Крюков Н.И. ГНУ "Краснодарский
НИВИ" Россельхозакадемии
Введение. Микотоксины, как ядовитые продукты жизнедеятельности плесневых грибов, наносят большой ущерб животноводству. Сегодня насчитывается более 300 видов микотоксинов. Особое внимание привлекает их поражающее действие на систему иммунитета.
Среди исследованных in vitro микотоксинов наибольшими им-муноподавляющими эффектами обладали Т-2 токсин, фузаринон-х, NIV и DON. Иммуносупрессия была связана с подавлением активности Т- или В-лимфоцитов и ингибированием NK-клеток [4].
Учёные во всём мире ищут эффективные способы своевременного выявления и обезвреживания загрязнённых микотокси-нами кормов, кормового сырья и профилактики микотоксикозов. Однако проблема микотоксикозов до сих пор остаётся острой и требует своего разрешения. В литературе имеются данные о защитном действии против микотоксинов различных адсорбентов, которые связывают микотоксины в желудочно-кишечном тракте живот-ных[2,3]. В меньшей степени известно о сорбционных свойствах в отношении микотоксинов ферроцианид-содержащих препаратов.
Целью настоящей работы являлось изучение сорбционных свойств ферроцианидсодержащего сорбента изотопов цезия ХЖ-90 при экспериментальном микотоксикозе лабораторных животных. Материал и методы исследований.
В эксперименте использованы ферроцианидно-бентонитовый сорбент ХЖ-90 производства ВНИИВВиМ [1] из отходов виноделия, собранных на винзаводах Краснодарского края. Микотоксины: охратоксин А, ДОН, фумонизин В, зеараленон производства ООО "ФАРМАТЕХ". Лабораторными животными являлись крысы линии "ВИСТАР" массой 160-200 г, разделенные на 4 группы по 8 голов в каждой. Животные 1-й группы получали чистый корм и служили контролем. Крысы 2-й группы получали корм с добавлением смеси микотоксинов и 0,5% сорбента ХЖ-90 (5 г на 1 кг корма). В корм 3-й группы крыс добавляли смесь микотоксинов и 1% ХЖ-90 (10 г на 1 кг корма). Животные 4-й группы получали корм с микотоксинами, но без сорбента. Смесь микотоксинов добавляли в корм из расчета 5 мг на 1 кг корма.
Наблюдение за животными вели в течение 30 дней. Перед началом опыта крыс взвешивали, через 15 дней взвешивание повторяли и проводили контрольный убой по 2 крысы из каждой группы. Заключительный убой и анализ результатов проводили через 30 дней.
За животными на протяжении всего опыта вели наблюдение, учитывая общее состояние и поведение крыс, влияние микотокси-нов и защитное действие сорбента ХЖ-90 на прирост массы тела, некоторых паренхиматозных органов и показатели крови животных.
Погибших крыс вскрывали и регистрировали патологоанато-мические изменения в органах и тканях. Выживших животных в конце опыта убивали и также подвергали патологоанатомическому исследованию, а в отобранных пробах венозной крови исследовали общепринятыми методами лейкоцитарную формулу, бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови.
Результаты исследований:
Установлено, что длительное введение микотоксинов проявляет выраженное токсическое действие на организм интактных крыс (4-я группа). Через 6-9 суток у них начали проявляться признаки угнетения общего состояния, малоподвижность, нарушение координации движений, снизилась активность в поедании корма, появилась взъерошенность и потеря блеска шерстного покрова, увеличилось потребление воды. У крыс, получавших чистый корм (1-я группа) и корм с сорбентом (2-я и 3-я группы), внешних изменений не наблюдалось. Они охотно поедали корм, активно двигались в клетке, шерстный покров изменениям не подвергался. Такое состояние у них наблюдалось до конца проведения опыта.
Начиная с 16-го дня, у всех крыс 4-й группы замечено учащённое дыхание и сердцебиение, температура тела повысилась на 0,3-0,6оС. Максимальное повышение температуры на (1оС) регистрировали у отдельных крыс на 16-22-й день опыта. С 24-го дня опыта температура тела крыс постепенно снижалась и к концу находилась в пределах нормы. У основной массы животных отмечалось плохое потребление корма, у двух крыс на 19-й день - отказ от него, а на 16-й, 20-й и 24-й дни в этой группе погибли по одной крысе. У контрольных крыс и животных 2-й и 3-й групп, получавших корм с микотокси-нами и сорбентом, клинические признаки токсикоза отсутствовали.
Результаты прироста живой массы крыс отражены в табл. 1.
Таблица 1. Масса тела крыс после применения токсинов и сорбента, г
| До начала введения токсинов и сорбента | 15 сутки | 30 сутки | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Группа | Группа | Группа | |||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 1 | 2 | 3 | 4 | 1 | 2 | 3 | 4 |
| 157 | 175 | 150 | 125 | 193 | 225 | 197 | 186 | 210 | 221 | 211 | 151 |
| 161 | 175 | 151 | 131 | 194 | 207 | 195 | 257 | 215 | 212 | 226 | 190 |
| 142 | 144 | 155 | 185 | 189 | 245 | 217 | 201 | 237 | 248 | 242 | 172 |
| 153 | 190 | 165 | 181 | 187 | 186 | 183 | 170 | 201 | 190 | 197 | пала |
| 142 | 129 | 130 | 154 | 191 | 214 | 190 | 190 | 212 | 210 | 217 | пала |
| 169 | 130 | 182 | 138 | 193 | 192 | 190Z | 178 | 207 | 202 | 201 | пала |
| 163 | 190 | 139 | 224 | 204 | 207 | 202 | 162 | убита | убита | убита | убита |
| 165 | 118 | 146 | 137 | 207 | 172 | 250 | 183 | убита | убита | убита | убита |
| 156,5 ±10,17 | 156,4 ±29,34 | 152,2 ±15,91 | 159,4 ±34,38 | 194,8 ±7,07 | 206 ±22,99 | 203 ±21,53 | 190,9 ±29,27 | 213,7 ±12,39 | 213,8 ±19,72 | 215,7 ±16,66 | 171 ±19,52 |
| Прирост массы тела | +34 | +50 | +51 | +32 | +53,4 | +58 | +64 | +12 | |||
Прирост массы тела крыс 4-й группы, где присутствовал корм, контаминированный ассоциацией микотоксинов, характеризовался низкими показателями и гибелью 3-х животных. В контроле и в 2-х опытных группах, в которых с ассоциацией микотоксинов присутствовал сорбент ХЖ-90, прирост массы тела составил 53,4; 58; 64 г соответственно.
Прирост массы тела одного животного в течение опыта в 4-й группе оказался на 41,4 г ниже, чем в 1-й и на 46 г и 52 г ниже, чем во 2-й и 3-й группах. Это свидетельствует о влиянии токсинов на прирост живой массы, нарушении работы желудочно-кишечного тракта и нарастающей интоксикации организма. В тоже время, во 2-й и 3-й группах, явления токсикоза отсутствовали. Во 2-й группе среднесуточный привес превзошел группу 1 на 4,6 г в 3-й группе - на 10,6 г.
Хроническое течение ассоциированного микотоксикоза у крыс при введении 5 мг токсинов на 1 кг корма проявлялось гибелью трех из восьми взятых в опыт животных в течение 30 дней со средней продолжительностью жизни 20 дней. Сорбент ХЖ-90 в концентрации 0,5% и 1% в корме предотвращал смертельные исходы.
На 15-й день опыта после взвешивания животных был произведён диагностический убой (по 2 крысы в каждой из групп). На секции убитых животных в контроле и первых двух опытных группах в желудочно-кишечном тракте и паренхиматозных органов изменений не было обнаружено. У животных 4-й группы, получавших токсины, в желудке и тонком отделе кишечника были обнаружены покраснения и точечные кровоизлияния, печень увеличена в размере и неравномерно окрашена, желчный пузырь умеренно заполнен желчью жёлто-коричневого цвета.
За время проведения опыта в 4-й группе на 16-й, 20-й, и 24-й день погибло по одной крысе. При внешнем осмотре погибших животных, установлена синюшность слизистых оболочек ротовой и носовой полостей, гиперемия конъюнктивы, загрязнение шерстного покрова.
При патологоанатомическом вскрытии обнаружили: Лёгкие ярко-красного цвета, на разрезе в просвете трахеи и бронхов пенистая розовая жидкость. Печень - дряблая, увеличена в размерах, неравномерно окрашена, вишнёвого цвета, с участками некроза. Желчный пузырь умеренно заполнен желчью жёлто-коричневого цвета. Почки слегка увеличены с кровоизлияниями, граница коркового и мозгового слоя выражена слабо. Мочеточники увеличены, слизистая мочевого пузыря с полосчатыми кровоизлияниями.
Желудок вздут, на слизистой фундальной части полосчатые кровоизлияния.
На слизистой тонкого отдела кишечника точечные кровоизлияния, содержимое толстого отдела кишечника с пузырьками воздуха.
Сердце увеличено, миокард дряблый, на эпикарде точечные кровоизлияния. В полостях сердца плохо свернувшаяся кровь.
В лёгких застойные явления и нарушение кровообращения. Капилляры расширены, местами выпячиваются в просвет альвеол. В альвеолах скопление гомогенного оксифильного вещества с включением клеток красной крови и эпителиальных клеток.
Ярко выраженные изменения в иммунокомпетентных органах. Сосуды селезёнки гиперемированы, границы белой и красной пульпы сглажены, размеры пульпы и фолликулов уменьшены. Светлые центры пузырьков представлены редко расположенными лимфоцитами среднего и мелкого размера с бледно окрашенными ядрами. Гистологические изменения ткани почек заключаются в зернистой дистрофии эпителия извитых почечных канальцев и его десквамации в некоторых участках.
При диагностическом убое лабораторных животных проводили исследование влияния препарата ХЖ-90 на лейкоцитарную формулу и иммунологические показатели крыс на фоне микотоксикозов. Под влиянием токсинов в крови крыс 2-, 3- и 4-й групп по сравнению с контрольным уровнем (1 группа) происходило достоверное снижение процентного содержания палочкоядерных нейтрофилов (табл.2). Достоверное снижение сегментоядерных нейтрофилов находили только в 4-й группе. Содержание лимфоцитов в крови крыс под влиянием токсинов в 4-й группе по сравнению с 1-й достоверно повышалось. У крыс 2-й и 3-й групп это повышение было несущественным.
Таблица 2. Влияние сорбента ХЖ-90 на лейкоцитарную формулу крови крыс
| Группа | Нейтрофилы | Эозинофилы | Моноциты | Лимфоциты | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| юные | палочкоядерные | сегментоядерные | ||||
| 1 контроль | 0,0 | 1,5±0,22* | 30,6±2,48* | 4,2±0,49 | 3,4±0,50 | 58,3±2,03 |
| 2 токсины+ 0,5%ХЖ-90 | 0,0 | 0,2±0,17х | 27,7±1,61* | 3,6±0,87 | 3,5±0,56 | 65,0±2,08 |
| 3 токсины+ 1%ХЖ-90 | 0,0 | 0,5±0,22 х | 34,8±1,68* | 2,7±0,42 | 4,5±0,42 | 57,5±2,14 |
| 4 токсины | 0,0 | 0,5±0,22 х | 13,7±1,26 х | 3,2±0,54 | 2,9±0,65 | 79,7±1,08 х |
| Физиологическая норма | 0 | 2,0(1-4) | 26,5(20-35) | 1-5 | 1-5 | 55-75 |
Примечание. х 2,3,4 группы по сравнению с 1-й группой, р<0,001
* 1,2,3 группы по сравнению с 4-й группой, р<0,001
Бактерицидная активность сыворотки крови крыс, получавших токсины ( 4 группа), по сравнению с контрольными животными (1 группа), достоверно снижалась (табл. 3). Добавка сорбента в количестве 0,5% к корму (2 группа) не приводила к повышению уровня бактерицидной активности сыворотки крови, в то время как увеличение дозы сорбента до 1% (3 группа) активизировало бактерицидную активность (р<0,001).
Таблица 3. Влияние препарата ХЖ-90 на бактерицидность и лизоцимную активность сыворотки крови крыс на фоне микотоксикоза
|
| Группа | |||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | |
| Бактерицидная активность | 57,03±0,38 | 47,63±1,76 х | 62,58±0,96х* | 49,36±1,61 х |
| Лизоцимная активность, ИЛ | 65,26±0,74* | 61,28±0,43 | 64,25±0,63* | 59,27±0,86 х |
Примечание х 2,3,4 группы по сравнению с 1-й группой, р<0,001
* 1,3 группы по сравнению с 4-й группой, р<0,001
Лизоцимная активность сыворотки крови крыс при действии токсинов по отношению к контролю понижалась (4 группа) и оставалась на исходном уровне у крыс, получавших сорбент (2 и 3 группы). По сравнению с 4-й группой отмечено достоверное увеличение этого показателя у крыс, получавших сорбент в количестве 1% к корму (3 группа).
Таким образом, скармливание крысам контаминированного токсинами грибов корма, приводит к ухудшению общего состояния животных, выражающегося снижением аппетита, повышением потребления воды, расстройством пищеварения, повышению температуры тела на 0,3-0,6 оС, покраснению конъюнктивы, взъерошен-ности , отставанию в росте.
Морфологические изменения у павших животных свидетельствуют о поражении органов детоксикации (печень), выделения (почки), пищеварения (кишечник), иммунитета, лёгких, сердца.
Ферроцианидно-бентонитовый сорбент ХЖ-90 существенно снижал функциональные и морфологические проявления патологического процесса, вызванного микотоксикозом. Он повышал привесы, показатели естественной иммунологической резистентности, что выражалось увеличением процентного числа нейтрофилов в лейкоформуле, повышением уровня бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови и выживаемости животных.
Список литературы
Реферат
Экспериментальное скармливание крысам контаминирован-ного токсинами грибов корма вызывало у них заболевание - ми-котоксикоз, характеризующееся поражением органов детоксикации (печень), выделения (почки), пищеварения (кишечник), иммунитета, легких, сердца. Ферроцианидно-бентонитовый сорбент ХЖ-90 существенно снижал функциональные и морфологические проявления патологического процесса у крыс, вызванного микотоксикозом. Он повышал прирост массы тела, показатели естественной иммунологической резистентности.
Ключевые слова: ферроцианидно-бентонитовый сорбент ХЖ-90, микотоксины, крысы.
UDC 619:615-541.183-661.872.371
SORPTIVE FEATURES OF FERROCYANIDE-BENTONITE SORBENT HG-90 AT EXPERIMENTAL ASSOCIATED MYCOTOXICOSE
OF LABORATORY ANIMALS
Kryukov N.I.
Summary
Experimental feeding of rats by fodders contaminated with fungi toxins caused mycotoxicose characterized by defeat of organs of detoxication (liver), excretion (kidney), digestive system (intestines), immune system, lungs and heart. Ferrocyanide-bentonite sorbent HG-90 significantly decreased the functional and morphological manifestations of the pathological process in rats caused by mycotoxicose. It increases body weight and indices of natural immunological resistance.
Key words: ferrocyanide-bentonite sorbent HG-90, mycotoxins, rats.
About the author
Responsible for correspondence with the editorial board: Kryukov Nikolay I., Ph.D. in Veterinary Medicine, leading scientific researcher of laboratory of epizootology of the Krasnodar Scientific Research Veterinary Institute; 1, 1st Line st., Krasnodar, Russia, 350004; phone: +7 (861) 221-60-84; e-mail: kryukovn_@mail.ru
Сведения об авторе
Ответственный за переписку с редакцией: Крюков Николай Иванович, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник лаборатории эпизоотологии Краснодарского НИВИ. 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1, Краснодарский НИВИ, тел. 221-60-84; e-mail: kryukovn_@mail.ru
http://vetkuban.com/num3_11-11.html