К.В. Шумилов, О.Д. Скляров, А.И. Климанов, Д.С. Зверев, И.Л. Никифоров
Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных
средств для животных и кормов (ФГУ "ВГНКИ"), г. Москва
Алтайский государственный аграрный университет, г. Барнаул
Заражению бруцеллезом подвержены все виды млекопитающих, в том числе человек. Бруцеллез имеет тенденцию к широкому распространению и проявляется в виде массовых абортов, бесплодия и яловости маточного поголовья, снижения жизнеспособности приплода, уменьшения продуктивности животных. Это обусловлено приспособляемостью и способностью возбудителя бруцеллеза размножаться в организме животных и долго сохранять жизнеспособность во внешней среде.
В России бруцеллез крупного рогатого скота впервые зарегистрировали в 1902 году. Заболевание животных было связано с импортом больного племенного скота.
Анализ эпизоотологических данных с 1946 года по настоящее время показывает, что бруцеллез крупного рогатого скота на территории России не регистрировался только в Камчатской области.
До 1952 года борьба с бруцеллезом в стране сводилась к проведению диагностических исследований и удалению из стад больных животных, без применения противобруцеллез-ных вакцин. В связи с осложнением эпизоотической ситуации в 1953 году в систему противобруцеллезных мероприятий была включена иммунизация животных вакциной из штамма В. abortus 19. Вакцину применяли до 1970 года. За время применения вакцины многие хозяйства, и даже целые области, были оздоровлены от болезни. Однако, в регионах с широким распространением бруцеллеза эффективность оздоровительных мероприятий оказалась недостаточной. В первую очередь это было обусловлено высокой агглютиногенностью вакцины. Агглютинины и комплементсвязывающие антитела сохраняются в организме иммунизированных животных до 5-8 лет, что чрезвычайно осложняет дифференциацию таких животных от больных бруцеллезом.
С 1974 года в России в общем комплексе противобруцеллезных мероприятий применяются вакцины из штаммов В. abortus 82 и 19, а с 1997 года еще и из штаммов В. abortus 75/79-АВ и 17/100.
За 33 года проведения противобруцеллезных мероприятий с применением указанных вакцин и смены 5-6 поколений коров количество неблагополучных по бруцеллезу пунктов в стране значительно скоратилось. Так, если на конец 1974 года в России числилось 5570 неблагополучных пунктов, то на 1 января 2008 года их осталось 68. За 33 года работы с применением этих вакцин и смены 5-6 поколений коров к 2008 году количество неблагополучных пунктов по бруцеллезу и заболевших животных значительно сократилось.
Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма В. abortus 75/79-АВ сухая живая (ФГУ "ВГНКИ" и Алтайская НИВС) и инактивированная адъювант-вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма В.аоогтиз КВ 17/100 (ФГУ "ВГНКИ") были разработаны с учетом формирования новых форм собственности и складывающейся эпизоотической ситуации по бруцеллезу, обусловивших необходимость иммунизировать ранее не вакцинированных стельных коров и нетелей.
Исходная культура вакцинного штамма В. abortus 75/79-АВ была выделена в 1979 году от коровы, в 1974 г. иммунизированной и в 1976 г. реиммунизированной вакциной из штамма В. abortus 82. В результате целенаправленной селекции выделенной культуры путем многократных пассажей через организм морских свинок и телок и на питательных средах был получен штамм В. abortus 75/79-АВ.
В ходе комиссионного изучения на морских свинках и крупном рогатом скоте разного возраста было установлено, что культура вакцинного штамма приживляется в организме привитых животных в сравнительно короткие сроки, расселяясь в генерализованной форме в течение 60 дней у морских свинок и 30 дней у телок. Штамм не вызывает в лимфатических узлах и внутренних органах морских свинок патологических изменений, характерных для бруцеллеза, не мигрирует от иммунизированных на неиммунизированных животных.
По результатам исследования сывороток крови в РА и РСК с 5 -бруцеллезным антигеном крупный рогатый скот к 90-му дню после иммунизации вакциной из штамма В. abortus 75/79-АВ почти полностью утрачивает агглютинины и комплементсвязывающие антитела.
Не зарегистрировано случаев выделения культуры вакцинного штамма из молока от коров периодически исследованных в течение 3 месяцев после иммунизации.
С целью изучения абортогенных свойств за 1004 коровами и нетелями (стельными телками) с разным сроком стельности, иммунизированными вакциной 75/79-АВ наблюдали до отела. Из указанного числа абортировали 2 коровы на 7 и 30 сутки после иммунизации, что было не связано с введением вакцины.
Иммуногенные свойства вакцины были изучены на морских свинках и телках.
В первом опыте использовали 74 морские свинки живым весом 350-400 г., сформированные в группы, в том числе три опытные - по 20 животных в каждой и одна - контрольная, насчитывающая 14 животных. Морских свинок первой группы иммунизировали культурой штамма 75/79-АВ, второй - штамма 19, третьей - штамма 82, четвертой - не иммунизировали. Через 90 дней после иммунизации всех животных заразили вирулентной культурой В. аЬоПиз 54, а через 35-37 дней убили для бактериологического исследования. Согласно полученным результатам, заражению противостояли 88,8 % животных, иммунизированных вакцинной из штамма В. аЬогтиз 75/79 - АВ, 65,0 % - из штамма 82 и 84,2 % - из штамма 19. Все контрольные морские свинки заразились.
Три опыта было проведено с использованием 95 телок. В первом - на телках 4-х месячного возраста, сформированных в 3 опытные и одну контрольную группы, была определена оптимальная иммунизирующая доза вакцины (табл. 1).
Таблица 1. Оптимальная иммунизирующая доза вакцины из штамма В. abortus 75/79-АВ для телок
| Группа/иммунизирующая доза (млрд.м.кл.) | Количество животных | ||
|---|---|---|---|
| в опыте | иммунных | ||
| голов | процент | ||
| Первая / 50 | 10 | 9 | 90,0 |
| Вторая /100 | 10 | 10 | 100,0 |
| Третья / 200 | 9 | 8 | 88,8 |
| Четвертая (контрольная) | 5 | - | - |
Животным опытных групп ввели вакцину в разных дозах. Спустя 6 месяцев телок опытных и контрольной групп заразили стандартной культурой вирулентного штамма В. abortus 54-М-ВГНКИ, суспендированной в физиологическом растворе, конъюнктивально в дозе 15 млн. микробных клеток из расчета по 7,5 млн. м. кл. в каждый глаз в объеме 0,1 мл.
Через 48 дней после заражения животных убили. Для бактериологического исследования были отобраны лимфатические узлы и внутренние органы, по 21 пробе патологического материала от каждой.
Как видно из материалов таблицы, оптимальная иммунизирующая доза вакцины составляет 100 млрд. м. к. Вакцина в указанной дозе обеспечила защиту от заражения культурой вирулентного штамма бруцелл 100 % иммунизированных животных при заражении всех контрольных неиммунизированных телок.
Второй опыт был посвящен сравнительному изучению иммуногенных свойств вакцины из штамма В. abortus 75/79-АВ, адъювантвак-цины из штамма В. melitensis "Невский-13" и вакцины из штамма В. abortus 82. Для исследований из 26 телок 15-18-ти месячного возраста сформировали 4 группы животных. В первых трех группах было по 7 голов и в четвертой (контрольной) - 5 голов. Схема и результаты опыта приведены в таблице 2.
Таблица 2. Иммуногенные свойства вакцин из штаммов В. abortus 75/79-АВ, 82 и адьювантвакцины из штамма В. melitensis "Невский-13"
| Наименование штамма | Количество животных | Индекс инфицированности | ||
|---|---|---|---|---|
| в опыте | иммунных | |||
| голов | процент | |||
| В. abortus 75/79-АВ | 7 | 2 | 28,6 | 6,1 |
| В. abortus 82 | 7 | 2 | 28,6 | 14,3 |
| Адъювант-вакцина из штамма В. melitensis "Невский-13" | 7 | 3 | 42,8 | 9,2 |
| Контроль | 5 | - | - | 27,8 |
Телок первой группы иммунизировали суспендированной в физиологическом растворе двухсуточной агаровой культурой штамма В. abortus 75/79-АВ, подкожно в область средней трети шеи в дозе 100 млрд. м. к. в объеме 5 мл, животных второй группы - такой же культурой из штамма 82. Адъювантвакцину ввели телкам третьей группы подкожно в область подгрудка в дозе 450 млрд. м. к. в объеме 3 мл. Телок контрольной группы не иммунизировали.
Через 35 дней после иммунизации всех животных заразили путем нанесения на конъюнктиву каждого глаза по 0,1 мл взвеси стандартной культуры вирулентного штамма В. abortus 54-М-ВГНКИ в дозе 15 млн. м. к.
Убой и бактериологическое исследование патологического материала от подопытных и контрольных животных провели через 39 дней после заражения.
Согласно результатам опыта, вакцины из штаммов В. abortus 75/79-АВ и 82 обеспечили защиту от заражения культурой вирулентного штамма бруцелл 28,6 % иммунизированных животных, а адъювантвакцина из штамма В. melitensis "Невский-13" - 42,8 %, при 100 %-ном заражении неиммунизированных животных.
В третьем опыте проведен сравнительный контроль иммуногенных свойств производственных серий вакцин из штаммов KB 17/100, 75/79-АВ, 19, изготовленных на Щелковском биокомбинате.
Штамм В. abortus KB 17/100, находящийся в R - форме, получен путем целенаправленной селекции по культуральным, морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам из культуры вакцинного штамма В. abortus 104-М в S - форме.
Штамм безвреден для лабораторных животных. При введении мышам в дозе 250 млн. микробных клеток и морским свинкам в дозе 2*10э он не вызывает у них патологических изменений, характерных для бруцеллеза.
Остаточная вирулентность штамма ниже, чем у исходного штамма, ИД50 для мышей линии С57Блек/6 составляет 5500 микробных клеток.
Вакцина из штамма KB 17/100 представляет собой эмульсию типа "вода в масле". При введении вакцины в дозе 2*109 микробных клеток морским свинкам и в дозе 7*109 микробных клеток кроликам у животных вырабатываются только R -антитела в титрах от 1:160 до 1:3200.
В опыте по определению иммуногенности использовали 35 телок в возрасте 14-17 месяцев из хозяйства, благополучного по бруцеллезу крупного рогатого скота по данным серологического исследования животных перед вакцинацией и с учетом эпизоотической ситуации.
Каждой вакциной иммунизировали по 10 телок. Адъювант-вакцину вводили животным подкожно в область подгрудка в объеме 3 мл (4,5* 10" м. к.), вакцину из штамма В. abortus 19 - подкожно в область задней трети шеи в дозе 80 млрд. м. к. в объеме 4 мл, вакцину из штамма В. abortus 75/79-АВ подкожно в область задней трети шеи, в дозе 100 млрд. м. к. в объеме 5 мл. Через 6 месяцев всех иммунизированных и контрольных (неиммунизированных) телок заразили вирулентной культурой В. abortus 54-М-ВГНКИ конъюнктивально в дозе 10 млн. м. к.
Через 30 дней после заражения телок убили, а внутренние органы и лимфатические узлы (25 объектов) от них подвергли бактериологическому исследованию (табл. 3).
Таблица 3. Контроль иммуногенных свойств производственных серий вакцин из штаммов Brucella abortus
| Группа | Вакцина из штамма | Доза вакцины (млрд.м.к.) | Количество телок (голов) | Результаты исследования | % защиты | ||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Заразилось животных | Выделено культур бруцелл | Индекс инфицированности | |||||
| 1 | B. abortus KB 17/100 | 450 | 10 | 0 | 0 | 0 | 100 |
| 2 | B. abortus 75/79-AB | 100 | 10 | 3 | 11 | 4,4 | 70 |
| 3 | B. abortus 19 | 80 | 10 | 2 | 10 | 4,0 | 80 |
| 4 | Контроль | 0 | 5 | 5 | 89 | 71,2 | 0 |
В результате проведенного опыта существенных различий между количеством животных, иммунизированных испытуемыми вакцинами, и защищенных от заражения культурой вирулентного штамма не установлено.
В производственных условиях Саратовской области применение вакцины вакцины из штамма KB 17/100 было начато в 1998 году. В течение последующих 3-х лет вакциной было иммунизировано 197590 голов крупного рогатого скота, что позволило в относительно короткое время (8-24 месяца) оздоровить хозяйства 6-ти районов от бруцеллеза крупного рогатого скота.
В целом, полученные резульгаты позволяют заключить, что вакцина из штамма В. abortus 75/79-АВ является иммуно-генной, слабоагглютиногенной и неабортогенной и, таким образом, удовлетворяет основным современным требованиям, предъявляемым к живым противобруцеллезным вакцинам.
К одной из самых перспективных противобруцеллез-ных вакцин следует отнести адъювант-вакцину из штамма KB 17/100, которая не индуцирует синтез S - бруцеллезных антител в диагностических титрах у несенсибилизированных бруцеллами животных, но индуцирует его у крупного рогатого скота с латентной формой бруцеллеза, что позволяет за счет быстрого удаления из стад таких животных, ускорить оздоровление неблагополучных хозяйств; не обладает абортогенными свойствами и может быть использована для иммунизации стельных коров и нетелей, и, будучи инактивированной, не представляет экологической опасности.
http://vetkuban.com/num4_20081.html