УДК: 619.616.9:036.3
DOI 10.33861/2071-8020-2024-4-3-5
Пчельников А. В., Коба И. С. Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины
и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина», г. Москва
Черных О. Ю., Кривонос Р. А. Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего образования «Кубанский государственный аграрный университет
имени И. Т. Трубилина», г. Краснодар
Осипян Э. А., Акбаева Л. М., Чомаева Л. М. Федеральное государственное бюджетное образовательное
учреждение высшего образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и
биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина», г. Москва
Одной из особенностей возбудителя инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (далее, ИРТ КРС) является его способность встраиваться в геном инфицированной клетки хозяина в периферической нервной системе и, таким образом, длительно сохраняться в организме животного будучи недоступным для иммунной системы. Такое состояние вируса называется персистенцией [2, 3, 4]. Персистентная инфекция может возникнуть после первичного контакта животного с возбудителем болезни, но чаще формируется после клинического переболевания в период реконвалесценции [8]. При снижении резистентности или возникновении иммунодефицитного состояния животного возможна реактивация персистирующего вируса, сопровождающаяся явной (с проявлением клинических признаков) или латентной (без проявления клинических признаков) формой инфекции и выделением возбудителя во внешнюю среду [3, 4]. Реактивация персистирующего вируса может быть спровоцирована разными факторами, приводящими к возникновению иммунодефицитов, в том числе: стрессы («травматический», «транспортный», «алиментарный», «технологический» и стресс при отеле), инфицирование возбудителями парагриппа-3, вирусной диареи, лейкоза, респираторно-синцитиальной инфекции, коронавирусной дизентерии, герпесвирусной инфекции 4-го типа; бесконтрольное применение антибиотиков и сульфаниламидов в больших дозах; микотоксикозы [13, 14, 15].
Основной мерой специфической профилактики ИРТ КРС в мире и в России является вакцинация. Но правильно и своевременно проведенная вакцинация также не предотвращает персистенцию, в случае инфицирования вакцинированных животных полевыми вариантами вируса [7, 9].
По данным литературы наиболее опасными источниками возбудителя инфекции при ИРТ КРС считаются племенные быки-доноры спермы, инфицированные возбудителем этой болезни [6]. А.Ф. Шуляк указывает, что персистентно-инфицированные быки-производители, вакцинированные против ИРТ КРС, чаще выделяют вирус со спермой по сравнению с не вакцинированными. Таким образом вакцинация племенных быков против ИРТ КРС, без использования DIVA-стратегии, только маскирует вирусоносителей, снижая возможность выявления таких животных серологическими методами исследования [5, 10].
В соответствии с последним абзацем главы 1 Ветеринарных требований при ввозе на таможенную территорию Евразийского экономического союза и (или) перемещения между государствами-членами племенного и пользовательского крупного рогатого скота: «В отношении племенных животных дополнительно проводятся исследования на инфекционный ринотрахеит и вирусную диарею крупного рогатого скота (если животные не были предварительно вакцинированы)» [1].
Учитывая свойство возбудителя ИРТ КРС персистировать в организме восприимчивых животных, с учетом того, что вакцинация не предотвращает персистенцию вируса, была сформулирована цель настоящего исследования - проанализировать возможности заноса возбудителя ИРТ КРС из-за рубежа при ввозе племенных животных с разными статусами вакцинации против ИРТ КРС.
Материалы и методы исследований. Для изучения вероятности заноса эпизоотических штаммов вируса ИРТ с экспортируемым в Россию крупным рогатым скотом случайным образом были выбраны две партии животных с разным статусом вакцинации против ИРТ КРС.
Первая партия животных, в количестве 9 голов, ввезена из Нидерландов. Животные против ИРТ КРС на территории страны-импортера не вакцинировались.
Вторая партия животных, в количестве 80 голов, ввезена из Дании. Животные за месяц до ввоза на территорию России (в стране-импортере) были вакцинированы против ИРТ КРС вакциной Biobos IBR Marker (2 мл/гол.). Указанная вакцина содержит в своем составе аттенуированный штамм вируса ИРТ КРС, маркированный путем делеции гена гликопротеина Е.
Отбор проб. Пробы крови для получения сыворотки отбирались у животных обеих партий ветеринарными врачами государственной ветеринарной службы в период профилактического 21 дневного карантина. У животных 1 партии взятие крови проводилось двукратно на 3 и 20 дни карантина. У животных 2 партии -однократно на 20 день карантина.
Серологические исследования проводили тремя методами: реакция нейтрализации (далее, РН), реакция торможения гемагглютинации (далее, РТГА) и иммуноферментный анализ (далее, ИФА).
РН с постоянной дозой вируса проводили микрометодом, используя полистероловые 96-луночные культуральные планшеты. Каждую пробу сыворотки исследовали в 4 повторах. Окончательный титр рассчитывался по методу Кербера.
РТГА проводили микрометодом используя полистероловые 96-луночные планшеты с использованием 1% суспензии эритроцитов морской свинки. Каждую пробу сыворотки исследовали в 4 повторах. Результат учитывали визуально в крестах. Окончательный титр рассчитывался по методу Кербера.
ИФА проводился в ФГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория» с использованием диагностического набора ID Screen IBR gE Competition (ID.vet, Франция), предназначенного для обнаружения антител к гликопротеину gE eupycf BoHV-1 в сыворотке или плазме крови крупного рогатого скота.
Статистическая обработка результатов проводилась в программе Microsoft Excel 2017.
Результаты исследований и их обсуждение. Исследования сыворотки крови, полученной от 9 племенных быков-производителей, ввезенных из Голландии, двумя серологическими методами (РН и РТГА) позволили детектировать антитела к возбудителю ИРТ КРС у трех животных (табл. 1).
Таблица 1 Результаты параллельных серологических исследований животных первой партии
| № | Результат РН, log2 | Результат РТГА, log2 |
|---|---|---|
| 1. | - | - |
| 2. | - | - |
| 3. | - | - |
| 4. | - | - |
| 5. | 1,88±0,13* | 4,93±0,16 |
| 6. | - | - |
| 7. | 2,25±0,14* | 5,81±0,06* |
| 8. | 1,81±0,11* | 4,75±0,18 |
| 9. | - | - |
Примечание: * - p < 0,05
Результаты серологических исследований парных проб сыворотки, отобранных от животных второй партии (в РН с постоянной дозой вируса), позволили установить прирост титра антител во вторых пробах сыворотки, который может быть связан с недавней вакцинацией (вакцинация животных проводилась за месяц до ввоза на территорию России).
Дополнительными серологическими исследованиями с использованием DIVA-стратегии, проведенными в ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», антитела к gE не были детектированны ни у одного животного. Таким образом можно утверждать о стопроцентном поствакцинальном происхождении антител у всех животных исследованной партии.
Для оценки официального статуса Голландии и Дании по ИРТ КРС сделали выгрузку отчетной информации с информационного портала WAHIS, размещенного на официальном сайте ВОЗЖ за 11 лет 2012-2023 гг. В течение всего указанного периода времени Дания официально благополучна по ИРТ КРС, в то время как Голландия ежегодно представляла в ВОЗЖ информацию о неблагополучии по этой болезни на всей территории страны [16].
Животные, ввезенные из Голландии (9 голов племенных быков-производителей), не были вакцинированы против ИРТ КРС. В соответствии с последним абзацем главы 1 Ветеринарных требований при ввозе на таможенную территорию Евразийского экономического союза и (или) перемещения между государствами-членами племенного и пользовательского крупного рогатого скота [1] на территории страны импортера и после ввоза на территорию Российской Федерации животные были исследованы на наличие антител к вирусу ИРТ КРС с отрицательными результатами. Взятие проб крови для плановых исследований было проведено на 3-й день пребывания животных на территории Российской Федерации. Взятие проб для наших исследований проводилось на 20-й день после ввоза животных в Россию. В результате нам удалось детектировать антитела к вирусу ИРТ КРС у 3-х животных. Факт детекции антител к возбудителю указанной болезни у одних и тех же животных двумя серологическими методами, которые независимо друг от друга проводили разные соавторы, исключает возможность получения ложноположительных результатов. Видимо животные, в сыворотке крови которых детектированы антитела к вирусу ИРТ КРС, были инфицированы на территории страны-импортера, тем более, что Голландия, по данным ВОЗЖ, стационарна неблагополучна по ИРТ КРС [16]. Возбудитель болезни в организме указанных животных скорее всего находился в состоянии персистенции и именно этим можно объяснить отрицательные результаты серологических исследований, проведенных на территории страны-импортера и в России в первые дни после ввоза животных. Такое заключение согласуется с мнением многих авторов, описывающих явление персистенции возбудителя ИРТ КРС [3, 4, 7, 9, 11]. Транспортный, кормовой, климатический и ряд других стрессов, которым животные подверглись в ходе их перемещения из Голландии в Россию, способствовали реактивации вируса и началу иммунного ответа организма на циркуляцию возбудителя, который нам и удалось зафиксировать, проведя отбор проб крови для исследования на 20-й день пребывания животных на территории России.
Вторая партия крупного рогатого скота была ввезена из Дании (80 голов племенных нетелей). По данным ВОЗЖ Дания в течение последних 11 лет благополучна по ИРТ КРС [16]. В период карантина на территории страны-импортера всем животным была проведена вакцинация против этой болезни с использованием маркированной вакцины Biobos IBR Marker. Спустя месяц после вакцинации животные были импортированы на территорию России и поставлены на карантин. В соответствии с последним абзацем главы 1 Ветеринарных требований при ввозе на таможенную территорию Евразийского экономического союза и (или) перемещения между государствами-членами племенного и пользовательского крупного рогатого скота, поскольку были ввезены племенные животные вакцинированные против ИРТ КРС, исследования на наличие антител к возбудителю этой болезни ни на территории страны-импортера, ни в Российской Федерации не проводились [1]. Исследование парных проб сыворотки крови, проведенное нами в реакции нейтрализации с постоянной дозой вируса, позволило установить пророст титров антител во второй пробе сыворотки в среднем в 2 раза у всех животных исследуемой партии. Учитывая, что с даты вакцинации животных против ИРТ КРС до даты отбора второй пробы сыворотки крови прошло немногим больше 1,5 месяцев, предположить об инфекционном происхождении антител у животных невозможно [12]. В ходе независимых серологических исследований, направленных на детекцию антител к гликопротеину Е (gE), по гену которого маркирован вакцинный штамм вируса, проведенных в ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», получены отрицательные результаты. Таким образом мы можем с уверенностью утверждать, что антитела к возбудителю ИРТ КРС у всех животных исследуемой партии имеют поствакцинальное происхождение [12].
По результатам исследования животных двух партий с разным статусом вакцинации против ИРТ КРС, ввезенных из стран с разным официальным статусом по этой болезни, для повышения биологической безопасности мы рекомендуем:
1. В случае ввоза животных, вакцинированных маркирова-ными вакцинами, независимо от требований последнего абзаца главы 1 Ветеринарных требований при ввозе на таможенную территорию Евразийского экономического союза и (или) перемещения между государствами-членами племенного и пользовательского крупного рогатого скота [1], все равно проводить серологические исследования, по результатам которых можно доказать причину происхождения антител у животных (посвакци-нальная или постинфекционная).
2. В случае ввоза животных, не вакцинированных против ИРТ КРС, пробы крови для серологического исследования на наличие антител к этому возбудителю, желательно отбирать в заключительные сроки профилактического карантина (18-20 дни пребывания животных на территории России).
Список литературы:
1. Ветеринарные требования при ввозе на таможенную территорию Евразийского экономического союза и (или) перемещении между государствами-членами племенного и пользовательного крупного рогатого скота // Единые ветеринарные (ветеринарно-санитарные) требования, предъявляемые к товарам, подлежащим ветеринарному контролю (надзору), утвержденные решением Комиссии Таможенного союза от 18 июня 2010 г. № 314. Глава 1. С. 5-6.
2. Волкова, В. В. Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота / В. В. Волкова, О. Г. Петрова // Молодежь и наука. 2018. № 3. С. 5.
3. Герпесвирусные болезни животных / Н. И. Закутский, И. Ю. Хухоров, В. И. Жестерев [и др.] // 2003. 282 с. - ISBN 5-94210-021-7.
4. Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота / А. Г. Глотов, А. Ф. Шуляк, Т. И. Глотова, А. Н. Сергеев // Издательско-полиграфическое объединение Юпитер. 2006. 196 с. ISBN 5-9657-0066-0.
5. Курченко, Г. А. Инфекционный ринотрахеит у племенных быков на племпредприятиях / Г. А. Курченко, А. Ф. Шуляк, Г. Н. Величко // Ветеринария. 2016. № 11. С. 7-11.
6. Меры профилактики и борьбы с инфекционным ринотрахеитом - инфекционным пустулезным вульвовагинитом КРС в условиях молочного скотоводства / Ю. А. Костыркин, В. А. Мищенко, И. В. Нестеренко [и др.] // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - 2005. - Т. 3. - С. 171-183.
7. Мищенко, В. А. Проблема борьбы и профилактики инфекционного ринотрахеита - инфекционного пустулезного вульвовагинита крупного рогатого скота / В. А. Мищенко, Г. А. Джаилиди, О. Ю. Черных // Ветеринария Кубани. 2012. № 6. С. 3-5.
8. Петрова, О. Г. Меры профилактики и борьбы с острыми респираторными заболеваниями крупного рогатого скота в племенных хозяйствах / О. Г. Петрова, Ю. А. Кирсанов, В. С. Мымрин // Аграрный вестник Урала. 2011. № 2 (81). С. 18-19.
9. Сюрин, В. Н. Вирусные болезни животных / В. Н. Сюрин, А. Я. Самуй-ленко, Б. В. Соловьев // ВНИТИБП. 1998. 928 с.
10. Шуляк, А. Ф. Характеристика изолятов BoHV-1, выделенных от племенных быков / А. Ф. Шуляк, Г. Н. Величко // Молекулярная диагностика. 2017. С. 380.
11. Юров, К. П. Контроль и пути оздоровления скота племенных хозяйств и племенных предприятий от инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи / К. П. Юров, М. И. Гулюкин // Российская сельскохозяйственная наука. 2018. № 1. С. 59-63.
12. Infectious bovine rhinotracheitis/ infectious pustular vulvovaginitis // Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 2021. -Р. 1139-1142.
13. Ludwig H. Bovine herpesviruses / The Herpesviruses / Ed. B. Roizman. -New York; London: Charter, 1982. - P. 135-214.
14. Ludwig H. Herpesviruses of bovidae: The characterization, grouping and role of different types, including viruses / / CEC Symp. on «Latency of herpesviruses», Tubingen, 21-23 Sept. 1982. - 1984. - P. 171-189.
15. Meyer H., Mayr A., Bachmann P.A. e. а. Schutzimpfung von latent IBR-IPV-Virus Infizierten Bullen mit einer Vakzine aus inaktiviertem IBR-Virus / / Tierarztl. Umsch. - 1985. - Bd. 40. - S. 974-985.
16. WAHIS: World Animal Health Information System. - https://wahis.woah.org/#/home
Резюме. Возбудитель инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота может длительное время персистировать в организме восприимчивых животных, независимо от их статуса вакцинации против этой болезни. По сообщениям многих авторов, именно ввоз персистентно инфицированных возбудителем ИРТ КРС животных в Россию, является одним из основных путей заноса новых эпизоотических штаммов этого вируса из-за рубежа. В рамках настоящей работы авторами проанализирована возможность заноса возбудителя ИРТ КРС при ввозе крупного рогатого скота с разным статусом вакцинации против указанной болезни из зарубежных стран с разными официальными статусами благополучия по данным ВОЗЖ. В конце работы авторы обосновывают рекомендации по исследованию ввезенных животных на территории Российской Федерации, которые позволят минимизировать риск ввоза животных, персистентно инфицированных возбудителем инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
Ключевые слова: инфекционных ринотраехит, крупный рогатый скот, импорт, вакцинация, DIVA-стратегия.
Сведения об авторах:
Коба Игорь Сергеевич, доктор ветеринарных наук, заведующий кафедрой эпизоотологии и организации ветеринарного дела ФГБОУ ВО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К. И. Скрябина»; 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23; e-mail: epizootology@mgavm.ru.
Черных Олег Юрьевич, профессор, доктор ветеринарных наук, профессор кафедры микробиологии, эпизоотологии и вирусологии ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И. Т. Трубилина»; 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13; e-mail: gukkvl50@kubanvet.ru.
Кривонос Роман Анатольевич, кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры паразитологии, ветсанэкспертизы и зоогигиены ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И. Т. Трубилина»; 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.
Осипян Эдуард Артурович, аспирант кафедры эпизоотологии и организации ветеринарного дела ФГБОУ ВО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К. И. Скрябина»; 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23; e-mail: edik.osipian@yandex.ru.
Акбаева Любовь Махмудовна, научный сотрудник НИЛ биотехнологии и прикладной иммунологии ФГБОУ ВО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К. И. Скрябина»; 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23.
Чомаева Лилия Магометовна, научный сотрудник НИЛ биотехнологии и прикладной иммунологии ФГБОУ ВО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К И. Скрябина»; 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23.
Ответственный за переписку с редакцией: Пчельников Александр Владимирович, кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры эпизоотологии и организации ветеринарного дела ФГБОУ ВО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К. И. Скрябина»; 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23; e-mail: vetdr-mom@list.ru.
http://vetkuban.com/num4_202401.html