный контроль | Опытная группа | |
| 7 | Бляшки на поверхности тела | Бляшки на поверхности тела |
| 13 | 84,6% рыб с бляшками, появляются эрозии | 38,5% рыб с бляшками |
| 17 | Вялость, хаотичные движения | Вялость |
| 20 | Апатия, разрушение ткани хвостового, спинного плавников, стойка на голове, кровоизлияния у основания плавников. Аппетит сохранен | Количество рыб с поражениями кожных покровов увеличивается. Аппетит сохранен |
| 25 | Начало гибели больных рыб. Ухудшение аппетита | Разрушение ткани плавников, кровоизлияния у основания грудных, брюшных плавников. Ухудшение аппетита |
| 27 | Отсутствие аппетита | Начало гибели больных рыб. Отсутствие аппетита |
| 37 | Вялость. У отдельных выживших появился аппетит | Выжившие рыбы стали активнее, появился аппетит |
| 58 | Вялость. Питаются не все рыбы | Рыбы более активны, чем в группе положительного контроля, все питаются |
Таблица 3 Обобщенные данные по развитию болезни
| Группа рыб | Клинические признаки заболевания | Титр вируса, реизолированного от больных рыб, lg ТЦД50/г ткани | Гибель рыб, % | Выживаемость рыб, % | |
|---|---|---|---|---|---|
| На 13 сутки после заражения | На 61 сутки после заражения | ||||
| Опытная группа | Поражения кожных покровов, апатия, отказ от корма | 4,85±0,12 | Не выделен | 41,7 | 58,3 |
| Положительный контроль | Поражения кожных покровов, апатия, отказ от корма | 5,1±0,19 | Не выделен | 61,5 | 38,5 |
| Отрицательный контроль | Не отмечено | Не выделен | Не выделен | 0 | 100 |
| Контроль токсичности препарата | Не отмечено | Не выделен | Не выделен | 0 | 100 |
В результате вирусологических исследований патологического материала, взятого от рыб опытной группы и группы положительного контроля на 13 сутки после заражения, вирус был выделен от рыб и той, и другой группы, при этом содержание вируса у рыб обеих групп было примерно одинаковым -104,85-105,1 ТЦД50/г ткани.
Спустя 25 суток после заражения началась гибель рыб в обоих аквариумах. В результате эксперимента гибель рыб в положительном контроле составила 61,5%, а в опытной группе - 41,7%. При вскрытии у погибших рыб отмечали признаки, характерные для герпесвирусной инфекции: наличие экссудата в полости тела, бледность печени, воспаление заднего отдела кишечника.
В результате вирусологических исследований патологических материалов, отобранных на 61 сутки после заражения (после окончания эпизоотического процесса) в зараженной культуре клеток WSS-2 не было отмечено цитопатического эффекта ни в одной группе рыб (табл. 3).
У рыб группы отрицательного контроля и группы контроля токсичности препарата клинических признаков заболевания не наблюдалось в течение всего периода наблюдения и вирус не был выделен в результате вирусологических исследований.
Заключение. Полученные данные говорят о том, что препарат «Ацикловир» в дозе 50 мг/кг массы рыбы в сутки не предотвращает развитие герпесвирусной инфекции сибирского осетра, но снижает гибель рыб от заболевания на 32% и процент рыб с проявлением характерных клинических признаков, облегчает течение инфекционного процесса. Данные результаты позволяют рекомендовать ацикловир для борьбы с герпесвирусной болезнью у сибирского осетра.
Список литературы:
1. Герпесвирусная болезнь у осетровых рыб в России / И. С. Щелкунов, Т. И. Щелкунова, А. И. Щелкунов [и др.] // Российский ветеринарный журнал «Сельскохозяйственные животные». 2007. № 1. С. 10-12.
2. Лекарственные препараты в России. Справочник VIDAL.
3. Методические рекомендации по диагностике герпесвирусной болезни сибирского осетра // РАСХН, ГНУ ВНИИВВиМ. 2009. 10 с.
4. Методические указания по идентификации вирусов и лабораторной диагностике вирусных болезней рыб // Сб. инструкции по борьбе с болезнями рыб. АМБ-агро. 1998. Ч. 1. С. 60-113.
5. On the Calculation of TCID50 for Quantitation of Virus Infectivity / C. Lei, J. Yang, J. Hu, X. Sun // Virologica Sinica. 2021. No. 36. Pp. 141-144.
Резюме. В статье представлены результаты экспериментальных работ по выявлению терапевтического эффекта ацикловира против герпесвирусной болезни у сеголетков сибирского осетра при экспериментальном заражении. После появления характерных клинических признаков заболевания рыбам скармливали ацикловир с кормом в дозе 50 мг/кг массы рыб в сутки в течение 10 дней. При этом препарат уменьшал проявление клинических признаков, увеличивал выживаемость рыб в результате перенесенной герпесвирусной инфекции по сравнению с группой положительного контроля. Приведены данные о клинических и патологоанатомических признаках заболевания, длительности и характере течения герпесвирусной инфекции у молоди сибирского осетра. Полученные данные говорят о том, что препарат «Ацикловир» в дозе 50 мг/кг массы рыбы в сутки не предотвращает развитие герпесвирусной инфекции сибирского осетра, но снижает гибель рыб от заболевания на 32 %, снижает процент рыб с проявлением характерных клинических признаков и облегчает течение инфекционного процесса. Данные результаты позволяют рекомендовать ацикловир для борьбы с герпесвирусной болезнью у сибирского осетра.
Ключевые слова: рыбоводство, сибирский осетр, герпесвирусная болезнь, ацикловир, диагностика вирусных болезней рыб, профилактика, лечение, аквакультура.
Сведения об авторах:
Щелкунова Юлия Петровна, кандидат биологических наук, заместитель заведующего лабораторией ихтиопатологии филиала по пресноводному рыбному хозяйству ФГБНУ «ВНИРО» («ВНИИПРХ»); 141821, Московская область, Дмитровский г.о., п. Рыбное, 40 а; тел.: 8-495-1086856; e-mail: kondina.yu@mail.ru.
Кропочева Ирина Юрьевна, ведущий специалист лаборатории ихтио-патологии филиала по пресноводному рыбному хозяйству ФГБНУ «ВНИРО» («ВНИИПРХ»); 141821, Московская область, Дмитровский г.о., п. Рыбное, 40 а; тел.: 8-495-1086856; e-mail: irina.kropocheva.83@mail.ru.
Ответственный за переписку с редакцией: Рекордатова Светлана Александровна, ведущий специалист лаборатории ихтиопато-логии филиала по пресноводному рыбному хозяйству ФГБНУ «ВНИРО» («ВНИИПРХ»); 141821, Московская область, Дмитровский г.о., п. Рыбное, 40 а; тел.: 8-495-1086856; e-mail: sv.rek@mail.ru.
http://vetkuban.com/num6_202310.html