Белянин С.А., Васильев А.П., Колбасов Д.В., Цыбанов С.Ж., Балышев В.М., Куриннов В.В.
ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной
вирусологии и микробиологии
Черных О.Ю. Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория
Африканская чума свиней (АЧС) - вирусная геморрагическая болезнь домашних и диких европейских свиней (семейство Suidae), характеризующаяся высокой заболеваемостью и смертностью. Болезнь имеет огромное значение в эпи-зоотологическом, экономическом и социальном отношении, так как её ликвидация основана на применении стратегии stamping-out и уничтожении большого количества подозреваемых в заражении животных [4].
После объявления МЭБ в 2007 году вспышек АЧС в Грузии, затем Армении и Азербайджане, примерно в октябре - ноябре того же года вирус был занесён в популяцию диких свиней на территории РФ - Республики Чечня [5]. В течение последующих лет болезнь уже регистрировали во всех административных регионах территорий Южного и Северо-Кавказского федеральных округов, как среди диких, так и домашних свиней [2,3].
Изучение изолятов вируса и вызываемого ими типа инфекционного процесса необходимы для уточнения стратегии использования лабораторных методов диагностики и мониторинговых исследований.
Целью наших исследований явилось определение вирулентности полевых изолятов вируса АЧС, выделенных при вспышках в период 2007-2010 годов и формы течения болезни в эксперименте. Материалы и методы
Для изучения наибольший интерес представляли изоляты вируса АЧС, выделенные от инфицированных диких и домашних свиней в разные сроки эпизоотии АЧС на Кавказе в период 2007-2010 годов (табл.1)
Таблица 1. Происхождение изолятов вируса АЧС
| N° | Номер изолята/ номер региона | Дата вспышки | Восприимчивые животные | Географическое происхождение |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 001/20 | сентябрь-ноябрь 2007 | Дикие свиньи (павшие) | Чечня, Шатойский р-н, с. Шаро-Аргун (лесной массив) |
| 2 | 041/15 | июнь 2008 | Домашние свиньи (павшие) | Северная Осетия, Алагирский р-н, с. Црву |
| 3 | 116/05 | август-сентябрь 2009 | Дикие свиньи (павшие) | Дагестан, Кизлярский р-н, Брянское охотохозяйство |
| 4 | 154/20 | ноябрь 2009 | Дикие свиньи (отстрел) | Чечня, Наурский район, ст. Калиновская |
| 5 | 162/23 | январь 2009 | Дикие свиньи (павшие) | Краснодарский край, Туапсинский р-н, Туапсинское охотохозяйство, уч. N° 31 |
| 6 | 163/23 | февраль 2010 | Домашние свиньи (павшие) | Краснодарский край, Крыловской р-н, c. Шевченковское, ЗАО "Макаренко Г.Н." |
Изоляты для введения использовали либо в виде крови, либо в виде экстракта 20% суспензий селезёнок инфицированных АЧС свиней. Инфекционную активность вируса определяли титрованием в первичной 2-х суточной культуре клеток костного мозга свиней (ККМС).
Для экспериментального заражения использовали 6 свиней крупной белой породы (живой массой 25-30 кг) и 4 диких (живой массой 40-50 кг). Вируссодержащий материал вводили внутримышечно по 1-2 мл, перорально - по 5 мл. Ежедневно измеряли температуру тела, у диких свиней с этой целью использовали дистанционный лазерный измеритель температуры поверхностей testo 830-T4. Наличие вируса АЧС в пробах крови и органов подтверждали реакцией прямой иммунофлуоресценции (РПИФ) и полимеразной цепной реакцией (ПЦР), специфических антител - реакцией непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ).
Титр вируса вычисляли по схеме Рида и Менча (с модификацией по Ошмарину) и выражали в lg ГАЕ (ГАЕ50/объём).
Результаты исследований. Характеристики полевых изолятов вируса АЧС до и после экспериментального заражения домашних и диких свиней Первой частью исследований было сравнение титров вируса АЧС в вируссодержащих материалах испытуемых полевых изолятов, которые вводили животным, и титров вируса в крови после их гибели, а также серологические исследования для обнаружения специфических антител.
Из данных таблицы 2 видно, что содержание инфекционного вируса в исходных пробах органов было примерно одинаково низким (1-2 lg ГАЕ50/мл), за исключением изолята N° 163/23, однако уровень виремии у экспериментально заражённых свиней был высоким, в пределах 5,5-7,0 lg ГАЕ50. Поскольку во всех случаях, за исключением изо-лята N°163/23, пробы были получены от павших животных и в тёплое время года - причиной низких титров вируса была инактивация инфекционности. Специфические антитела к вирусу АЧС отсутствовали при исследовании полевого и экспериментально полученного материалов.
Таблица 2. Инфекционная активность вирусных изолятов АЧС в полевых и "экспериментальных" пробах
| N° п/п | Номер изолята | Характеристики полевых изолятов: | После экспериментального заражения: | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| вирус lg ГАЕ 50/см3 | ат* | Восприимчивые животные | Виремия lg ГАЕ 50/см3 | РПИФ | ПЦР | ат* | ||
| 1 | 001/20 | 1-2 |
| Домашние свиньи | 6,5±0,10 | + | + |
|
| 2 | 041/15 | 1-2 |
| Домашние свиньи | 7,0±0,20 | + | + |
|
| 3 | 116/05 | 1-2 |
| Домашние свиньи | 6,5±0,10 | + | + |
|
| 4 | 154/20 | 1-2 |
| Домашние свиньи | 6,0±0,20 | + | + |
|
| 5 | 162/23 | 1-2 |
| Домашние свиньи | 5,5±0,10 | + | + |
|
| 6 | 163/23 | 5,0 |
| Домашние свиньи | 6,66±0,13 | + | + |
|
* ат - специфические антитела к вирусу АЧС.
Клинические признаки у экспериментально заражённых домашних свиней.
У животных, зараженных изолятами вируса АЧС, выделенными от диких свиней (N°N° 001/20, 116/05 и 162/23) гипертермия установлена на 3-и сутки после заражения, в дальнейшем отмечали угнетение, снижение аппетита. На 5-е сутки - залеживание, хромота задних конечностей (N° 116/05), а в последующем - нарушение координации движения. У подсвинка, инфицированного изолятом N°162/23, на 6-е сутки отмечали цианоз ушей и кожи в области внутренней поверхности бедра. Гибель животных установлена на 8-12-е сутки после введения.
У подсвинков после введения изолятов домашних циклов (N°N° 041/15, 163/23) клинические признаки заболевания развивались на 3-е сутки после заражения (температура тела 41,0°С и выше) со снижением активности. На 5-6-е сутки наблюдали анорек-сию, угнетение, животные слабо реагировали на внешние раздражители. На 8-е сутки подсвинок, зараженный изолятом N° 041/15, пал. У подсвинка N° 163/23 на 9-10-е сутки в фекалиях обнаружены примесь слизи с кровью, точечные кровоизлияния на коже в области паха, гибель наступила на 11-е сутки.
Клинические признаки у экспериментально заражённых диких свиней
Для определения вирулентных свойств "позднего" изолята N° 154/20 вируса АЧС, прошедшего неопределённое количество пассажей в популяциях диких свиней (табл.1), одной из 4-х диких свиней (N° 1) вирус ввели внутримышечно, а оставшиеся три (N°N° 2,3,4) содержались на контакте. Первые клинические признаки у животного N°1 наблюдали на 3-е сутки после введения вируса - угнетение, повышение температуры тела, на следующие сутки затрудненное дыхание, а на 5-е сутки - гибель.
У "контактных" животных клинические признаки обнаружены на 8-е сутки (отсчёт после заражения животного N° 1), длительность инкубационного периода примерно 4 сут у всех животных (отсчёт после гипертермии животного N° 1). Повышение температуры тела выше 40°С обнаружили на 6-7 сутки, а на 9-е сутки животные скучились, дыхание затрудненное с хрипами, нарушение координации движения задних конечностей. На 10-е сутки все животные пали.
Патологоанатомические изменения
Основные патологоанатомические изменения выражены у домашних свиней при заражении изолятами, циркулирующими в РФ, и характеризуются общим геморрагическим синдромом в органах и тканях, отеком легких и язвенными поражениями на коже.
Патологические изменения у кабанов при АЧС являются схожими с таковыми у домашних свиней, различие в том, что в органах менее выражен геморрагический синдром.
Заключение
Вирулентность - главный определитель формы инфекционного процесса на знании которого в последующем определяется выбор метода для обнаружения болезни. Так, средние инкубационные периоды составили 3,7 (2,5-5,0) суток, инфекционные периоды (продолжительность болезни) - 6,8 (5-8,6) суток, выраженные изменения во всех органах, характеризующиеся геморрагическим синдромом, постоянно высокий уровень виремии, отсутствие специфических антител и 100%-ная летальность свидетельствует о высокой инфекционности и "способности" российского вируса вызывать острую форму течения болезни. На основании данных, представленных в предыдущих исследованиях [1] и в данной статье, все испытанные изоляты являются высоковирулентными для домашних и диких свиней.
Список литературы
Реферат
Африканская чума свиней - одна из наиболее значимых болезней свиней, имеющая серьезные социально-экономические последствия для людей. Трансконтинентальный занос вируса АЧС из Африки на Кавказ в 2007 году, а затем его интродукция на территорию РФ является ярким подтверждением реальной угрозы опасных инфекционных болезней животных, независимо от их природного или географического происхождения. В данной статье представлены оценки вирулентности 6-ти полевых изолятов вируса АЧС, причинных агентов вспышек болезни в Северо-Кавказском и Южном федеральных округах в 20072010 годах. Оценка вирулентности циркулирующих изолятов вируса АЧС для домашних и диких свиней и изучение вызываемого ими типа инфекционного процесса имеют большое значение как для уточнения стратегии использования лабораторных методов диагностики, так и мониторинговых исследований на территории РФ.
Ключевые слова: африканская чума свиней, изоляты вируса АЧС, вирулентность, патогенность, домашние свиньи, дикие свиньи.
Сведения об авторах
Васильев Александр Павлович, к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории диагностики; ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии; 601120, г. Покров, Петушинский район Владимирской области; тел.: 8 (49243) 6-21-25
Колбасов Денис Владимирович, д.в.н., профессор, директор ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии; 601120, г. Покров, Петушинский район Владимирской области; тел.: 8 (49243) 6-21-25
Цыбанов Содном Жемьянович, д.б.н., профессор, заведующий лабораторией биофизики; ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии; 601120, г. Покров, Петушинский район Владимирской области, тел.: 8 (49243) 6-21-25
Балышев Владимир Михайлович, д.в.н., профессор, заведующий лабораторией музейных штаммов; ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии; 601120, г. Покров, Пету-шинский район Владимирской области; тел.: 8 (49243) 6-21-25
Куриннов Виктор Васильевич, д.в.н., профессор, заведующий лабораторией диагностики; ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии, 601120, г. Покров, Петушинский район Владимирской области; тел.: 8 (49243) 6-21-25
Черных Олег Юрьевич, директор Кропоткинской краевой ветеринарной лаборатории; 352380, Краснодарский край, г. Кропоткин, ул. Красноармейская, дом 303; тел.: 8(861-38) 65485
Ответственный за переписку с редакцией: Белянин Сергей Александрович, аспирант ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук; 601120, г. Покров, Петушинский район Владимирской области; тел.: 89209447975 E-mail: sbeljanin@list.ru
UDC 619:616.98:578.842.1
VIRULENCE OF AFRICAN SWINE FEVER ISOLATES
Belyanin S.A., Vasilev A.P., Kolbasov D.V., Tsybanov S.Zh., Balyshev V.M.,
Kurinnov V.V., Chernykh O.Yu.
Summary
Data on outbreaks of African swine fever in the Caucasus in the period of 2007-2010, as well as information about the ASF virus isolates isolated from infected domestic and wild pigs, which are of greatest interest to the study, are given in the article. The article indicates the data on clinical signs and pathologic changes in domestic and wild pigs. Authors selected 6 highly virulent ASF virus field isolates that caused outbreaks in the North Caucasian and Southern federal districts in 2007-2010. This study is important for monitoring investigations and strategies to select laboratory diagnostic methods.
Key words: African swine fever, ASF virus isolates, virulence, pathogenecity, domestic pigs, wild pigs.
References
Author affiliation
Vasilev Aleksandr P., Ph.D. in Biology, senior research assistant of the laboratory of diagnostics of the All-Russian Scientific-Research Institute for Veterinary Virology and Microbiology; Pokrov, Petushinsky district, Vladimir region, 601120; tel.: 8 (49243) 6-21-25.
Kolbasov Denis V., D.Sc. in Veterinary Medicine, professor, director of the All-Russian Scientific-Research Institute for Veterinary Virology and Microbiology; Pokrov, Petushinsky district, Vladimir region, 601120; tel.: 8 (49243) 6-21-25.
Tsybanov Sodnom Zh., D.Sc. in Biology, professor of the laboratory of biophysics of the All-Russian Scientific-Research Institute for Veterinary Virology and Microbiology; Pokrov, Petushinsky district, Vladimir region, 601120; tel.: 8 (49243) 6-21-25.
Balyshev Vladimir M., D.Sc. in Veterinary Medicine, professor of the laboratory of museum strain sof the All-Russian Scientific-Research Institute for Veterinary Virology and Microbiology; Pokrov, Petushinsky district, Vladimir region, 601120; tel.: 8 (49243) 6-21-25.
Kurinnov Victor V., D.Sc. in Veterinary Medicine, professor of the laboratory of diagnostics of the All-Russian Scientific-Research Institute for Veterinary Virology and Microbiology; Pokrov, Petushinsky district, Vladimir region, 601120; tel.: 8 (49243) 6-21-25.
Chernykh Oleg Yu., director of the Kropotkin regional veterinary laboratory; 303, Krasnoarmeyskaya st., Kropotkin, Krasnodar region, 352380; tel.: 8(861-38) 65485.
Responsible for correspondence with the editorial board:Belyanin Sergey A., post-graduate student of the All-Russian Scientific-Research Institute for Veterinary Virology and Microbiology; Pokrov, Petushinsky district, Vladimir region, 601120; tel.: 8 920 9447975; e-mail: sbeljanin@list.ru.
http://vetkuban.com/num5_20113.html