УДК 616.98:579.841.93
DOI 10.33861/2071-8020-2021-5-19-22
Нурлыгаянова Г.А., Белоусов В.И., Шарыпов А.С., Зюзгина С.В., Девришова З.С. Федеральное государственное
бюджетное учреждение «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория», г. Москва
Лептоспироз (лат. Leptospirosis) относится к убиквитарным инфекциям, заболевание человека и животных регистрируется практически на всех континентах (кроме Антарктиды) и во всех странах мира. Международное эпизоотическое бюро регулярно информирует о распространении лептоспироза в мире, что связано с природными очагами лептоспироза и широким спектром в них резервуарных хозяев патогенных лептоспир. Известно, что более 130 видов животных (сельскохозяйственных, домашних и диких) могут быть источниками возбудителя лептоспироза в природе. Человек чаще заражается лептоспирами от диких животных (грызунов) и значительно реже от домашних и сельскохозяйственных видов. От человека к человеку инфекция не передается, человек является «биологическим тупиком» для возбудителя болезни [1, 11, 14].
Возбудитель болезни - грамотрицательная бактерия рода Leptosрira, лептоспиры относятся к классу Spirochaetes, порядку Spirochaetales, семейству Spirochaetaceae. Серовар является основным таксоном у лептоспир. Классическая традиционная серологическая классификация насчитывает более 300 наименований серова-ров, которые объединены в 29 серологических групп в соответствии с антигенным родством [2]. Согласно генно-инженерной системе классификации, основанной на методе ДНК-ДНК гибридизации, известно о 21 виде лептоспир, которые разделены на три эволюционные ветви: 1) патогенные виды; 2) промежуточные (патогенно-подобные виды), 3) сапрофиты [12].
На территории Российской Федерации среди животных разных видов наиболее распространенными являются лептоспиры серогрупп Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa, Pomona, Sejroe, Hebdomadis, Tarassovi и Canicola, которые включены в состав вакцинных препаратов [7]. Для лептоспироза животных характерна выраженная сезонность, заболевание регистрируется с июня по ноябрь, чаще заболевают животные в низменных, заболоченных и лесистых местностях, где вода и почва имеют щелочную или нейтральную реакцию [6].
В нашей стране, заболевание у лошадей, напоминающее иктеро-гемоглобинурию крупного рогатого скота, описали С.Н. Никольский и соавт. (1939). Культуру лептоспир от больных лошадей выделили в 1945 году С.Я. Любашенко и Л.С. Новикова [4]. В большинстве случаев лептоспироз у лошадей протекает бессимптомно, в виде лептос-пироносительства и лептоспирозной иммунизирующей субинфекции, болеют животные в возрасте от 2 до 7 лет, длительно. В типичных случаях наблюдаются следующие клинические признаки болезни: резкое повышение температуры тела, кратковременная лихорадка, сильнейшая мышечная слабость, болезненность мышц, состояние угнетенное, животное часто спотыкается, падает, дрожание конечностей, желтуха (возможна окраска в желтый цвет свежих рубцов кожи), конъюнктивит, иридоциклит, припухлость век, гемоглобинурия, некроз кожи, этот клинический признак имеет патогномоничное значение. У кобыл возможны аборты в поздней стадии жеребости. Летальность молодняка при лептоспирозе достигает в среднем 33%, при острой форме течения - до 40-60% [5, 10].
По данным Информационно-аналитического центра Управления Ветнадзора ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», в 2019 году в Российской Федерации выявлено 33 неблагополучных пункта по лептоспирозу лошадей, в 2020 году - 37, в которых содержалось 238 и 248 больных животных, соответственно.
Лабораторная диагностика и специфическая иммунизация животных противолептоспирозными вакцинами являются основными методами профилактики и борьбы с лептоспирозом [3, 8, 9, 13].
Цель работы - провести анализ результатов лабораторной диагностики лептоспироза лошадей в Российской Федерации за последние три года (2018-2020), выявить регионы с высокой степенью риска заражения.
Материалы и методы исследований. В работе использованы статистические данные годовых отчетов по лабораторной диагностике лептоспироза лошадей (форма 4-вет), представленных государственными ветеринарными лабораториями субъектов Российской Федерации в ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория» (ФГБУ ЦНМВЛ) в соответствие с Приказом Минсельхоза России от 02.04.2008 г. № 189 (ред. от 27.09.2011 г.) и материалы пояснительных записок, прилагаемых к статистическим данным отчетов.
На всей территории Российской Федерации, согласно планов про-тивоэпизоотических мероприятий, ежегодно проводятся массовые лабораторные (серологические) исследования однокопытных животных семейства лошадиных (лошади, ослы, мулы, пони, лошаки) на лептоспироз и другие хронические болезни (бруцеллез, хламидиоз, инфекционную анемию лошадей, сап, случную болезнь) в соответствии с действующими нормативными документами.
Исследования (испытания) проводятся с целью изучения в конкретном регионе (хозяйстве) эпизоотической обстановки, своевременного выявления больных и инфицированных особей, животных с латентной формой болезни, оценки распространенности заболевания.
Вне плана исследования на лептоспироз проводятся при наличии клинических признаков болезни, при подозрении на заболевание, с целью уточнения диагноза, при продаже животных, в период постановки на карантин, перед и после случной компании, скачек, выставок и в других случаях.
Диагностика лептоспироза животных осуществляется согласно требований ГОСТ 25386-91 «Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики лептоспироза» (дата введения 01.01.1993 г.).
Лабораторные исследования на лептоспироз включают: бактериологический метод (в том числе люминесцентную и темнопольную микроскопию для обнаружения лептоспир в исследуемом материале), серологические тесты (реакция микроагглютинации (РМА) и иммуно-ферментный анализ (ИФА)), а также метод ПЦР.
Важным условием успешной диагностики лептоспироза бактериологическим методом является температура и своевременность доставки материала в диагностическую лабораторию (не позже 6 часов).
В случае аборта у животных проводится дифференциальная диагностика с другими заразными болезнями, проявляющимися абортами, рождением мертвого, нежизнеспособного приплода.
Для постановки РМА в качестве антигена используют живые культуры лептоспир различных серологических групп. Межобластные, республиканские, краевые и межрайонные государственные ветеринарные лаборатории в работе используют 15 серогрупп лептоспир, лаборатории районного уровня - 7 серогрупп. Исследование племенного поголовья, при экспорте животных и в период постановки на карантин проводится с 15 серогруппами лептоспир.
Также проводятся исследования методом ИФА, при этом руководствуются инструкцией к тест-системе. По результатам ИФА определяется принадлежность только к роду Leptosрira.
Кровь у животных для серологического исследования берут не ранее чем через 5-7 сут после проявления клинических признаков болезни, после введения вакцины лошадям - через 60 суток.
С целью постановки диагноза на лептоспироз животных применяется метод темнопольной микроскопия - для обнаружения лептоспир в моче.
Осуществляются также молекулярно-биологические исследования методом ПЦР.
Результаты исследований и их обсуждение. В настоящее время в государственных ветеринарных лабораториях Российской Федерации бактериологические исследования биологического, патологического материала и абортированных плодов на лептоспироз проводятся в недостаточном количестве. Основная причина - нарушение требований Ветеринарных правил владельцами личных подсобных и крестьянско-фермерских хозяйств (ВП 13.3 1310-96). Нельзя исключать сложные природно-климатические условия страны, отдаленность содержания животных от ветеринарных лабораторий, что создает определенные трудности по доставке материалов на лабораторно-диагностическое исследование.
С целью выделения возбудителя лептоспироза и выявления ДНК патогенных лептоспир в государственные ветеринарные лаборатории субъектов Российской Федерации в 2019-2020 годы поступило для исследования на лептоспироз 102 пробы патологического материала от лошадей и 3 абортированных плода. По результатам испытаний ни в одном случае культура лептоспир и ДНК лептоспир не выделены.
Серологические исследования с применением реакции микроагглютинации остаются основным и массовым тестом в силу высокой чувствительности и специфичности метода, относящегося в мировой диагностической практике к методам «золотого стандарта». РМА - трудоемкий, дорогостоящий и продолжительный по времени постановки тест, при постановке и учете реакции специалисты-серологи должны иметь необходимые компетенции, практические навыки для исключения субъективности учета, ложных результатов.
В таблице 1 представлены результаты лабораторных испытаний, направленные на обнаружение специфических антител в сыворотке крови животных с помощью антигена - живой культуры лептоспир (РМА), а также в ИФА.
Таблица 1 Результаты серологических исследований лошадей на лептоспироз в Российской Федерации (2018-2020 гг.)
| Показатели | Годы | ||
|---|---|---|---|
| 2018 | 2019 | 2020 | |
| Всего проб сыворотки крови | 80 914 | 73 196 | 71 472 |
| Всего исследований в РМА | 520 368 | 512 372 | 483 347 |
| Всего исследований в ИФА | - | 270 | 769 |
| Всего положительных результатов, проб | 5 454 | 3 759 | 3 557 |
| % положительных результатов | 6,7 | 5,1 | 5,0 |
Данные, представленные в таблице 1, показали, что в диагностические лаборатории Российской Федерации в течение 2018-2020 гг. поступило 225 582 пробы сыворотки крови от лошадей, по которым проведено исследований в РМА - 1 516 087, в ИФА - 1 039. Всего выявлено положительно реагирующих 12 770 проб (5,7%).
Следует указать, что ежегодно сокращается количество сывороток крови, поступающих на серологические исследования. Так, в 2020 году по отношению к 2018 году количество образцов материалов уменьшилось на 9 442 пробы, исследований в РМА - на 37 021 пробу.
В 2020 году по результатам серологических исследований наибольшее количество лошадей, положительно реагирующих на лептоспироз, выявлено на территории 9 субъектов Российской Федерации (табл. 2).
Таблица 2 Результаты серологических исследований в РМА на лептоспироз лошадей в субъектах Российской Федерации в 2020 году
| Наименование субъекта | Всего исследовано, проб | Всего положительных, проб | % | Доминирующие серогруппы лептоспир | Смешанные серо- группы | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Ictero- haemor- rhagiae | Cani- cola | Grip- poty- phosa | Pomona | Taras- sovi | |||||
| Всего по Российской Федерации, в том числе: | 71 472 | 3 557 | 4,9 | 1 198 | 123 | 486 | 183 | 271 | 1 144 |
| Оренбургская область | 3 308 | 818 | 24,7 | 660 | 23 | 13 | 33 | 76 | 1 |
| Липецкая область | 2 219 | 472 | 21,3 | 68 | 20 | 126 | 19 | 14 | 205 |
| Брянская область | 1 253 | 237 | 18,9 | 13 | - | - | - | - | 224 |
| Пензенская область | 409 | 212 | 51,8 | 58 | 12 | 24 | 10 | 16 | 80 |
| Республика Башкортостан | 12 339 | 203 | 1,6 | 38 | 17 | 37 | 21 | 41 | 35 |
| Иркутская область | 1 107 | 184 | 16,6 | 54 | 6 | 15 | 3 | 49 | 46 |
| Республика Марий Эл | 543 | 150 | 27,6 | 39 | 1 | 5 | 28 | - | 75 |
| Курская область | 894 | 140 | 15,6 | 44 | 5 | 58 | 11 | - | 22 |
| Калужская область | 163 | 106 | 65,0 | 7 | 1 | 12 | 16 | 6 | 59 |
Анализ данных таблицы 2 показал, что наибольшее количество лошадей, положительно реагирующих в РМА на лептоспироз, зарегистрировано в Оренбургской (818 проб) и Липецкой (472 пробы) областях, что составило, соответственно, 23,0% и 13,3%, от общего количества положительно реагирующих животных в Российской Федерации.
Можно предположить, что на территории Оренбургской области произошла эпизоотическая вспышка лептоспироза среди поголовья лошадей, установлена доминирующая серогруппа лептоспир -Icterohaemorrhagiae (80,7% случаев от числа сероположительных реакций).
Следует отметить, что смешанные серогруппы лептоспир составили: в Брянской области - 94,5%, Калужской области - 55,7%, Республике Марий Эл - 50%, Липецкой области 43,4% (от общего количества положительных проб, выявленных в указанных субъектах), что может свидетельствовать о многократной вакцинации животных противолеп-тоспирозными вакцинами.
В то же время наибольшее количество проб сыворотки крови лошадей исследовано в Республике Башкортостан - 12 339, при этом выявлен наименьший процент положительно реагирующих - 1,6%.
Наличие актуальных сведений об этиологической структуре лептоспироза животных в конкретном регионе страны позволяет обоснованно планировать проведение профилактических мероприятий, ключевым звеном которых является иммунизация поголовья.
Таблица 3 Этиологическая структура лептоспироза лошадей по Российской Федерации (2018-2020 гг.)
| Годы | Наименование серогруппы, % | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Icterohaemorrhagiae | Canicola | Grippotyphosa | Hebdomadis | Pomonа | Tarassovi | Sejroe | Смешанные серогруппы лептоспир | |
| 2018 | 15,7 | 3,9 | 19,7 | 1,3 | 6,6 | 7,6 | 1,1 | 44,1 |
| 2019 | 15,6 | 4,7 | 16,5 | 0,7 | 5,0 | 8,1 | 1,5 | 43,4 |
| 2020 | 34,0 | 3,5 | 13,8 | 1,0 | 5,2 | 7,7 | 2,5 | 32,4 |
Данные, представленные в таблице 3, показали, что среди лошадей доминируют серогруппы Icterohaemorrhagiae (до 34,0%) и Grippotyphosa (до 19,7%). Выявление положительных реакций с лептоспирами серогруппы Icterohaemorrhagiae указывает на возможность нахождения животных на одной территории с крысами и их незащищенность от постоянного контакта с грызунами, что способствует инфицированию лошадей. На смешанные серогруппы лептоспир приходится до 44,1%.
Своевременное выявление животных-лептоспироносителей способствует ликвидации источника возбудителя и улучшению эпизоотической обстановки по лептоспирозу на территории конкретного региона (хозяйства). Для выявления у животных лептоспироносительства применяется метод темнопольной микроскопии. Результаты лабораторных исследований на лептоспироз проб мочи от лошадей данным методом представлены в таблице 4.
Уникальная морфология лептоспир и своеобразный способ движения дает возможность распознавать их в исследуемом материале (моче) при темнопольной микроскопии, безошибочно дифференцировать от микроорганизмов других видов, что позволяет устанавливать диагноз на лептоспироз только на основании микроскопических исследований.
Таблица 4 Результаты микроскопических исследований мочи от лошадей на лептоспироз в Российской Федерации (2018-2020 гг.)
| Показатели | Годы | ||
|---|---|---|---|
| 2018 | 2019 | 2020 | |
| Всего проб | 492 | 417 | 998 |
| Всего положительных результатов | - | - | 1 |
| % положительных результатов | - | - | 0,1 |
Из материалов, приведенных в таблице 4, следует, что всего в государственных ветеринарных лабораториях Российской Федерации в период 2018-2020 годы происследовано 1 907 проб мочи, по результатам испытаний живые лептоспиры обнаружены только в 1 случае в Калужской области при исследовании 20 проб мочи (5%), что может свидетельствовать об ухудшении эпизоотической ситуации по лептоспирозу в этом хозяйстве.
На базе ветеринарных лабораторий, оснащенных современным и высокотехнологичным оборудованием, проводятся молекулярногенетические исследования (метод ПЦР) с целью выявления ДНК патогенных лептоспир из образцов биологического и патологического материалов. В настоящее время исследования методом полимеразной цепной реакции проводятся в незначительном количестве. Так, в 2020 году всего в Российской Федерации исследовано от лошадей 462 пробы крови и 61 проба мочи. По результатам исследований ДНК возбудителя лептоспироза обнаружен при исследовании 4 проб мочи лошадей в 2 случаях (50,0%) на территории Калужской области. Исследования проводились методом ПЦР с помощью «Набора реагентов для обнаружения ДНК патогенных видов Leptospira методом полимеразной цепной реакции» (производитель ООО НПФ «Литех») и «Набора реагентов для выявления ДНК возбудителя лептоспироза (Leptospira spp.) ПЦР-Лептоспироз-Фактор» (производитель ООО «ВетФактор», г. Москва).
В большинстве ветеринарных лабораторий Российской Федерации для выявления ДНК возбудителя лептоспироза методом ПЦР применяются следующие наборы/ тест-системы, исследования проводятся в соответствии с утвержденной инструкцией:
Заключение. Эпизоотическая ситуация по лептоспирозу лошадей в Российской Федерации остается сложной. Уровень инфицирования лошадей лептоспирами в 2018-2020 годы в среднем составил 5,7%. В 2020 году наибольшее количество положительно реагирующих на лептоспироз лошадей выявлено методом РМА на территории 9-ти регионов, где специфические лептоспирозные антитела обнаружены от 1,6% до 65,0% случаев от числа исследованных животных. Доминирующие серогруппы лептоспир у лошадей в Российской Федерации: Icterohaemorrhagiae и Grippotyphosa - до 34% и 19,7%, соответственно. Методом темнопольной микроскопии исследовано 1 907 проб мочи от лошадей, по результатам испытаний живые лептоспиры обнаружены только в 1 случае. По результатам бактериологических и ПЦР исследований патологического материала и абортированных плодов от лошадей, культура лептоспир и ДНК лептоспир в этот период не выявлены. Широкое применение в государственных ветеринарных лабораториях всех уровней высокочувствительных методов диагностики (ПЦР), обязательные бактериологические исследования био- и патматериала, абортированных плодов, а также своевременные ветеринарно-санитарные мероприятия в очагах инфекции будут способствовать выявлению и идентификации возбудителя болезни в неблагополучных территориях и оздоровлению хозяйственных, антро-пургических и природных очагов и животноводческих хозяйств от лептоспироза. Для успешной борьбы с лептоспирозом в неблагополучных регионах необходимо применять противолептоспирозные вакцины в соответствии с этиологической структурой лептоспироза (эпидемически значимые серологические группы).
Список литературы:
Резюме. Представлен анализ результатов диагностики лептоспироза лошадей методами, применяемыми на практике в государственных ветеринарных лабораториях Российской Федерации: бактериологический, серологический (РМА, ИФА), молекулярно-генетический (метод ПЦР) за период 2018-2020 гг. В ветеринарные лаборатории Российской Федерации поступило для исследований на лептоспироз 225 582 пробы сыворотки крови от лошадей, по которым проведено исследований в РМА - 1 516 087, в ИФА - 1 039, положительно реагировали - 12 770 проб. Анализ отчетных данных за последние три года по форме 4-вет показал, что эпизоотическая ситуация по лептоспирозу лошадей в Российской Федерации остается сложной. Уровень инфицирования лошадей лептоспирами в среднем составил 5,7%. В 2020 году наибольшее количество положительно реагирующих в РМА выявлены на территории 9 регионов, среди исследованных животных специфические лептоспирозные антитела обнаружены от 1,6% до 65,0% случаев. Доминирующие серогруппы лептоспир у лошадей в Российской Федерации: Icterohaemorrhagiae и Grippotyphosa, соответственно, до 34% и 19,7%. За последние три года методом темнопольной микроскопии исследовано 1 907 проб мочи от лошадей, живые лептоспиры обнаружены только в 1 случае. Для улучшения эпизоотической ситуации по лептоспирозу лошадей в России следует расширить количество бактериологических и молекулярно-биологических исследований для своевременного выявления возбудителя болезни -L. interrogans. В неблагополучных регионах необходимо применять противолеп-тоспирозные вакцины в соответствии со специфической этиологической структурой лептоспироза животных, актуальной для конкретной территории.
Ключевые слова: лошади, лептоспироз, возбудитель, лептоспиры, серогруп-па, лабораторные исследования, методы, эпизоотическая ситуация, вакцина, регионы России.
Сведения об авторах:
Белоусов Василий Иванович, доктор ветеринарных наук, профессор, главный научный сотрудник отдела координации научно-исследовательских работ ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, д. 23; тел.: 8-495-7000137; e-mail: science@cnmvl.ru.
Шарыпов Андрей Сергеевич, кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник отдела координации научно-исследовательских работ ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, д. 23; тел.: 8-495-7000137; e-mail: science@cnmvl.ru.
Зюзгина Светлана Викторовна, старший научный сотрудник ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, д. 23; тел.: 8-495-7000137; e-mail: science@cnmvl.ru.
Девришова Зелиха Султановна, научный сотрудник отдела молекулярных исследований ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, д. 23; тел.: 8-495-7000137; e-mail: zul3646@yandex.ru.
Ответственный за переписку с редакцией: Нурлыгаянова Гульнара Ахметовна, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник отдела координации научно-исследовательских работ ФГБУ «Центральная научнометодическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, д. 23; тел.: 8-495-7000137; e-mail: science@cnmvl.ru.
http://vetkuban.com/num5_202106.html