УДК 636.087.8:636.92
Омельченко Н.Н. ГКУ КСББЖ "Краснодарская", г. Краснодар
Существует множество причин, из-за которых происходит изменение соотношения нормальной микрофлоры пищеварительного тракта у животных. Эти изменения представляют собой состояние экосистемы, при котором нарушается функционирование всех её составных частей организма животного, его микрофлоры и окружающей среды, а также механизмов их взаимодействия, что ведет к возникновению заболеваний.
При нарушении технологии содержания и кормления кроликов понижается естественная резистентность и устойчивость к неблагоприятным факторам внешней среды. С целью предупреждения данных нарушений в организме в последние годы стали широко использоваться в практике ветеринарной медицины и животноводства пробиотики.
В связи с этим изучение воздействия пробиотических препаратов на физиологическое состояние организма животных имеет как теоретическое, так и практическое значение.
В источниках литературы имеется много сведений, где указано, что использование пробиотиков способствует оптимизации метаболических процессов в организме животных, освещена эффективность, белково-аминокислотный статус, морфологические и биохимические показатели при применении различных биологически активных добавок и пробиотиков [9, 11, 14, 15].
Целью работы являлось изучение влияния пробиотической добавки к корму "Бацелл-М", состоящей из микробной массы живых бактерий: Bacillus subtilis, Lactobacillus paracasei, Enterococcus faecium на динамику роста, морфологические, иммунологические и биохимические показатели крови у кроликов.
Объект исследования. С начала 2015 года были организованы и проведены научно-хозяйственные опыты на кроликоматках и молодняке кроликов до трёх месячного возраста.
Для проведения опытов были подобраны молодые матки-аналоги по возрасту, живой массе и породности (бабочка). Проведен уравнительный период 10 дней. Для опыта были сформированы 3 группы кроликоматок по 4 головы в каждой, со средней живой массой 4,5-4,6 кг. Случки их проведены в сжатые сроки - с 5 по 9 февраля. Взвешивание кроликов проводилось при рождении и по периодам выращивания. В 50-ти дневном возрасте был проведен отъем крольчат от маток и продолжен опыт до 3-х месячного возраста. В 20-дневном, 2-х месячном и в конце опыта - 3-х месячном возрасте проводились индивидуальные перевески кроликов.
Кормление животных осуществлялось по схеме исследований: первая (контрольная) группа кроликов получала хозяйственный (основной) рацион (ОР). Состав ОР: зерно кукурузы, пшеницы, ячменя, жмых подсолнечный, сено люцерновое и макроэлементы.
Второй (опытной) группе скармливали основной рацион (ОР) с той разницей, что в корм вводили добавку кормовую пробиотическую "Бацелл-М", из расчёта 6 г/ кг корма. Добавка кормовая пробиотическая "Бацелл-М" разработана в 2014 году кубанскими учеными и сотрудниками ООО "Биотехагро", г. Тимашевск Краснодарского края.
Третья (опытная) группа получала полноценные комбикорма (ПК), с добавлением добавка кормовой пробиотической "Бацелл-М" (6 г/ кг).
Комбикорма представляют собой приготовленные по специальным рецептам смеси различных кормов в измельчённом виде, а, следовательно, лучшем для усвоения виде. Полнорационные (полноценные) комбикорма обычно гранулируют [13].
ПК были предоставлены заказчиком ООО "Новые комбинированные корма" ст. Тбилисская: гранулированный комбикорм для маток с травяной мукой и ПК с травяной мукой для молодняка с 30-ти до 120-ти дневного возраста.
Животные всех опытных групп получали корма вволю. Ежедневно проводился учёт поедаемости и расхода кормов. Были проведены все необходимые ветеринарные обработки животных и мест их содержания.
Материалом исследований стали образцы крови кроликов на выращивании, взятые в 90 дневном возрасте. Кровь для исследования отбирали в серологические и гематологические пробирки, путем прокола краевой ушной вены кроликов инъекционной иглой. В лабораторию кровь доставляли в день её взятия. Количество образцов - по 3 из каждой группы.
При исследовании крови изучали морфологический состав и активность иммунитета (ФГБУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт) и биохимический состав (ФГБНУ Северо-Кавказский научно-исследовательский институт животноводства).
Клинико-физиологическое состояние кроликов определяли путем ежедневного их осмотра. Внимание обращали на их поведение, поедаемость корма, состояние шерстного покрова. Живую массу определяли путем индивидуального взвешивания.
Получаемый в опытах цифровой материал обработали по методикам, описанным в литературе [7], с применением персонального компьютера и пакета прикладных программ (Microsoft Excel). Разницу в значениях считали достоверной при: * - р > 0,05; ** р < 0,01 и *** р < 0,001.
Результаты и обсуждения. Основные результаты эксперимента представлены в таблицах 1, 2, 3.
Таблица 1. Показатели выращивания кроликов при использовании пробиотической добавки к корму "Бацелл-М"
| Показатели, грамм | Группа | ||
|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | |
| Средняя живая масса при рождении | 49,42±0,75 | 48,75±0,52 | 50,5±0,5 |
| Средняя живая масса в 20-дневном возрасте | 288,94±1,49 | 308,23±0,75*** | 402,31±0,53*** |
| Средняя живая масса в 2 мес. возрасте | 1319±0,024 | 1478±0,06* | 1829±0,06*** |
| Среднесуточный прирост 2 мес. возраста | 22,13±0,51 | 24,24±1,05 | 29,84±0,93*** |
| В % к контролю до 2-х месячного возраста | 100 | 110 | 135 |
| Средняя живая масса в 3 мес. возрасте | 2357±0,02 | 2588±0,06** | 3060±0,04*** |
| В % к контролю | 100 | 110 | 130 |
| Среднесуточный прирост 3 мес. возраста | 25,675±0,25 | 28,33±0,69** | 33,29±0,37*** |
| В % к контролю до 3-х месячного возраста | 100 | 110 | 130 |
Здесь и далее: * - р > 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001
Из таблицы 1 видно, что среднесуточный прирост 2 и 3 опытных
групп больше контрольной (р < 0,01, р < 0,001) на 10 и 30 %, соответственно. Живая масса к 60 дням у подопытных 2 и 3-й групп составляла 2588±0,06 (р < 0,01) и 3060±0,04 грамм (р < 0,001), соответственно, что так же было выше контроля на 10 и 30 %.
Следует отметить, что поедаемость ПК молодняком кроликов с 2,5-месячного возраста была выше по сравнению с ОР других групп животных.
Таким образом, применение пробиотической добавки к корму "Бацелл-М" при выращивании кроликов сопровождается увеличением среднесуточных приростов массы тела.
Морфологические показатели крови. Известно, что кровь совместно с лимфой и тканевой жидкостью образует внутреннюю среду организма, омывающую все клетки и ткани. По составу крови можно судить о многих процессах протекающих в организме. Состав крови не только определяет состояние животного, но и даёт общее представление относительно приспособленности к условиям среды. Картина крови позволяет наблюдать различ-ные изменения, которые происходят в организме животных под влиянием кормления и содержания, что дает возможность оценить их физиологическое состояние [11, 16].
Кровь включает две части жидкой среды - плазму и взвешенные в ней форменные элементы (тромбоциты, эритроциты и лейкоциты). Содержание форменных элементов может резко меняться при патологических состояниях организма [3]. В первый месяц жизни количество эритроцитов в крови значительно ниже нормы, но с увеличением возраста повышается и к 4-х месячному возрасту приходит в соответствие с нормой [5].
Основной частью эритроцитов является гемоглобин, который обеспечивает дыхательную функцию крови, являясь дыхательным ферментом.
Непосредственными исполнителями иммунных реакций являются лейкоциты. Их назначение - распознавать чужеродные вещества и микроорганизмы, осуществлять борьбу с ними, а также фиксировать информацию о них.
Лимфоциты отвечают за формирование специфического иммунитета и осуществляют иммунный надзор в организме, сохраняют генетическое постоянство внутренней среды. В центральных органах иммунной системы осуществляется первичная дифференцировка так называемых нулевых лимфоцитов с превращением их в Т-лимфоциты (в тимусе), В-лимфоциты (в костном мозге млекопитающих и в фаб-рициевой сумке (bursa Fabricius) у птиц). В периферических органах иммунитета Т-лимфоциты приобретают способность осуществлять иммунный ответ клеточного типа, а В-лимфоциты - гуморальный ответ путём выработки антител [6].
Из общего количества лимфоцитов, циркулирующих в крови и лимфе, примерно 75 % приходится на долю Т-лифоцитов, 15% - на долю В-лимфоцитов и 10 % - на клетки, не относящиеся ни к той, ни к другой группе (нуль-клетки, или К-клетки) [3].
Уровень естественной резистентности определяет степень устойчивости животных к заболеваниям и находится в прямой зависимости от возраста, времени года, условий кормления и содержания.
Результаты лабораторного анализа гематологических и иммунологических показателей представлены в таблице 2.
Таблица 2. Результаты лабораторного анализа гематологических и иммунологических показателей
| Показатель | Группа | Норма (рекомендации лаборатории) | ||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | ||
| Лейкоциты (WBC), 109/л | 5,17±0,857 | 7,87±0,733* | 7,4±0,723 | 5-11 |
| Эритроциты (RBC), 1012/л | 5,027±0,438 | 6,13±0,193* | 6,19±0,14* | 5-8 |
| Гемоглобин (HGB), г/л | 75±9,292 | 82,67±6,489 | 103,67±5,783** | 80-150 |
| Гематокрит (HCT), % | 23,17±2,371 | 24,47±1,848 | 33,2±0,418*** | 33-50 |
| Средний объём эритроцита (MCV), фл | 60,53±0,817 | 56,23±0,884*** | 60,33±0,636 | 40-60 |
| СОЭ, мм/ час | 2,33±0,333 | 1,33±0,333 | 1,67±0,333 | 1-2 |
| ФА (30 мин), % | 41,33±0,667 | 44,3±0,882** | 47±2,517* |
|
| ФИ (30 мин), ед. | 0,65±0,024 | 0,65±0,018 | 0,8±0,018*** |
|
| ЗФ, ед | 1,1±0,059 | 1,27±0,033* | 1,263±0,024* | > 1 |
| КМ, ед | 2,0±0,033 | 2,7±0,344* | 2,71±0,331* |
|
| Т, % | 58,778±1,176 | 60,333±1,764 | 62±1* |
|
| В, % | 27,267±0,504 | 30,8±1,665* | 28,667±1,333 |
|
| Т, 109/л | 1,033±0,176 | 1,31±0,456 | 1,567±0,145* |
|
| В, 109/л | 0,733±0,12 | 0,757±0,171 | 0,81±0,08 |
|
| Т-л % / В-л % | 2,156±0,043 | 1,976±0,159 | 2,176±0,143 |
|
В крови взрослых кроликов варьирование лейкоцитов считается нормальным в пределах 5,5-10 тыс. в 1 мм3, эритроцитов - 4,7-7,5 млн. в 1 мм3, СОЭ 1,5 мм/час, гематокрит 35-45% [1, 2].
Средние показатели лейкоцитов в крови 2 и 3-й подопытных групп находились в пределах физиологической нормы и были выше контроля на 52,3 (р > 0,05) и 43,2%.
Средние показатели эритроцитов и гемоглобина у опытных групп находились в пределах физиологической нормы и были выше контроля на 21,9 (р > 0,05) и 23,1% (р > 0,05) - эритроцитов и на 10,2 и 38,2% (р < 0,001) - гемоглобина соответственно, в то время как показатель гемоглобина у контрольной группы был занижен.
Увеличение количества эритроцитов положительно отражается на развитии иммунного статуса [4].
Оседание эритроцитов (СОЭ) - это свойство эритроцитов осаждаться на дне сосуда при сохранении крови в несвёртывающемся состоянии. СОЭ является неспецифическим показателем состояния крови у животных. Величина СОЭ зависит от многих факторов и в первую очередь от содержания в плазме крови крупномолекулярных белков - глобулинов. У подопытных животных величина СОЭ находилась в пределах физиологической нормы. СОЭ у кроликов контрольной группы оставила 2,33±0,333 мм/час при норме 1-2 мм/час.
Гематокритная величина - объёмное соотношение форменных элементов крови и плазмы, у подопытных кроликов 2-й группы была выше контроля на 5,6%. В третей группе гематокритная величина была выше контроля на 43,5 % (р < 0,001) и соответствовала норме.
Фагоцитарная активность лейкоцитов - это способность фагоцитов захватывать, умерщвлять и переваривать патогенные и условнопатогенные микроорганизмы. Фагоцитарная активность нейтрофилов обычно повышается в начале развития воспалительного процесса. Снижение фагоцитарной активности клеток крови способствует развитию хронического воспалительного процесса и возникновению агрессии против собственных тканей организма (появлению аутоиммунных процессов).
Фагоцитарная активность у кроликов второй и третей подопытных групп была в норме и выше контроля на 7,3 (р < 0,01) и 13,7 % (р > 0,05).
Наиболее информативным для оценки фагоцитарной активности следует считать индекс поглощения, то есть. фагоцитарное число, коэффициент фагоцитарного числа, которые отражают завершенность фагоцитоза (ЗФ) и индекс бактерицидности — способность фагоцита переваривать захваченный микроб [8].
Завершенность фагоцитоза отмечена у животных всех групп, но более высокие показатели наблюдаются в опытных группах. Исследования показали высокие, на 35% (р > 0,05), показатели коэффициента мобилизации лейкоцитов. Это свидетельствует об увеличении активности микробицидной системы фагоцитов у животных данных групп.
Для характеристики клеточного и гуморального иммунитета проводили количественное определение Т- и В-лимфоцитов.
Показатели клеточного звена иммунитета 2 и 3-й опытных групп кроликов были выше контроля. Абсолютное количество Т-лимфоцитов было выше на 27 и 52 % (р > 0,05). Абсолютное количество В-лим-фоцитов показало повышение на 3 (р > 0,05) и 5 % соответственно групп относительно контроля. При этом процентное содержание Т- и 13-лимфоцитов во всех группах по сравнению с фоновыми показателями достоверно не изменилось.
Таким образом, исходя из общего анализа исследований морфологического и иммунологического состава крови, отмечено преимущество опытных групп. Применение пробиотиков оказывает закаливающее действие на организм кроликов, которое проявляется активацией защитных систем крови и повышением иммунных свойств животных.
В комплекс исследований входило определение биохимических показателей крови кроликов и анализ полученных данных.
В сыворотке крови из всех веществ сухого остатка больше всего содержится белка, который состоит из альбуминов и глобулинов. Белки плазмы выполняют самые разнообразные функции. При интенсивном росте, а так же при заболеваниях животных соотношение белковых фракций меняется. С возрастом животных сыворотка крови обогащается глобулинами и параллельно с этим снижается содержание альбуминов. Изменение белкового спектра может быть спровоцировано переменой кормления животных.
Углеводы играют важную роль в энергетическом балансе организма. Из углеводов основным источником энергии в организме является глюкоза. С возрастом эти показатели приближаются к норме.
Среди минеральных веществ особе значение для кроликов имеют кальций и фосфор. Они составляют 65-70% всех минеральных веществ в организме кролика.
Основное физиологическое значение кальция в организме заключается в том, что он входит в состав минеральной части костей, играет особо важную роль в сокращении мышц, участвует в свёртывании крови, повышает защитные функции организма. Дефицит кальция может стать причиной сбоя в иммунной системе организма.
Фосфор относится к числу наиболее физиологически активных и необходимых элементов для жизнедеятельности организма. Значение фосфора в организме обусловлено тем, что он в большом количестве содержится в костной ткани, где служит вместе с кальцием пластическим материалом костей [5]. Фосфор предотвращает ресорбцию (поглощение) кальция. Нормальное соотношение кальция и фосфора — 2:1 [1, 5].
Известно, что важное клинико-диагностическое значение при многих инфекционных процессах принадлежит показателям энергетического обмена, таким как аланин- и аспартатаминотрансферазы (АЛТ и АСТ), регулирующих метаболические потоки. Бактериостатические свойства плазмы крови тесно связаны с энзимами [12].
АЛТ и АСТ - это специальные белки (ферменты), которые содержатся внутри клеток организма и участвуют в обмене аминокислот (веществ, из которых состоят белки). Эти ферменты содержатся только в клетках различных органов и попадают в кровь при повреждении или разрушении клеток (болезни, травмы).
Таблица 3. Результаты лабораторного анализа биохимических показателей.
| Показатель | Группа | Норма | ||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | ||
| Общий белок, г/л | 53,67±1,167 | 57,87±1,633* | 58,17±1,004** | 65-75 |
| Альбумины, г/л | 36,93±0,524 | 38,26±1,315 | 37,43±1,946 |
|
| Глобулины, г/л | 16,73±0,713 | 19,6±0,335*** | 20,73±1,477* |
|
| А/ Г | 2,21±0,072 | 1,95±0,038** | 1,84±0,234 | 2,1±0,4* |
| Альбумины, % | 68,85±0,699 | 66,1±0,443*** | 64,32±2,727 |
|
| Глобулины, % | 31,16±0,699 | 33,9±0,443*** | 35,69±2,727 |
|
| Глюкоза, мМоль/л | 3,94±0,546 | 5±0,693 | 3,09±0,38 | 3,85-8,32 |
| Кальций, мМоль/л | 2,187±0,055 | 2,58±0,178* | 2,44±0,08** | 2,4 - 4,2 |
| Фосфор, мМоль/л | 0,983±0,038 | 1,123±0,078 | 1,153±0,075* |
|
| АСТ, Мккат/л | 0,762±0,031 | 0,59±0,04*** | 0,572±0,031*** |
|
| АЛТ, Мккат/л | 0,437±0,075 | 0,443±0,043 | 0,405±0,038 |
|
| АСТ/ АЛТ | 1,848±0,302 | 1,349±0,116 | 1,432±0,127 | 1,4±0,3 |
| Холестерин, мМоль/л | 1,92±0,067 | 1,72±0,135 | 1,71±0,062* | 0,75-1,75 |
| Мочевина, мМоль/л | 5,13±0,993 | 2,97±0,291* | 3,92±0,418 | 2,18-5,50 |
В сыворотке крови кроликов 2 и 3-й подопытных групп содержание общего белка было выше, чем у аналогов в контроле на 3,8 (р < 0,01) и 2,3 % (р < 0,001).
Наличие альбуминов и глобулинов так же было выше на 3,6 и 17,2 % (р < 0,001) во 2-й и на 1,4 и 23,9 % (р > 0,05) в 3-й опытных группах.
У подопытных кроликов содержание Са и P увеличилось на 18 (р > 0,05) и 14 % - во второй группе, на 12 (р < 0,01) и 17 % (р > 0,05) - в третьей группе, соответственно.
Содержание глюкозы во всех группах соответствовало физиологической норме.
При определении активности АСТ в сыворотке крови кроликов опытной группы установлено, что активность фермента достоверно понижается на 22,6 (р < 0,001) и 25 % (р < 0,001) по сравнению с контрольной группой. Для определения соотношения АСТ/ АЛТ вычисляется коэффициент Де Ритиса. Полученные результаты свидетельствуют, что данные энзимы опытной группы в пределах нормы, а в контрольной группе они несколько завышены. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что функциональное состояние печени подопытных животных нормализовалось, а увеличение активности данных показателей в контрольной группе указывает на повреждение клеток печени и, как следствие, нарушение функций органа.
Наличие холестерина и мочевины у кроликов опытных групп находилось в пределах физиологических норм. У кроликов контрольной группы отмечено отличие от нормы уровня холестерина в крови на 10 %.
Выводы.
1. Проведённый анализ указывает на отличие морфологических, иммунологических и биохимических показателей крови кроликов в пользу опытных групп.
2. Кролики контрольных групп приобретают более интенсивный рост
3. Отмечено большее содержание эритроцитов, гемоглобина, более высокие показатели фагоцитарной активности, завершённости фагоцитоза и коэффициента мобилизации лейкоцитов.
3. Установлена достоверная разница между кроликами, опытных групп, и кроликами контрольной группы, по фракциям белков крови, макроэлементов.
5. Таким образом, в результате проведенных исследований доказано позитивное влияние пробиотика на морфологические, биохимические и иммунологические показатели кроликов.
6. В добавку кормовую пробиотическую "Бацелл-М" включён вид микроорганизма Enterococcus faecium, что в комплексе с Bacillus subtilis, Lactobacillus paracasei усиливает его действие и тем самым повышает устойчивость кроликов к заболеваниям, активирует защитные системы крови, что способствует профилактике заболеваний, обеспечивая высокие показатели иммунной защиты, обменных процессов и прироста.
Список литературы:
Резюме. В статье изучено воздействие кормовой пробиотической добавки "Бацелл-М", разработанной кубанскими учеными на клинико-физиологическое состояние, развитие кроликов и влияния препарата на динамику роста, морфологические, иммунологические и биохимические показатели крови кроликов. Применение пробиотической добавки к корму "Бацелл-М" при выращивании кроликов сопровождается увеличением среднесуточных при-ростов массы тела. Состав крови не только определяет состояние животного, но и даёт общее представление относительно приспособленности к условиям среды. Картина крови позволяет наблюдать различные изменения, которые происходят в организме животных под влиянием кормления и содержания, что дает возможность оценить их общее физиологическое состояние. В результате проведенных исследований морфологического и иммунологического состава крови, отмечено преимущество опытных групп. Применение пробиотика оказывает закаливающее действие на организм кроликов, которое проявляется повышением физиологических и морфологических показателей. Установлена достоверная разница между кроликами опытных групп и кроликами контрольной группы по фракциям белков крови, макроэлементов. Полученные данные свидетельствуют о том, что функциональное состояние печени подопытных животных нормализовалось, а увеличение активности показателей ферментов АСТ и АЛТ в контрольной группе указывает на нарушение функций печени. В пробиотической добавке к корму "Бацелл-М" включён вид микроорганизма Enterococcus faecium, что в комплексе с Bacillus subtilis, Lactobacillus paracasei усиливает его действие и тем самым повышает устойчивость кроликов к заболеваниям, активирует защитные системы крови, что способствует профилактике заболеваний, обеспечивает высокие показатели прироста, иммунной защиты и обменных процессов.
Ключевые слова: кролики, пробиотик, кровь, морфологические показатели, эритроциты, лейкоциты, иммунитет, профилактика, защитные системы крови, биохимические показатели, общий белок, макроэлементы, ферменты.
Сведения об авторе: Омельченко Николай Николаевич, аспирант факультета ветеринарной медицины Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет", главный ветеринарный врач ГКУ КСББЖ "Краснодарская"; 350004 г. Краснодар, ул. Калинина, 15/ 1; тел., факс: 8(861) 221-61-57, e-mail: niknik.79@mail.ru - ответственный за переписку с редакцией.
http://vetkuban.com/num4_201510.html