А.И. Бутенков, С.Н. Карташов, А.Г. Ключников, А.Н. Тазаян
ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии
Комплекс исследований функционального состояния гуморального и клеточного иммунитета у 4-5 месячных поросят больных энзоотической пневмонией вызванной М. Hyopneumoniae, выявил резкое снижение количества В-лимфоцитов, а так же нарастающее снижение общего числа Т-лимфоцитов и отдельных популяций Р0К(р-РОК и в-РОК), что, по всей видимости, отражают нарушение лимфопоэза, а также перераспределение клеток и изменение регуляторного потенциала лимфоидных тканей у заболевших животных.
Актуальность. Энзоотическая пневмония свиней, вызванная М. hyopneumoniae с первичными пневмониями у свиней широко распространена и представляется как одна из экономически важных болезней свиней. В связи с отсутствием типичных симптомов болезни распознавание ее весьма затруднительно. У 75% убойных свиней находят очаги пневмонии, характерные для энзоотической пневмонии [3]. Заболеваемость в отдельных хозяйствах может достигать 100%, однако смертность, которая наблюдается среди 3—6-недельных поросят, колеблется от 0,5 до 20% [3]. Первая стадия болезни длительностью до 14 дней характеризуется кашлем и лихорадкой ремитирующего типа. В этой стадии животные сохраняют аппетит. Во второй хронической стадии длительностью до 20-25 дней и более появляются признаки пневмонии. Поросята становятся вялыми, не принимаю корм, спина изгибается, появляется слизисто-гнойный конъюнктивит, насморк (чихание и фырканье при приеме пищи). Кашель является основным и ведущим клиническим признаком, и он встречается у 50% больных поросят [1,2].
В крови больных поросят снижается количество эритроцитов и гемоглобина, развивается относительный лейкоцитоз с нейтрофилией, увеличивается содержание у-глобулинов.
Течение и исход болезни зависят не только от вирулентности возбудителя, но и от факторов внешней среды, влияющих на резистентность организма. При создании хороших условий содержания и кормления многие животные выздоравливают [2,3].
Цель исследования. Выяснить распространение энзоотической пневмонии свиней, состояние гуморальной и клеточной систем иммунитета у свиней больных энзоотической пневмонией вызванной М. Hyopneumoniae.
Материал и методы. Опыты проводили на 3-х группах поросят по 20 голов в каждой. Группы формировались по принципу пар-аналогов.
Первая группа, контрольная, включала клинически здоровых животных без признаков заболевания.
Во вторую опытную группу были включены животные с первой стадией заболевания, у которых отмечался кашель, но был сохранен аппетит.
Третья опытная группа животных, включала поросят со второй стадией заболевания, характеризующейся кашлем, тяжелой одышкой, адинамией, анорексией.
Определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов проводили с помощью реакции Манчини. Определение количества Т - лимфоцитов и их субпопуляций проводили методом розет-кообразования — Е-РОК, тимусзависимые Т-лимфоциты имеют рецепторы для эритроцитов барана, которые выступают, таким образом, специфическим маркером для их распознавания (Е-РОК: Erythrocyte — розеткообразующие клетки). Выявляли 2 субпопуляции: теофиллинчувствительные Т-лимфоциты (Т-супрессоры), утратившие способность к розеткообразова-нию под влиянием обработки теофиллином, и теофиллинус-тойчивые Т-клетки (Т-хелперы) лимфоциты, такую способность сохранившие.
Результаты исследования. В период с июля по декабрь 2008 года было исследовано 1038 голов поросят 3-5 месячного возраста, из них у 431 голов (41,52%) в полимеразной цепной реакции был обнаружен геном микоплазм, клинически заболевание проявлялось у 529 голов (51%).
Наряду с микоплазменной инфекцией из 94 клинически больных поросят у 33 (35,1%) из них зарегистрирован репро-дуктивно-респираторный синдром (РРСС), 18 случаев (19,1%) приходилось на микоплазмоз с репродуктивно-респираторным синдромом соответственно. У 12 (12,8%) поросят микоплазменной инфекции сопутствовала бактериальная пневмония, а у 8 (8,5%) поросят мы наблюдали бактериальную септицемию. Выявлено только 2 случая (2,1%), когда микоплазмоз был обнаружен без присутствия других возбудителей.
Аналогичные исследования проводились в США в 2001-2002 году. По данным R.M. Pogranichniy, K.Yoon (2002) ми-коплазмозу в 40% сопутствовал респираторно-репродуктивный синдром, а парвовирус встречался всего в 7,5% случаев. Вместе с тем, авторы приводят сведения об эндогенном рет-ровирусе свиней, который встречался в 100% случаев [4,6].
Как правило, ретровирусы инфицируют соматические клетки. Способность эндогенного ретровируса образовывать инфекционные вирусные частицы теряется вследствие мутаций. Если сохраняется способность к ретропозиции, число копий провируса в геноме возрастает, хотя новых инфекций не возникает [7].
Эндогенные ретровирусы и родственные элементы существуют, по-видимому, у всех позвоночных, включая эндогенные ретровирусы свиней (PERV), и в большом количестве существуют эндогенные ретровирусы у человека. Известно, что геномы свиней, в зависимости от породы животного, содержат разные типы PERV [3,7].
При анализе данных, полученных в результате бактериологического исследования поросят, у которых микоплазмен-ная инфекция сопровождалась септицемией, было установлено, что в 2-х случаях выделен Heamophilus parasuis, по 3 случая приходилось на Е. Coli и Salmonella sp. и в 5 случаях был выделен Streptococcus suis. Таким образом, бактериальная септицемия выявлена у 9% поросят с признаками энзоотической пневмонии свиней.
Нами проведен анализ сопутствующих бактериальных легочных инфекций. Установлено, что у 5,3% поросят, у которых микоплазменная инфекция проявлялась клинически, в легких выделена Pasteurella multocida, в 3,2% случаев - Bordetella bronchiseptica и в 1,1%случаев - Actibacilluspleuropneumoniae. Бактериальная пневмония сопутствовала микоплазмозу в 12,8% случаях у клинически больных поросят.
Установлено, что у поросят первой опытной группы отмечается снижение общего числа лейкоцитов периферической крови, что, кроме того, сопровождается выраженной лимфопения и лимфопения, количество Т-лимфоцитов периферической крови снизилось до 29,1±1,4% в перовой стадии заболевания и увеличилось до 68,6±1,2% во второй стадии заболевания. Однако, на фоне лимфопении абсолютное значение лимфоцитов снизилось до 0,69±0,038хЮ9/л в перовой стадии заболевания и до 0,43±0,05*109/л во второй стадии заболевания. Соотношение Т-хелперов к Т-супрессорам также изменялось, и по мере развития заболевания снижалось с 2,17 до 1,58 (таб. 1).
Таблица 1. Показатели клеточного иммунитета периферической крови
| Группа животных | Т- лимфоциты, % | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Т-лимфоциты | Т-хелперы | Т-супрессоры | Tх/Tc | ||||
| % | х109/л | % | х109/л | % | х109/л |
| |
| контрольная (n=20) | 48,7±0,4 | 1,38±0,04 | 27,8±0,8 | 0,41±0,01 | 12,5±0,4 | 0,18±0,011 | 2,17 |
| первая опытная (n=20) | 29,1±14** | 0,69±0,38 | 15,91±0,8** | 0,11±0,013 | 9,32±0,5** | 0,064±0,031 | 1,65 |
| вторая опытная (n=20) | 68,6±1,2*** | 0,43±0,05 | 11,83±0,8*** | 0,04±0,019 | 7,19±0,6*** | 0,031±0,011 | 1,58 |
| *р<0,05, ** р <0,01 *** р <0,001, в сравнении со здоровыми животными | |||||||
Все эти изменения — снижение общего числа Т-лимфоцитов и отдельных популяций РОК, снижение их соотношения (р-РОК и в-РОК) — по всей видимости, отражают нарушение лимфопоэза и перераспределение клеток, а также изменение регуляторного потенциала лимфоидных тканей по мере развития энзоотической пневмонии. Из теории общей иммунологии [3], выраженное снижение количества Т-лимфоцитов по отношению к здоровым животным сопровождается снижением клеточного иммунитета, что влечет за собой падение резистентности, в первую очередь, к вирусным инфекциям [2].
Результаты определения относительного и абсолютного содержания В-лимфоцитов у поросят в возрасте 3-6 недель, больных энзоотической пневмонией представлены в таблице 2.
Таблица 2. Показатели гуморального иммунитета периферической крови
| Группа ЖИВОТНЫХ | В-лимфоциты | Иммуноглобулины | |||
|---|---|---|---|---|---|
| % | х109/л | А, мг/мл | G, мг/мл | М, мг/мл | |
| контрольная (n=20) | 23,6±1,97 | 0,69±0,04 | 2,13±0,08 | 10,9±0,12 | 1,34±0,2* |
| первая опытная (n=20) | 13,97± 1,89 | 0,35±0,06* | 2,13±0,08* | 10,9±0,12 | 1,4±0,04 |
| вторая опытная (n=20) | 33,46±0,28 | 0,20±0,06* | 1,49*0,03* | 11,8±0,11 | 1,5±0,09 |
| *р< 0,001 в сравнении со здоровыми животными | |||||
Анализ показателей, характеризующих гуморальное звено иммунитета, выявил, что абсолютное содержание в крови В-лимфоцитов у здоровых поросят составило 0,69±0,04хЮ9/л.
При энзоотической пневмонии свиней в первой стадии заболевания количество В-лимфоцитов периферической крови снизилось до 13,97±1,89% и увеличилось до 33,46±0,28% во второй стадии заболевания. Но на фоне лимфопении абсолютное значение лимфоцитов снизилось до 0,35±0,06*109/л в первой стадии заболевания, до 0,20±0,06*109/л во второй стадии заболевания. При изучении изменений количества иммуноглобулинов отмечено, что в первой стадии заболевания содержание иммуноглобулина-А, G и М не отличается от здоровых животных, но во второй стадии энзоотическом пневмонии происходит резкое снижение иммуноглобулина А до 1,49±0,03 мг/мл, что на 30% ниже соответствующих показателей у здоровых животных и поросят во второй стадии заболевания. Уровень иммуноглобулина G и М статистически мало отличался от животных первой и второй опытных групп.
Выводы. Снижение общего числа В-лимфоцитов, Т-лимфоцитов, отдельных фракций иммуноглобулинов и отдельных популяций РОК, снижение их соотношения (р-РОК и в-РОК), по всей видимости, отражают нарушение лимфопоэза, а также изменении регу-ляторного потенциала лимфоидных тканей по мере развития заболевания. Из теории общей иммунологии известно, что, выраженное снижение количества Т-лимфоцитов по отношению к здоровым животным сопровождается снижением клеточного иммунитета и это влечет за собой падение резистентности, в первую очередь, к вирусным инфекциям [2].
Список литературы:
http://vetkuban.com/num3_20095.html