Проблема контаминаций противовирусных вакцин в мире и России

УДК 619:616.98:578.833.3:616-076
DOI 10.33861/2071-8020-2019-3-3-6

Черных О.Ю. ГБУ КК «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», г. Кропоткин
Мищенко А.В., Мищенко В.А. ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир
Кривонос Р.А. департамент ветеринарии Краснодарского края, г. Краснодар
Дробин Ю.Д. Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный
институт – филиал ФГБНУ «Федеральный Ростовский аграрный научный центр», г. Новочеркасск
Лысенко А.А. ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина», г. Краснодар

Введение. Вирусные болезни животных наносят значительный экономический ущерб сельскохозяйственным предприятиям. Мировой опыт борьбы с вирусными болезнями человека и животных свидетельствует, что наиболее эффективным способом защиты от патогенных вирусов является активная специфическая профилактика [2, 10, 17, 18, 21]. При эндемичном течении нодулярного дерматита, чумы мелких жвачных животных, оспы овец и коз вакцинация - это единственный эффективный способ борьбы со вспышками инфекции в странах (зонах), где данная болезнь является эндемичной [18, 46]. В Российской Федерации вакцинация является неотъемлемой частью системы контроля многих трансграничных и экономических значимых вирусных инфекций [17]. В настоящее время профилактика вирусных инфекций осуществляется в основном с применением живых и инактивированных вакцин. Центральным этапом в технологии изготовления противовирусных вакцин является крупномасштабное культивирование производственного штамма вируса.

Долгое время для производства противовирусных вакцин использовались первичные культуры клеток. Однако, первичные культуры клеток отличаются нестандартностью, часто они эндогенно контаминированы различными вирусами, микоплазмами, бактериями и грибками. Источником случайных вирусных агентов в первично трипси-низированных культурах клеток могут быть инфицированные доноры ткани, а также сыворотка крови, трипсин [17]. В качестве одного из главных компонентов питательных сред для культивирования клеток обычно используются сыворотки крови крупного рогатого скота. Значительным прогрессом в развитии биотехнологии производства противовирусных вакцин явилась разработка способов культивирования вирусов в перевиваемых линиях клеток. Однако, существенным недостатком перевиваемых клеточных линий, осложняющим их применение при производстве живых вакцин, является опасность их контаминации вирусами, бактериями, грибами и микоплазмами. Наибольшую угрозу представляют цитопатогенные и нецитопатогенные биотипы пестивирусов (возбудители вирусной диареи крупного рогатого скота, пограничной болезни) и микоплазмы [1, 4, 5, 6, 9, 10, 13, 14, 16, 17, 21, 32, 35, 36, 40, 45, 47, 49].

Сыворотка крови животных является основным потенциальным источником контаминации культур клеток вирусом вирусной диареи крупного рогатого скота и микоплазмами [1, 9, 10, 11, 16, 17, 22, 27, 33, 38, 49]. В трипсине, полученном из органов свиней, обнаруживается парвовирус свиней [17].

По требованиям ВОЗ категорически запрещается использование контаминированных патогенами клеток для изготовления иммунобиологических препаратов [15, 17, 19].

Согласно Руководству МЭБ по диагностическим методам и вакцинам (статьи 2.4.14., 2.7.11, 2.7.14) каждая партия посевного вируса (нодулярного дерматита крупного рогатого скота, оспы овец и коз, чумы мелких жвачных) культуры клеток и сыворотка крови крупного рогатого скота должны проверяться на наличие посторонних патогенов, в том числе пестивирусов (возбудителей пограничной болезни овец и вирусной диареи крупного рогатого скота), а также бактерий, грибков и микоплазм. Используемые производственные штаммы вирусов, культуры клеток, сыворотки крови крупного рогатого скота и питательные среды, используемые для изготовления вирус-вакцины против нодулярного дерматита крупного рогатого скота, оспы овец и коз и чумы мелких жвачных животных, должны быть свободны от любых бактериальных, грибковых, микоплазменных и вирусных контаминаций [46]. Сыворотка крови животных является основным потенциальным источником контаминации культур клеток вирусом вирусной диареи крупного рогатого скота и микоплазмами. Сыворотка крови, используемая в ростовой среде для культивирования клеток, должна быть свободна не только от вируса вирусной диареи, но и от антител к этому возбудителю [34].

Известно, что наличие в культурах клеток посторонних микроорганизмов негативно влияет на функциональную активность генома клеток и репродукцию вирусов [1]. Работами многих исследователей было установлено, что основными источниками вирусной контаминации культуры являются сыворотки крови крупного рогатого скота и сыворотки плодов, а также трипсин [1, 6, 7, 10, 12, 22, 24, 26, 31]. Использование контаминированных вирусом вирусной диареи культуры клеток и сыворотки крови может быть причиной получения недостоверных результатов диагностических исследований [11, 27]. Известно, что плоды крупного рогатого скота и овец чувствительны к возбудителям вирусной диареи и пограничной болезни овец [34, 37, 39, 41]. Инфицирование плодов крупного и мелкого рогатого скота приводит к абортам, мертворождениям и рождению нежизнеспособных телят и ягнят.

В 2012 году в Кыргызстане после иммунизации вакциной против оспы овец пало 2 112 голов мелкого рогатого скота. В том же году в Узбекистане после прививки вакциной против оспы овец была зарегистрирована гибель около 12 тыс. голов мелкого рогатого скота. Расследование случаев массовой гибели мелкого рогатого скота показало, что примененная вакцина против оспы овец была контаминирована вирулентным вирусом Ауески [50, 51].

Контаминированная вирусами сыворотка крови может служить причиной ложноположительных результатов биопробы, и, как следствие, диагностической ошибки [10, 11].

Особую озабоченность вирусологов и специалистов в области клеточной биотехнологии вызывают сообщения исследователей о контаминации многих культур клеток вирусом вирусной диареи. В ходе исследований, проведенных в ВИЭВ и ВНИИЗЖ, установлено, что культуры перевиваемых линий клеток МДВК, КСТ, СПЭВ персистентно контаминированы вирусом диареи крупного рогатого скота первого генотипа нецитопатогенного биотипа [3, 13, 14, 16, 20]. В фетальной сыворотке крупного рогатого скота неоднократно был обнаружен парвовирус крупного рогатого скота [7, 12].

Сотрудники ФГБУ НИИ вирусологии провели исследование 117 клеточных серий и 35 серий эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота на контаминации вирусом вирусной диареи (далее, ВД). Вирус был обнаружен в 25% образцов клеток из 117 клеточных линий и отвивок и в 45% эмбриональной сыворотки из 35 проверенных образцов. В контаминированных клеточных культурах уровни геномной РНК вируса ВД достигала 102-103г-экв/клетку, а в пробах сывороток - от 103 до 107 г-экв /мл. Авторы обнаружили вирус вирусной диареи крупного рогатого скота в культурах клеток МДВК, РТ, ПЭК, ТЭБ. Вирус диареи обнаруживали в отдельных партиях линий клеток: СПЭВ, МДСК, FLK, RK, ППЭС. Полученные результаты свидетельствуют о широком распространении вируса вирусной диареи как контаминанта клеточных культур и сыворотки крупного рогатого скота, предназначаемых для исследовательских и производственных целей. Все это требует постоянного предварительного анализа производственных партий сывороток. Авторы установили, что вирус вирусной диареи инфицирует широкий круг клеточных культур человеческого происхождения. Было установлено, что вирус ВД размножается и персистирует в клетках эпителия дыхательных путей, кишечного эпителия, эмбриональных клетках почек человека, клетках гепатомы, Т-лимфоцитах [9].

В другой серии опытов указанными исследователями, был проведен анализ 131 линии культур клеток и 37 серий эмбриональной сыворотки. Вирус вирусной диареи первого генотипа был выявлен в 33% линиях клеток и 60% сериях эмбриональной сыворотки. При исследовании 69 клеточных культур микоплазмы были обнаружены в 20% проб [1]. На российский рынок попадает большое количество серий эмбриональной сыворотки телят, контаминированных вирусом вирусной диареи [1, 10, 11, 13, 14, 20].

Иммунизация крупного рогатого скота живыми вирус-вакцинами, изготовленными из выращенного в контаминированных вирусом ВД культурах клеток вирусов, приводит к развитию патологического процесса [17]. У глубокостельных коров (нетелей), привитых контаминированной вирусом вирусной диареи живой вакциной, регистрируются аборты, мертворождения и рождение телят с клиническими признаками, характерными для вирусной диареи [14]. Вакцина против нодулярного дерматита должна быть безопасной для всех пород крупного рогатого скота, включая и молодых и стельных коров [46]. Использование контаминированных этим возбудителем культур клеток и сывороток крови, содержащих антитела к возбудителю ВД в диагностической практике, приводит к получению ложноположительных и ложноотрицательных результатов [11, 14]. Контаминация возбудителем вирусной диареи крупного рогатого скота производственных штаммов вирусов, использованных при производстве живых вирус-вакцин на Украине, была выявлена в 25-40%%. Уровень контаминации вирус-вакцин указанным возбудителем колебался от 30 до 50%. Вирус ВД был обнаружен в 10% производственных серий сывороток [10, 14].

В Нидерландах после применения 7 серий маркированной вакцины против ИРТ фирмы «Bayer» 7 000 фермеров из 45 000 обнаружили у привитых животных признаки вирусной диареи. При выяснении причин появления у крупного рогатого скота клинических симптомов вирусной диареи был обнаружен факт контаминации препарата вирусом вирусной диареи [47].

Контаминации возбудителем вирусной диареи живых вирус-вак-цин были выявлены многими исследователями [4, 5, 6, 36, 37, 47]. Многие исследователи доказали патогенность для крупного рогатого скота вируса вирусной диареи 2 генотипа, выделенного из контаминированной вирус-вакцины [37, 47]. В Российской Федерации установлено циркулирование вирусов диареи крупного рогатого скота 1, 2 и 3 генотипов [3, 20, 22].

Развитие клеточной биотехнологии и увеличение количества предприятий, занимающихся производством биопрепаратов, обусловило увеличение потребности в большом количестве фетальной сыворотки крупного рогатого скота. Поэтому в Европе была организована расфасовка фетальной сыворотки крупного рогатого скота, заготовленной в Австралии, Канаде, США, Мексике и Бразилии и других странах [26, 27]. В соответствие с требованиями, предъявляемыми к указанному препарату, каждая партия должна проверяться на контаминацию различными вирусами. При исследовании в Швейцарии фетальной сыворотки крупного рогатого скота из Бразилии был обнаружен вирус, который идентифицирован как атипичный пестивирус. В последующем изолят пестивируса, названный как НоВн(О 32/00 HoBi), был идентифицирован как возбудитель вирусной диареи крупного рогатого скота 3 генотипа [26, 29]. Атипичный пестивирус НоВi был выделен китайскими исследователями из культуры клеток МДВК [28]. При выяснении этиологии респираторной патологии у молодняка крупного рогатого скота и массовых абортов из проб, патологического материала от абортированных плодов в культуре клеток был выделен нецито-патогенный вирус вирусной диареи 3 генотипа, а из проб от животных с респираторной патологией - цитопатогенный вирус [43].

В публикациях многих исследователей приведены данные исследований фетальной сыворотки на наличие контаминации атипичным пестивирусом. Результаты этих исследований свидетельствуют, что более 30% серий фетальной сыворотки, поставляемой из Южной Америки в Европу, контаминированы HoBi-like pestivirus [23, 40]. Опубликованы результаты исследований 33 серий фетальной сыворотки крупного рогатого скота из 14 стран на наличие вируса вирусной диареи, в том числе и возбудителя 3 генотипа. Вирус вирусной диареи генотипа 1 обнаружен в 27 сериях сыворотки, 2 генотипа - в 11 сериях, а 3 генотипа - в 13 сериях [33]. Возбудитель 3 генотипа выявлен в сыворотках из Австралии, Бразилии, США, Канады, Мексики и Южной Америки. При исследовании 26 серий фетальной сыворотки в 15 сериях был обнаружен вирус вирусной диареи 3 генотипа всех 4 субгенотипов (3а-3д) [25, 38].

При выяснении низкой полевой эффективности вирус-вакцины против чумы мелких жвачных животных, использованной в Таджикистане, исследователями из ВИЭВ было предположено, что примененный препарат был контаминирован вирусами или микоплазмами. В результате проведенных исследований из указанной вакцины был выделен пестивирус, в последующем идентифицированный как вирус диареи крупного рогатого скота 3 генотипа [21].

Многие исследователи считают, что использование в биологической промышленности при производстве вирус-вакцин биологических материалов овечьего происхождения сопряжено с опасностью распространения нецитопатогенных пестивирусов [2, 4, 5, 6, 45, 46]. Клеточные культуры, применяемые при производстве живых противовирусных вакцин не должны использоваться более 20 пассажей. Каждый пассаж должен проверяться на наличие вирусов-контаминантов [4, 5, 6].

В последнее время в доступной литературе появилось много сообщений о новом возбудителе, названном Сенекавирус. Этот возбудитель был открыт сотрудниками биотехнологической компании Neotropix Inc. в штате Пенсильвания (США) как вирус «лабораторный паразит», контаминирующий культуры клеток [30, 44, 48]. Сенекави-русная инфекция свиней зарегистрирована на территории США, Канады, Австралии, Новой Зеландии, Италии и Бразилии [7, 8]. Исследователи предположили, что сенекавирус мог присутствовать в свином трипсине или/и в фетальной сыворотке крови крупного рогатого скота, используемой в составе питательной среды для культивирования культуры клеток [30]. Основными носителями сенекавируса являются крупный рогатый скот и свиньи [7, 8]. Исследователями было установлено, что выделенный возбудитель является контаминантом культуры клеток [7, 30, 44, 48]. Существует высокая вероятность заноса сене-кавируса в Россию с импортными свиньями, а также с контаминированными возбудителем вирус-вакцинами и, как следствие, распространение инфекции в свиноводческих хозяйствах [7, 8].

В ФГБУ «ВНИИЗЖ» были проведены серии опытов по оптимизации систем культивирования ротавируса, коронавируса, вирусов парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи с использованием бессывороточных сред. Использование заменителя сыворотки Fetal Clone в качестве компонента ростовой средой для выращивания перевиваемых линий клеток позволило получать вирусный материал с высокой антигенной и иммуногенной активностью, свободной от микоплазм и вирусов-контаминантов [10, 11].

Заключение. В результате многочисленных исследований были установлены факты контаминации цитопатогенными и нецитопатоген-ными штаммами различных вирусов (возбудители вирусной диареи 1-3 генотипов, пограничной болезни овец, парвовирусной инфекции крупного рогатого скота, сенекавирус), микоплазмами и бактериями противовирусных вакцин, культур клеток и сыворотки крови, используемой в питательной и поддерживающей среде.

Представленные данные свидетельствуют о необходимости постоянного контроля используемых при производстве вирус-вакцин и проведении диагностических исследований: культур клеток, сыворотки крови на наличие нецитопатогенных и цитопатогенных пестивирусов (возбудителей вирусной диареи 1-3 генотипов, пограничной болезни овец), сенекавируса, микоплазм, бактерий и грибков.

Использование заменителя сыворотки Fetal Clone в качестве компонента ростовой средой для выращивания перевиваемых линий клеток позволило получать вирусный материал с высокой антигенной и иммуногенной активностью, свободной от микоплазм и вирусов-контаминантов.

Существует высокая вероятность заноса (ввоза) сенекавируса в Российскую Федерацию и необходимость разработок средств и методов обнаружения возбудителя. Данные о регистрации указанного патогена являются основанием для проведения эпизоотологического мониторинга в свиноводческих хозяйствах с импортным поголовьем животных.

Список литературы:

Анализ контаминации клеточных культур пестивирусом BVDV и микоплазмами/ Урываев Л.В., Ионова К.С., Дедова А.В. и др.// Вопросы вирусологии, 2012, 57, 5, 15-21.
Аноятбекова А.М., Алексеенкова С.В., Юров К.П. Молекулярно-эволюционный генетический анализ вируса пограничной болезни, выявленного у овец в Таджикистане// Ветеринария, 2017, 1, 23-26.
Антигенные свойства нецитопатогенных штаммов вируса диареи - болезни слизистых крупного рогатого скота/ Юров Г.К., Алексеенкова С.В., Диас Хименес К. и др.// РВЖ, 2013, 2, 24-26.
Луговцев В.Ю., Вишняков И.Ф. Пограничная болезнь овец (обзор иностранной литературы)// Вестник РАСХН, 1998, 1, 79-82.
Луговцев В.Ю., Вишняков И.Ф. Пограничная болезнь овец (обзор иностранной литературы)// Вестник РАСХН, 1998, 2, 53-58.
Луговцев В.Ю., Вишняков И.Ф. Пограничная болезнь овец (обзор иностранной литературы)// Вестник РАСХН, 1998, 3, 64-67.
Массовые болезни свиней с везикулярным синдромом/ Мищенко А.В. ,Семакина В.П., Мищенко В.А. и соавт.// Ветеринария, 2016, 7, 12-19.
Новая массовая болезнь свиней - сенекавирусная инфекция/ Орлянкин Б.Г., Раев С.А., Алипер Т.И. и соавт.// Свиноводство, 2016, 7(16), 46-47.
О контаминации клеточных культур вирусом диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота (BVDV)/ Урываев Л., Дедова А., Дедова Л. и др.// Бюл. эксп. биологии и медицины, 2012, 153, 1, 88-93.
Оптимизация условий культивирования вирусов КРС в перевиваемых культурах клеток/ Мищенко В.А. и соавт.// Ветеринария, 2014, 2, 60-63.
Оптимизация реакции микронейтрализации для определения антител к вирусу вирусной диареи КРС/ Кононова С.В. и соавт.// Ветеринария, 2015, 9, 58-62.
Особенности парвовирусной инфекции КРС /Мищенко В.А., Гусев А.А., Захаров В.М. и соавт.// Ветеринария, 2000, 5, 19-21.
Отечественные линии перевиваемых клеток почек теленка - субстрат для биотехнологии/ Миронова Л.Л. и соавт.// Биотехнология, 1988, 5, 25-31.
Проблема вирусной диареи крупного рогатого скота/ Черных О.Ю. и со-авт.// Труды КубГАУ, 2016, 1(58), 194-198.
Пригодность клеточных субстратов для производства биологических препаратов// Серия технических докладов ВОЗ №747, Женева, 1988.
Проверка клеточных культур на контаминацию вирусом диареи КРС -необходимое условие производства биологических препаратов/ Алексеенкова С.В., Юров К.П., Гальнбек Т.В. и др.// РВЖ, 2012, 1, 15-18.
Сергеев В.А. и соавт. Вирусы и вирусные вакцины// М.: Библионика, 2007, 73-78.
Специфическая профилактика нодулярного дерматита КРС /Черных О.Ю., Мищенко А.В., Мищенко В.А. и соавт.// Ветеринария Кубани, 2016, 3, 3-5.
Требования к перевиваемым линиям клеток, используемых для производства биологических препаратов// Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов. Доклад ВОЗ №7451, 1988, 85-88.
Шульпин М.И., Аянот П.К., Мищенко В.А. Индикация вируса диареи КРС, генотипирование и филогенетический анализ изолятов, выделенных на территории РФ //Вопросы вирусологии, 2003, 5, 41-45.
Юров К.П., Аноятбекова А.М., Алексеенкова С.В. Новый пестивирус-хоби вирус - контаминант вакцин против чумы мелких жвачных// Ветеринария, 2016, 10, 8-11.
Экологические особенности возбудителя вирусной диареи КРС 1 и 2 генотипов/ Черных О.Ю. и соавт.// Труды КубГАУ, 2016, 61, 149-156.
Bauermann F., Ridpath J., Weiblen R. Hobi-like viruses: an emerging group of pestiviruses// J. Vet. Diagn. Invest., 2013, 25(1), 6-15.
Cell cultures// Sigma biosciences, catalog and Prince List, 2007.
Genetic heterogeneity of pestiviruses of ruminants in Switzerland/ Stalder H., Meier P., Pfaffen G. et al.// Prev. Vet. Med., 2005, 72, 37-41
Genetic and antigenic characterization of an atypical pestivirus isolate a putative member of a novel pestivirus species/ Schirrmeier H., Strebelow G., Depner K. et al.// J. Gen. Virol., 2004, 85, 3647-3652.
Genome analysis of an atypical bovine pestivirus from fetal bovine serum/ Gao S., Du J., Tian Z. et al.// Virus Genes, 2016, 52, 4, 561-563.
Genome Seguence of a Novel HoBi-like pestivirus in China/ Li M, Li W., Zhang W. et al.// J. Virol., 2012, 86 (22), 12444.
Clinical presentation resembling mucosal disease associated with «HoBi»- like pestivirus/ Weber M.N., Mosena A.C., Simoes S.V. et al.// Transbound. Emerg. Dis., 2014, 101111.
Complete genome sequence analysis of Seneca Valley virus -001, a novel oncolytic picornavirus/ Hales L.M., Knowles N.J., Reddy P.S. et al.// J. Gen. Virol, 2008, 89, 1265-1275.
Cytopathic bovine viral diarrhea viruses (BVDV): emerging pestiviruses doomed to extinctions/ Peterhans E., Bachofen C., Stalder H. et al.// Vet. Res, 2010, 41-44.
Detection and characterization of emerging HoBi-like viruses in commercial foetal bovine serum batches/ Rossi E., Ridpath J., Bazzucchi M. et al.// 10th Intern. Congr. for Vet. Virology. 9th Annual Meet. of EPIZONE. - Montpellier, France, 2015, 256-257.
Detection and identification of the atypical bovine pestiviruses in commercial foetal bovine serum batches/ Xia H., Vijayaraghavan B., Belak S. et al.// Plos One, 2011, 6 (12), 28553.
Detection of bovine viral diarrhea virus 2 as the cause of abortion outbreaks on commercial speep flocks/ Parida L., Fernandes M., Gufierrez et al.// Transbound. Emerg. Dis, 2017, 64, 1, 19-26.
Edwards S. et al. Bovine viral diarrhea virus// Cell & Tissue Culture: Laboratory Procedures, 1993, 78 (5), 1-8.
Experimental infection calves with bovine viral diarrhea virus type-2 (BVDV-2) isolated from a contaminated vaccine/ Falkone E., Cordioli P., Tarantino M. et al.// Vet. Res. Commun., 2003, 7, 577-589.
Falkone E., Tollis M., Gonti G. Bovine viral diarrhea disease associated with a contaminated vaccine// Vaccine, 1999, 18, 387-388.
Genetic detection and characterization of emerging HoBi-like viruses in archival foetal bovine serum batches/ Giammarioli M., Ridpath J.F., Rossi E. et al.// Biologicals, 2015, 43 (4), 220-224.
Hobi-like viruses: an emerging group of pestiviruses/ Bauermann F.V., Ridpath J.F., Weiblen R.// J. Vet. Diagn. Invest. 2013, 25 (1), 6-15.
Identification of natural infections in sheep/goats with Hobi-like pestiviruses in China/ Shi H., Kan Y, Yao L., et al.//Transbound. Emerg. Dis, 2017, 64, 1, 1926.
Lindberg A. et al. Bovine viral diarrhea virus infections and its control //Vet. Quart., 2004, 1, 1, 1-16.
Merten O.W. Virus contamination of cell cultures - a biotechnological view// Cytotechnology, 2002, 39, 91-116.
Natural infection of cattle with an atypical «HoBi»-like pestivirus - implication for BVD control and for the safety of biological products/ Stshl K., Kampa J., Alenius S. et al. //Vet. Res., 2007, 38, 517-523.
Neotropix Products 1 NTX-010.2015; http://www.neotropix.com/product cerview.htm. Accessed August 6, 2015.
Nettleton P., Gilray J., Russo P. et al. Border disease of sheep and goats// Vet. Res., 1998, 29(3-4), 327-340.
OIE. Manual of Diagnostic Test and Vaccines for Terrestrial Animals (mammals), Paris, 2012, ch. 2.4.14 (762-774), ch. 2.7.11(1032-1043), ch. 2.7.14 (1055-1066).
Outbreak of bovine virus virus diarrhea on Dutch dairy farms induced by a bovine herpesvirus 1 marker vaccine contaminated with bovine virus diarrhea virus type 2/ Barkema H.W., Bartek C.J., van Wuyckhuise L. et al.// Tijdschr. Diergeneeskd., 2001,126, 6, 158-165.
Structure of Seneca virus -001, an oncolytic picornavirus representing a new genus/ Venkataraman S., Reddy V., Reddy S. et al. //Structure, 2008,16,15551561.
Vilcek S. Identification of pestiviruses contaminating cell lines and fetal calf sera// Acta Virol, 2001, 45, 81-86.
http://www.fsvps.ru/fsvps/download/attachment/1192/BSE_HPAI_BI_ALERT_238.pdf от 10.12.12 г.
http://www.fsvps.ru/fsvps/download/attachment/1593/EE_R_ALERT_204.pdf от 22.10.13 г.

Резюме. Представленные данные литературы свидетельствуют о серьезной угрозе для животноводства практически всех стран мира живых вирус-вакцин, контаминированных возбудителем вирусной диареи, вирусом пограничной болезни овец и микоплазмами. У глубокостельных коров, привитых указанными вакцинами, регистрируются аборты, мертворождения, рождение нежизнеспособных телят. Приведены данные литературы о фактах контаминации цитопато-генным и нецитопатогенным биотипами вируса вирусной диареи 1-3 генотипов, фетальной сыворотки крови крупного рогатого скота, используемой в качестве одного из главных компонентов питательной среды для культивирования культуры клеток. Обобщены результаты исследований по изучению контаминации перевиваемых линий культур клеток такими вирусами как вирус вирусной диареи, парвовирус, сенекавирус, возбудитель пограничной болезни овец и микоплазмами. При исследовании 117 клеточных серий и 35 проб эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота на контаминацию вирусом вирусной диареи крупного рогатого скота вирус вирусной диареи был обнаружен в 25% образцов клеток и в 45% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота Установлены факты контаминации трипсина парвовирусом. При исследовании 69 клеточных культур микоплазмы были обнаружены в 20% проб. Авторами отмечается, что в России среди биологических препаратов большое количество серий эмбриональной сыворотки телят контаминировано вирусом вирусной диареи. Авторы подтверждают данные о том, что клеточные культуры, применяемые при производстве живых противовирусных вакцин не должны использоваться более 20 пассажей, а каждый пассаж должен проверяться на наличие вирусов-контаминантов. Использование заменителя сыворотки Fetal Clone в качестве компонента ростовой среды для выращивания перевиваемых линий клеток позволяет получать вирусный материал с высокой антигенной и иммуногенной активностью, свободной от микоплазм и вирусов-контаминантов.

Ключевые слова: стельные коровы, вирус вирусной диареи крупного рогатого скота 1-3 генотипов, цитопатогенные и нецитопатогенные биотипы, парвовирусы, микоплазмы, бактерии, грибки, культуры клеток, сыворотка крови, безвредность, вирус-вакцины.

Сведения об авторах:

Черных Олег Юрьевич, доктор ветеринарных наук, директор ГБУ КК «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория»; 352380, г. Кропоткин, ул. Красноармейская, 303; тел.: 8-918-4956659; e-mail: gukkvl50@kubanvet.ru.

Мищенко Алексей Владимирович, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник информационно-аналитического центра ФГБУ «ВНИИЗЖ»; 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец; тел.: 8-4922-261551; e-mail: a.mischenko@ mcx.ru.

Мищенко Владимир Александрович, доктор ветеринарных наук, профессор ВАК, главный научный сотрудник лаборатории профилактики болезней свиней и рогатого скота ФГБУ «ВНИИЗЖ»; тел.: 8-4922-261551; е-mail: mishenko@arriah. ru

Кривонос Роман Анатольевич, кандидат ветеринарных наук, руководитель департамента ветеринарии Краснодарского края; 350000, г. Краснодар, ул. Рашпилевская, 36; тел.: 8-861-2622869; е-mail: uv@krasnodar.ru.

Дробин Юрий Дмитриевич, кандидат сельскохозяйственных наук, директор Северо-Кавказского зонального научно-исследовательского ветеринарного института - филиал ФГБНУ «Федеральный Ростовский аграрный научный центр»; 346421, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе; тел.: 8-8635-266270; e-mail: skznivi@novoch.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Лысенко Александр Анатолиевич, доктор ветеринарных наук, профессор ВАК, профессор кафедры терапии и фармакологии ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина»; 350089, г. Краснодар, ул. Рождественская набережная, 29, кв. 7; тел.: 8-961-5075415; e-mail: vetkubgau@mail.ru.

http://vetkuban.com/num3_201901.html