Лептоспироз лошадей: результаты лабораторного контроля в Российской Федерации

УДК 616.98:579.841.93
DOI 10.33861/2071-8020-2021-5-19-22

Нурлыгаянова Г.А., Белоусов В.И., Шарыпов А.С., Зюзгина С.В., Девришова З.С. Федеральное государственное
бюджетное учреждение «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория», г. Москва

Лептоспироз (лат. Leptospirosis) относится к убиквитарным инфекциям, заболевание человека и животных регистрируется практически на всех континентах (кроме Антарктиды) и во всех странах мира. Международное эпизоотическое бюро регулярно информирует о распространении лептоспироза в мире, что связано с природными очагами лептоспироза и широким спектром в них резервуарных хозяев патогенных лептоспир. Известно, что более 130 видов животных (сельскохозяйственных, домашних и диких) могут быть источниками возбудителя лептоспироза в природе. Человек чаще заражается лептоспирами от диких животных (грызунов) и значительно реже от домашних и сельскохозяйственных видов. От человека к человеку инфекция не передается, человек является «биологическим тупиком» для возбудителя болезни [1, 11, 14].

Возбудитель болезни - грамотрицательная бактерия рода Leptosрira, лептоспиры относятся к классу Spirochaetes, порядку Spirochaetales, семейству Spirochaetaceae. Серовар является основным таксоном у лептоспир. Классическая традиционная серологическая классификация насчитывает более 300 наименований серова-ров, которые объединены в 29 серологических групп в соответствии с антигенным родством [2]. Согласно генно-инженерной системе классификации, основанной на методе ДНК-ДНК гибридизации, известно о 21 виде лептоспир, которые разделены на три эволюционные ветви: 1) патогенные виды; 2) промежуточные (патогенно-подобные виды), 3) сапрофиты [12].

На территории Российской Федерации среди животных разных видов наиболее распространенными являются лептоспиры серогрупп Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa, Pomona, Sejroe, Hebdomadis, Tarassovi и Canicola, которые включены в состав вакцинных препаратов [7]. Для лептоспироза животных характерна выраженная сезонность, заболевание регистрируется с июня по ноябрь, чаще заболевают животные в низменных, заболоченных и лесистых местностях, где вода и почва имеют щелочную или нейтральную реакцию [6].

В нашей стране, заболевание у лошадей, напоминающее иктеро-гемоглобинурию крупного рогатого скота, описали С.Н. Никольский и соавт. (1939). Культуру лептоспир от больных лошадей выделили в 1945 году С.Я. Любашенко и Л.С. Новикова [4]. В большинстве случаев лептоспироз у лошадей протекает бессимптомно, в виде лептос-пироносительства и лептоспирозной иммунизирующей субинфекции, болеют животные в возрасте от 2 до 7 лет, длительно. В типичных случаях наблюдаются следующие клинические признаки болезни: резкое повышение температуры тела, кратковременная лихорадка, сильнейшая мышечная слабость, болезненность мышц, состояние угнетенное, животное часто спотыкается, падает, дрожание конечностей, желтуха (возможна окраска в желтый цвет свежих рубцов кожи), конъюнктивит, иридоциклит, припухлость век, гемоглобинурия, некроз кожи, этот клинический признак имеет патогномоничное значение. У кобыл возможны аборты в поздней стадии жеребости. Летальность молодняка при лептоспирозе достигает в среднем 33%, при острой форме течения - до 40-60% [5, 10].

По данным Информационно-аналитического центра Управления Ветнадзора ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», в 2019 году в Российской Федерации выявлено 33 неблагополучных пункта по лептоспирозу лошадей, в 2020 году - 37, в которых содержалось 238 и 248 больных животных, соответственно.

Лабораторная диагностика и специфическая иммунизация животных противолептоспирозными вакцинами являются основными методами профилактики и борьбы с лептоспирозом [3, 8, 9, 13].

Цель работы - провести анализ результатов лабораторной диагностики лептоспироза лошадей в Российской Федерации за последние три года (2018-2020), выявить регионы с высокой степенью риска заражения.

Материалы и методы исследований. В работе использованы статистические данные годовых отчетов по лабораторной диагностике лептоспироза лошадей (форма 4-вет), представленных государственными ветеринарными лабораториями субъектов Российской Федерации в ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория» (ФГБУ ЦНМВЛ) в соответствие с Приказом Минсельхоза России от 02.04.2008 г. № 189 (ред. от 27.09.2011 г.) и материалы пояснительных записок, прилагаемых к статистическим данным отчетов.

На всей территории Российской Федерации, согласно планов про-тивоэпизоотических мероприятий, ежегодно проводятся массовые лабораторные (серологические) исследования однокопытных животных семейства лошадиных (лошади, ослы, мулы, пони, лошаки) на лептоспироз и другие хронические болезни (бруцеллез, хламидиоз, инфекционную анемию лошадей, сап, случную болезнь) в соответствии с действующими нормативными документами.

Исследования (испытания) проводятся с целью изучения в конкретном регионе (хозяйстве) эпизоотической обстановки, своевременного выявления больных и инфицированных особей, животных с латентной формой болезни, оценки распространенности заболевания.

Вне плана исследования на лептоспироз проводятся при наличии клинических признаков болезни, при подозрении на заболевание, с целью уточнения диагноза, при продаже животных, в период постановки на карантин, перед и после случной компании, скачек, выставок и в других случаях.

Диагностика лептоспироза животных осуществляется согласно требований ГОСТ 25386-91 «Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики лептоспироза» (дата введения 01.01.1993 г.).

Лабораторные исследования на лептоспироз включают: бактериологический метод (в том числе люминесцентную и темнопольную микроскопию для обнаружения лептоспир в исследуемом материале), серологические тесты (реакция микроагглютинации (РМА) и иммуно-ферментный анализ (ИФА)), а также метод ПЦР.

Важным условием успешной диагностики лептоспироза бактериологическим методом является температура и своевременность доставки материала в диагностическую лабораторию (не позже 6 часов).

В случае аборта у животных проводится дифференциальная диагностика с другими заразными болезнями, проявляющимися абортами, рождением мертвого, нежизнеспособного приплода.

Для постановки РМА в качестве антигена используют живые культуры лептоспир различных серологических групп. Межобластные, республиканские, краевые и межрайонные государственные ветеринарные лаборатории в работе используют 15 серогрупп лептоспир, лаборатории районного уровня - 7 серогрупп. Исследование племенного поголовья, при экспорте животных и в период постановки на карантин проводится с 15 серогруппами лептоспир.

Также проводятся исследования методом ИФА, при этом руководствуются инструкцией к тест-системе. По результатам ИФА определяется принадлежность только к роду Leptosрira.

Кровь у животных для серологического исследования берут не ранее чем через 5-7 сут после проявления клинических признаков болезни, после введения вакцины лошадям - через 60 суток.

С целью постановки диагноза на лептоспироз животных применяется метод темнопольной микроскопия - для обнаружения лептоспир в моче.

Осуществляются также молекулярно-биологические исследования методом ПЦР.

Результаты исследований и их обсуждение. В настоящее время в государственных ветеринарных лабораториях Российской Федерации бактериологические исследования биологического, патологического материала и абортированных плодов на лептоспироз проводятся в недостаточном количестве. Основная причина - нарушение требований Ветеринарных правил владельцами личных подсобных и крестьянско-фермерских хозяйств (ВП 13.3 1310-96). Нельзя исключать сложные природно-климатические условия страны, отдаленность содержания животных от ветеринарных лабораторий, что создает определенные трудности по доставке материалов на лабораторно-диагностическое исследование.

С целью выделения возбудителя лептоспироза и выявления ДНК патогенных лептоспир в государственные ветеринарные лаборатории субъектов Российской Федерации в 2019-2020 годы поступило для исследования на лептоспироз 102 пробы патологического материала от лошадей и 3 абортированных плода. По результатам испытаний ни в одном случае культура лептоспир и ДНК лептоспир не выделены.

Серологические исследования с применением реакции микроагглютинации остаются основным и массовым тестом в силу высокой чувствительности и специфичности метода, относящегося в мировой диагностической практике к методам «золотого стандарта». РМА - трудоемкий, дорогостоящий и продолжительный по времени постановки тест, при постановке и учете реакции специалисты-серологи должны иметь необходимые компетенции, практические навыки для исключения субъективности учета, ложных результатов.

В таблице 1 представлены результаты лабораторных испытаний, направленные на обнаружение специфических антител в сыворотке крови животных с помощью антигена - живой культуры лептоспир (РМА), а также в ИФА.

Таблица 1 Результаты серологических исследований лошадей на лептоспироз в Российской Федерации (2018-2020 гг.)

Показатели

Годы

2018

2019

2020

Всего проб сыворотки крови

80 914

73 196

71 472

Всего исследований в РМА

520 368

512 372

483 347

Всего исследований в ИФА

-

270

769

Всего положительных результатов, проб

5 454

3 759

3 557

% положительных результатов

6,7

5,1

5,0

Данные, представленные в таблице 1, показали, что в диагностические лаборатории Российской Федерации в течение 2018-2020 гг. поступило 225 582 пробы сыворотки крови от лошадей, по которым проведено исследований в РМА - 1 516 087, в ИФА - 1 039. Всего выявлено положительно реагирующих 12 770 проб (5,7%).

Следует указать, что ежегодно сокращается количество сывороток крови, поступающих на серологические исследования. Так, в 2020 году по отношению к 2018 году количество образцов материалов уменьшилось на 9 442 пробы, исследований в РМА - на 37 021 пробу.

В 2020 году по результатам серологических исследований наибольшее количество лошадей, положительно реагирующих на лептоспироз, выявлено на территории 9 субъектов Российской Федерации (табл. 2).

Таблица 2 Результаты серологических исследований в РМА на лептоспироз лошадей в субъектах Российской Федерации в 2020 году

Наимено­вание субъекта

Всего исследовано, проб

Всего положительных, проб

%

Доминирующие серогруппы лептоспир

Смешан­ные серо- группы

Ictero- haemor- rhagiae

Cani- cola

Grip- poty- phosa

Pomona

Taras- sovi

Всего по Россий­ской Федера­ции, в том числе:

71 472

3 557

4,9

1 198

123

486

183

271

1 144

Оренбург­ская область

3 308

818

24,7

660

23

13

33

76

1

Липецкая область

2 219

472

21,3

68

20

126

19

14

205

Брянская область

1 253

237

18,9

13

-

-

-

-

224

Пензен­ская область

409

212

51,8

58

12

24

10

16

80

Республика Башкорто­стан

12 339

203

1,6

38

17

37

21

41

35

Иркутская область

1 107

184

16,6

54

6

15

3

49

46

Республика Марий Эл

543

150

27,6

39

1

5

28

-

75

Курская область

894

140

15,6

44

5

58

11

-

22

Калужская область

163

106

65,0

7

1

12

16

6

59

Анализ данных таблицы 2 показал, что наибольшее количество лошадей, положительно реагирующих в РМА на лептоспироз, зарегистрировано в Оренбургской (818 проб) и Липецкой (472 пробы) областях, что составило, соответственно, 23,0% и 13,3%, от общего количества положительно реагирующих животных в Российской Федерации.

Можно предположить, что на территории Оренбургской области произошла эпизоотическая вспышка лептоспироза среди поголовья лошадей, установлена доминирующая серогруппа лептоспир -Icterohaemorrhagiae (80,7% случаев от числа сероположительных реакций).

Следует отметить, что смешанные серогруппы лептоспир составили: в Брянской области - 94,5%, Калужской области - 55,7%, Республике Марий Эл - 50%, Липецкой области 43,4% (от общего количества положительных проб, выявленных в указанных субъектах), что может свидетельствовать о многократной вакцинации животных противолеп-тоспирозными вакцинами.

В то же время наибольшее количество проб сыворотки крови лошадей исследовано в Республике Башкортостан - 12 339, при этом выявлен наименьший процент положительно реагирующих - 1,6%.

Наличие актуальных сведений об этиологической структуре лептоспироза животных в конкретном регионе страны позволяет обоснованно планировать проведение профилактических мероприятий, ключевым звеном которых является иммунизация поголовья.

Таблица 3 Этиологическая структура лептоспироза лошадей по Российской Федерации (2018-2020 гг.)

Годы

Наименование серогруппы, %

Icterohaemorrhagiae

Canicola

Grippotyphosa

Hebdomadis

Pomonа

Tarassovi

Sejroe

Смешанные серогруппы лептоспир

2018

15,7

3,9

19,7

1,3

6,6

7,6

1,1

44,1

2019

15,6

4,7

16,5

0,7

5,0

8,1

1,5

43,4

2020

34,0

3,5

13,8

1,0

5,2

7,7

2,5

32,4

Данные, представленные в таблице 3, показали, что среди лошадей доминируют серогруппы Icterohaemorrhagiae (до 34,0%) и Grippotyphosa (до 19,7%). Выявление положительных реакций с лептоспирами серогруппы Icterohaemorrhagiae указывает на возможность нахождения животных на одной территории с крысами и их незащищенность от постоянного контакта с грызунами, что способствует инфицированию лошадей. На смешанные серогруппы лептоспир приходится до 44,1%.

Своевременное выявление животных-лептоспироносителей способствует ликвидации источника возбудителя и улучшению эпизоотической обстановки по лептоспирозу на территории конкретного региона (хозяйства). Для выявления у животных лептоспироносительства применяется метод темнопольной микроскопии. Результаты лабораторных исследований на лептоспироз проб мочи от лошадей данным методом представлены в таблице 4.

Уникальная морфология лептоспир и своеобразный способ движения дает возможность распознавать их в исследуемом материале (моче) при темнопольной микроскопии, безошибочно дифференцировать от микроорганизмов других видов, что позволяет устанавливать диагноз на лептоспироз только на основании микроскопических исследований.

Таблица 4 Результаты микроскопических исследований мочи от лошадей на лептоспироз в Российской Федерации (2018-2020 гг.)

Показатели

Годы

2018

2019

2020

Всего проб

492

417

998

Всего положительных результатов

-

-

1

% положительных результатов

-

-

0,1

Из материалов, приведенных в таблице 4, следует, что всего в государственных ветеринарных лабораториях Российской Федерации в период 2018-2020 годы происследовано 1 907 проб мочи, по результатам испытаний живые лептоспиры обнаружены только в 1 случае в Калужской области при исследовании 20 проб мочи (5%), что может свидетельствовать об ухудшении эпизоотической ситуации по лептоспирозу в этом хозяйстве.

На базе ветеринарных лабораторий, оснащенных современным и высокотехнологичным оборудованием, проводятся молекулярногенетические исследования (метод ПЦР) с целью выявления ДНК патогенных лептоспир из образцов биологического и патологического материалов. В настоящее время исследования методом полимеразной цепной реакции проводятся в незначительном количестве. Так, в 2020 году всего в Российской Федерации исследовано от лошадей 462 пробы крови и 61 проба мочи. По результатам исследований ДНК возбудителя лептоспироза обнаружен при исследовании 4 проб мочи лошадей в 2 случаях (50,0%) на территории Калужской области. Исследования проводились методом ПЦР с помощью «Набора реагентов для обнаружения ДНК патогенных видов Leptospira методом полимеразной цепной реакции» (производитель ООО НПФ «Литех») и «Набора реагентов для выявления ДНК возбудителя лептоспироза (Leptospira spp.) ПЦР-Лептоспироз-Фактор» (производитель ООО «ВетФактор», г. Москва).

В большинстве ветеринарных лабораторий Российской Федерации для выявления ДНК возбудителя лептоспироза методом ПЦР применяются следующие наборы/ тест-системы, исследования проводятся в соответствии с утвержденной инструкцией:

Заключение. Эпизоотическая ситуация по лептоспирозу лошадей в Российской Федерации остается сложной. Уровень инфицирования лошадей лептоспирами в 2018-2020 годы в среднем составил 5,7%. В 2020 году наибольшее количество положительно реагирующих на лептоспироз лошадей выявлено методом РМА на территории 9-ти регионов, где специфические лептоспирозные антитела обнаружены от 1,6% до 65,0% случаев от числа исследованных животных. Доминирующие серогруппы лептоспир у лошадей в Российской Федерации: Icterohaemorrhagiae и Grippotyphosa - до 34% и 19,7%, соответственно. Методом темнопольной микроскопии исследовано 1 907 проб мочи от лошадей, по результатам испытаний живые лептоспиры обнаружены только в 1 случае. По результатам бактериологических и ПЦР исследований патологического материала и абортированных плодов от лошадей, культура лептоспир и ДНК лептоспир в этот период не выявлены. Широкое применение в государственных ветеринарных лабораториях всех уровней высокочувствительных методов диагностики (ПЦР), обязательные бактериологические исследования био- и патматериала, абортированных плодов, а также своевременные ветеринарно-санитарные мероприятия в очагах инфекции будут способствовать выявлению и идентификации возбудителя болезни в неблагополучных территориях и оздоровлению хозяйственных, антро-пургических и природных очагов и животноводческих хозяйств от лептоспироза. Для успешной борьбы с лептоспирозом в неблагополучных регионах необходимо применять противолептоспирозные вакцины в соответствии с этиологической структурой лептоспироза (эпидемически значимые серологические группы).

Список литературы:

  1. Ананьина Ю.В. Лептоспирозы людей и животных: тенденции распространения и проблемы профилактики// Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2010. № 2 (51). С. 13-16.
  2. Идентификация сероваров Leptospiro методом MALDI-TOF масс-спектрометрии/ Е.В. Зуева, Н.А. Стоянова, Н.К. Токаревич, Арег А. Тотолян// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2017. № 1. С. 42-49.
  3. Лабораторная диагностика и совершенствование профилактики лептоспироза животных в Российской Федерации/ В.И. Белоусов, Г.А. Нурлыгаянова, А.А. Варенцова, С.Б. Базарбаев// Труды Всероссийского НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. Т. 80 (2). 2018. С. 46-52.
  4. Малахов Ю.А., Панин А.Н., Соболева Г.Л. Лептоспироз животных// Диапресс. 2000. 584 с.
  5. Нахмансон В.М., Бурда Л.Г. Дифференциальная диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных// Росагропромиздат. 1990. 255 с.
  6. Петрова Л.А. Особенности эпизоотического процесса лептоспироза лошадей: автореф. ... канд. вет. наук. 2006. 20 с.
  7. Роберман М.Г. Синантропизация лептоспироза в условиях мегаполиса и его пригородов: дисс. . канд. вет. наук. 2016. 197 с.
  8. Соболева Г.Л. Ананьина Ю.В., Непоклонова И.В. Актуальные вопросы лептоспироза людей и животных// Российский ветеринарный журнал. 2017. № 8. С. 13-17.
  9. Токаревич Н.К., Стоянова Н.А. Эпидемиологические аспекты антропогенного влияния на эволюцию лептоспирозов// Инфекция и иммунитет. 2011. № 1 (1). С. 67-76.
  10. Эпизоотологические особенности лептоспироза лошадей/ В.А. Кузьмин, Л.С. Фогель, К.С. Савенков, Т.Б. Кузина// Иппология и ветеринария. 2016. № 1 (19). С. 15-21.
  11. Эпизоотическая роль диких животных при лептоспирозе на Северном Кавказе/ И.А. Болоцкий, В.И. Семенцов, С.В. Пруцаков, А.К. Васильев, А.В. Пахомов// Ветеринария Кубани. 2009. № 3. С. 15-16.
  12. Mathieu Picardeau, Eric Bertherat, Michel Jancloes, Andreas N. Skouloudis, Kara Durski, Rudy A. Hartskeerl. Rapid tests for diagnosis of leptospirosis: current tools and emerging technologies// Diagn Microbiol Infect Dis. 2014 Jan. 78 (1): 1-8.
  13. Suman Veerappa Budihal, Khalid Perwez. Leptospirosis Diagnosis: Competancy of Various Laboratory Tests / Suman Veerappa Budihal, Khalid Perwez// Journal of Clinical and Diagnostic Research. 2014. Jan, Vol. 8(1). Р. 199202.
  14. World Health Organization. Human leptospirosis: guidance for diagnosis, surveillance and control. 2003. 109 р.

Резюме. Представлен анализ результатов диагностики лептоспироза лошадей методами, применяемыми на практике в государственных ветеринарных лабораториях Российской Федерации: бактериологический, серологический (РМА, ИФА), молекулярно-генетический (метод ПЦР) за период 2018-2020 гг. В ветеринарные лаборатории Российской Федерации поступило для исследований на лептоспироз 225 582 пробы сыворотки крови от лошадей, по которым проведено исследований в РМА - 1 516 087, в ИФА - 1 039, положительно реагировали - 12 770 проб. Анализ отчетных данных за последние три года по форме 4-вет показал, что эпизоотическая ситуация по лептоспирозу лошадей в Российской Федерации остается сложной. Уровень инфицирования лошадей лептоспирами в среднем составил 5,7%. В 2020 году наибольшее количество положительно реагирующих в РМА выявлены на территории 9 регионов, среди исследованных животных специфические лептоспирозные антитела обнаружены от 1,6% до 65,0% случаев. Доминирующие серогруппы лептоспир у лошадей в Российской Федерации: Icterohaemorrhagiae и Grippotyphosa, соответственно, до 34% и 19,7%. За последние три года методом темнопольной микроскопии исследовано 1 907 проб мочи от лошадей, живые лептоспиры обнаружены только в 1 случае. Для улучшения эпизоотической ситуации по лептоспирозу лошадей в России следует расширить количество бактериологических и молекулярно-биологических исследований для своевременного выявления возбудителя болезни -L. interrogans. В неблагополучных регионах необходимо применять противолеп-тоспирозные вакцины в соответствии со специфической этиологической структурой лептоспироза животных, актуальной для конкретной территории.

Ключевые слова: лошади, лептоспироз, возбудитель, лептоспиры, серогруп-па, лабораторные исследования, методы, эпизоотическая ситуация, вакцина, регионы России.

Сведения об авторах:

Белоусов Василий Иванович, доктор ветеринарных наук, профессор, главный научный сотрудник отдела координации научно-исследовательских работ ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, д. 23; тел.: 8-495-7000137; e-mail: science@cnmvl.ru.

Шарыпов Андрей Сергеевич, кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник отдела координации научно-исследовательских работ ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, д. 23; тел.: 8-495-7000137; e-mail: science@cnmvl.ru.

Зюзгина Светлана Викторовна, старший научный сотрудник ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, д. 23; тел.: 8-495-7000137; e-mail: science@cnmvl.ru.

Девришова Зелиха Султановна, научный сотрудник отдела молекулярных исследований ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, д. 23; тел.: 8-495-7000137; e-mail: zul3646@yandex.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Нурлыгаянова Гульнара Ахметовна, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник отдела координации научно-исследовательских работ ФГБУ «Центральная научнометодическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, д. 23; тел.: 8-495-7000137; e-mail: science@cnmvl.ru.


http://vetkuban.com/num5_202106.html