УДК 619:618.19-002:636.22/28
DOI 10.33861/2071-8020-2021-2-34-36
Авдуевская Н.Н., Семина Л.К., Скулябина З.А. Вологодский филиал Федерального государственного
бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский
институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко
Российской академии наук», г. Вологда
Введение. Мастит - воспалительный процесс в тканях молочной железы. Воспаление является сложной реакцией организма, возникающей в ответ на действие механических, термических, химических или биологических факторов. Поэтому развитие, течение и исход мастита зависит от состояния организма и условий его существования, от состояния тканей молочной железы и характера болезнетворных факторов, в частности от патогенности микробов и путей проникновения их в молочную железу [3].
В ветеринарной практике для лечения мастита всё чаще применяют комплексные антибактериальные лекарственные препараты для интрацистернального введения, включающие в свой состав один, два и более антибиотиков.
Основная цель комбинированной антибиотикотерапии - достижение синергидного эффекта и расширение спектра антибактериальной активности в отношении множественно устойчивых патогенов. Комбинированная терапия широко используется для лечения инфекций, вызванных панрезистентными грамотрицательными возбудителями, или возбудителями, сохраняющими чувствительность только к одному из антибиотиков [6].
Комбинации такого рода преследуют цели повышения противомик-робного действия и ослабления отрицательного влияния их. При комбинированном назначении нескольких веществ с разным механизмом действия нарушают одновременно несколько звеньев метаболизма у возбудителей болезней, поэтому надежнее и быстрее вызывают гибель их. Усилить действие можно при сочетании вещества сильно, но кратковременно действующего, с умеренным по силе, но долго действующим. При этом первое вещество если не убивает, то переводит возбудителя болезни в анабиотическое состояние, а второе вещество мешает выйти ему из такого состояния [7].
Микробиологическая эффективность комбинаций антибиотиков трудно прогнозируема в связи с возможным присутствием у микроорганизма разнообразных механизмов резистентности даже к препаратам из одной группы. Поэтому для подбора эффективных комбинаций антибиотиков требуется проводить микробиологическое тестирование изолятов [6].
Общеизвестно, что в связи с появлением и широким распространением антибиотикорезистентности у бактерий необходимо определять чувствительность микроорганизмов - возбудителей инфекционных заболеваний животных к антимикробным препаратам.
Однако в ветеринарной медицине проведение вышеуказанного исследования применяют в основном не к препаратам комбинированного типа, которые используются для лечения мастита коров, а непосредственно к определенному антибиотику (действующему веществу).
Считаем, что это не позволяет более рационально проводить анти-биотикотерапию против воспаления молочной железы коров и в связи с этим мы апробировали диско-диффузионный метод определения чувствительности выделенных из молока коров микроорганизмов применительно к комплексным антимикробным препаратам.
Материалы и методы исследований. Микробиологическим исследованиям был подвергнут секрет молочной железы больных маститом коров из тринадцати сельскохозяйственных предприятий Вологодской, Ярославской и Костромской областей.
Исследования проводились в соответствии с «Методическими указаниями по бактериологическому исследованию молока и секрета вымени коров» [4], идентификация выделенных микроорганизмов -согласно ГОСТ 30347-2016 «Молоко и молочная продукция. Метод определения Staphylococcus aureus» [2] с использованием плазмы кроличьей цитратной сухой (ЗАО «Эколаб») и набора реагентов для выявления стрептококков групп А, В, С, G, D, F (ООО «НПО Аквапаст»).
Определение чувствительности выделенных из молока микроорганизмов к комплексным препаратам осуществлялось согласно «Методическим указаниям по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» [5], в качестве носителя антимикробного средства использовали бумажный диск, пропитанный в препарате комплексного антимикробного действия. Математическая обработка полученных результатов проводилась с помощью методического руководства «Биометрическая обработка лабораторных, клинических и эпизоотологических данных» [1].
Результаты исследований и их обсуждение. В результате микробиологических исследований секрета вымени лактирующих коров, отобранных в тринадцати животноводческих хозяйствах Вологодской, Ярославской, Костромской областей, из 269 проб исследуемого молока было изолировано 216 культур патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, а также молочнокислой и прочей непатогенной флоры.
Анализ результатов микробиологических исследований молока (секрета вымени) из указанных выше хозяйств показал, что за 2020 год в спектре выделенной микрофлоры патогенная и условно-патогенная флора составила 85 культур (31,6%), молочнокислая и прочая непатогенная - 131 культуру (48,7%).
В исследованиях по оценке антибиотикочувствительности применяли чистые культуры микроорганизмов: 11 штаммов золотистого стафилококка, 6 штаммов условно-патогенных стафилококков, 6 штаммов энтеробактерий и 4 штамма агалактийного стрептококка, выделенных из секрета вымени коров. В качестве комплексных антимикробных препаратов использовали 36 шприцев для внутривымянного введения, содержащих один, а также два и более антибиотиков (табл. 1).
Чувствительность указанных выше микроорганизмов к антибактериальным препаратам определяли диско-диффузионным методом. В нашем случае данный метод не позволяет оценивать результат по критериям для стандартных дисков и является ориентировочным в выборе того или иного препарата для лечения больных маститом коров. Он включает в себя последовательное выполнение нескольких этапов: приготовление питательных сред, приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов, инокуляция, инкубация, наложение бумажных дисков, пропитанных в комплексных антибактериальных препаратах, на плотную питательную среду, учёт и интерпретация результатов.
Выполнение этапа бумажных дисков проводили следующим образом. Стерильные бумажные диски из фильтровальной бумаги диаметром 6 мм пропитывали в капле комплексного антимикробного препарата в течение 18-24 часов. Для каждого препарата использовали отдельный диск. После пропитывания бумажные диски подсушивали с помощью фильтровальной бумаги с целью удаления излишнего количества суспензии препарата.
Далее пропитанные и подсушенные бумажные диски выкладывали на чашку Петри с агаром с предварительно подготовленной и нанесенной на них суспензией исследуемых микроорганизмов (через 20-25 минут). Аппликацию дисков проводили с помощью стерильного пинцета, соблюдая расстояние 15-20 мм от диска до края чашки и между дисками.
Непосредственно после аппликации дисков чашки Петри помещали в термостат кверху дном и инкубировали при температуре 37°С в течение 18-24 часов.
После окончания инкубации учитывали результаты, измеряя диаметр зон задержки роста, ориентируясь на зону полного подавления видимого роста (рисунок 1). Исходя из наибольшей зоны задержки роста, рекомендовали препараты для использования в каждом конкретном хозяйстве (ферме).
Таблица 1 Наименование комплексных препаратов для лечения мастита лактирующих коров
| Содержат одно действующее вещество (антибиотик) | Содержат два и более действующих веществ (антибиотиков) |
|---|---|
| 1. Кобактан (цефкином) | 1. Анкопен П (бензилпенициллин, канамицин) |
| 2. Мастикам (амоксициллин) | 2. Ваккамаст (диоксидин, линкомицин) |
| 3. Мастиет голд (цефаперин) | 3. Гамарет (новобиоцин, неомицин, бензилпенициллин, септомицин) |
| 4. Нороклав (амоксициллин) | 4. Диеномаст (диоксидин, гентамицин) |
| 5. Норфлоксамаст (норфлоксацина никотинат) | 5. Лактобай (клоксациллин, ампициллин) |
| 6. Синулокс (амоксициллин) | 6. Максифо LC (неомицин, новобиоцин, пенициллин, дигидростептомицин) |
| 7. Ц-маст (цефазолин) | 7. Мамикур (клоксациллин, неомицин) |
| 8. Энроутеромаст ВБФ (энрофлоксацин) | 8. Мастиет форте (тетрациклин, неомицин, бацитрацин) |
| 9. Амокслав (амоксициллин) | 9. Мастинон форте (окситетрациклина гидрохлорид, неомицина сульфат, бацитрацин) |
| 10. Цефурокс (цефуроксим натрия) | 10. Мастивекс (неомицин, сульфадимедин) |
| 11. Амоксибаг (амоксициллин) | 11. Мастивин (метилурацил, рифампицин, гентамицин) |
| 12. Колимаст (неомицин) | 12. Мастилек (бензилпенициллин, стрептомицин, неомицин) |
| 13. Мастимакс (бензилпенициллин, дигидрострептомицин, неомицин, диоксидин) | |
|
| 14. Мастилекс (цефалексин, гентамицин) |
| 15. Мастомицин (гентамицин, клиндамицин) | |
| 16. Мастолексин (цефалексина моногидрат, гентамицина сульфат) | |
| 17. Мультибай (пенициллин, стрептомицин, неомицин) | |
| 18. Мультиджект (пенициллин, стрептомицин, неомицин) | |
| 19. Прималакт (цефатаксим, неомицин) | |
| 20. Тетра дельта (новобиоцин, неомицин, пенициллин, септомицин) | |
| 21. Тиломаст (тилозина тартрат, неомицин, бацитрацин) | |
| 22. Интрамаст (клоксациллин, ампициллин) | |
| 23. Мак Д3 (спирамицин, гентамицин, флуметазон) | |
| 24. Тетраантимаст (новобиоцин, неомицин, пенициллин, дигидрострептомицин) |
В ходе работы мы определили среднюю зону задержки роста золотистого стафилококка на примере семи хозяйств и часто используемых комплексных антибактериальных препаратов (табл. 2).
Таблица 2 Зона задержки роста золотистого стафилококка к комплексным антимикробным препаратам
| Наименование комплексного препарата | Номера хозяйств/ ЗЗР золотистого стафилококка, мм | M±m | Изменчивость по хозяйствам, (CV)% | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | |||
| 1. Диеномаст | 22 | 24 | 16 | 25 | 30 | 20 | 28 | 23,5±0,09 | 19,7 |
| 2. Норфлоксамаст | 31 | 41 | 27 | 32 | 33 | 30 | 32 | 32,2±0,09 | 14,3 |
| 3. Синулокс | 30 | 43 | 30 | 40 | 29 | 30 | 25 | 32,4±0,09 | 18,3 |
| 4. Мастинон форте | 30 | 32 | 26 | 30 | 28 | 27 | 25 | 28,2±0,12 | 8,1 |
| 5. Прималакт | 28 | 28 | 30 | 30 | 30 | 24 | 27 | 28,1±0,12 | 7,0 |
| 6. Мастиет форте | 26 | 34 | 27 | 28 | 28 | 30 | 25 | 28,2±0,12 | 10,5 |
| 7. Гамарет | 24 | 40 | 25 | 26 | 24 | 24 | 30 | 27,5±0,09 | 19,2 |
| 8. Анкопен П | 22 | 40 | 20 | 27 | 29 | 23 | 16 | 25,2±0,09 | 31,4 |
| 9. Интрамаст | 31 | 40 | 30 | 35 | 31 | 32 | 35 | 33,4±0,12 | 9,8 |
| 10. Цефурокс | 27 | 40 | 28 | 29 | 28 | 35 | 40 | 32,4±0,09 | 13,2 |
| 11. Энроутеромаст ВБФ | 30 | 36 | 30 | 30 | 35 | 34 | 30 | 32,1±0,12 | 6,1 |
| 12. Кобактан | 25 | 27 | 27 | 27 | 22 | 22 | 20 | 24,2±0,12 | 9,5 |
| M±m | 27,1±0,09 | 35,4±0,07 | 26,3±0,07 | 29,9±0,07 | 28,9±0,07 | 27,5±0,07 | 27,7±0,07 |
|
|
| Изменчивость по препаратам (CV)% | 10,9 | 13,4 | 13,3 | 12,5 | 11,2 | 13,6 | 21,6 |
|
|
Исходя из данных таблицы 2, наиболее высокая чувствительность золотистого стафилококка к перечисленным препаратам отмечена во втором (35,4±0,07) и четвертом (29,9±0,07) хозяйствах. Из указанных в таблице препаратов наибольшим антибактериальным эффектом обладают Норфлоксамаст (32,2±0,09), Синулокс (32,4±0,09), Интрамаст (33,4±0,12), Цефурокс (32,4±0,09), Энроутеромаст ВБФ (32,1±0,12).
Кроме того, коэффициент вариации чувствительности золотистого стафилококка по препаратам варьирует в широких пределах (от 6,1 до 31,4 %). Так, «незначительная» изменчивость (не превышает 10%) показателя отмечена при использовании таких препаратов, как Мастинон форте (8,1%), Прималакт (7,0%), Интрамаст (9,8%), Энро-утеромаст ВБФ (6,1%), Кобактан (9,5%); «средняя» изменчивость (от 10 до 20%) - Диеномаст (19,7%), Норфлоксамаст (14,3%), Синулокс (18,3%), Мастиет форте (10,5%), Гамарет (19,2%), Цефурокс (13,2%) и «значительная» изменчивость (более 20%) - Анкопен П (31,4%).
Коэффициент вариации по хозяйствам к применяемым препаратам также варьирует. Так, «средняя» изменчивость показателя наблюдается с первого по шестое хозяйство (от 10,9 до 13,6%), «значительная» изменчивость в седьмом хозяйстве (21,6%), «незначительной» изменчивости не наблюдается.
Полученные результаты говорят о существенных колебаниях размеров зон задержки роста патогенного стафилококка как по комплексным препаратам, так и по хозяйствам. В связи с этим определение чувствительности выделенного микроорганизма (патогенного или условно-патогенного) к комплексным антибактериальным препаратам является актуальным и значимым для практикующих ветеринарных специалистов.
Рис. 1. Чувствительность золотистого стафилококка к комплексным антимикробным препаратам
Заключение. Нами предложен ориентировочный способ определения чувствительности микроорганизмов, выделенных из молока больных маститом коров, к комплексным антимикробным препаратам в виде суспензий и растворов, который дает возможность ветеринарным врачам хозяйств определиться в выборе того или иного препарата для лечения коров в период лактации и профилактики мастита в период сухостоя с наибольшей эффективностью.
Статья выполнена в соответствии с государственным заданием № 0578-2019-0003.
Список литературы:
Резюме. Анализ результатов микробиологических исследований молока (секрета вымени) из хозяйств Вологодской, Ярославской и Костромской областей показал, что за 2020 год в спектре выделенной микрофлоры патогенная и условно-патогенная флора составила 85 культур (31,6%), молочнокислая и прочая непатогенная - 131 культуру (48,7%). При исследовании антибиотико-чувствительности применяли чистые культуры микроорганизмов: 11 штаммов золотистого стафилококка, 6 штаммов условно-патогенных стафилококков, 6 штаммов энтеробактерий и 4 штамма агалактийного стрептококка, выделенных из секрета вымени коров. В качестве комплексных антимикробных препаратов использовали 36 шприцев для внутривымянного введения, содержащих один, а также два и более антибиотиков. Чувствительность указанных выше микроорганизмов к антибактериальным препаратам определяли диско-диффузионным методом. В ходе работы авторами определена средняя зона задержки роста золотистого стафилококка на примере семи хозяйств и часто используемых ими комплексных антибактериальных препаратов. Полученные результаты указывают на существенные колебания размеров зон задержки роста патогенного стафилококка как по комплексным препаратам, так и по хозяйствам. В связи с этим определение чувствительности выделенного микроорганизма (патогенного или условно-патогенного) к комплексным антибактериальным препаратам является актуальным и значимым для практикующих ветеринарных специалистов. В соответствии с проведенными исследованиями авторами предложен ориентировочный способ определения чувствительности микроорганизмов, выделенных из молока больных маститом коров, к комплексным антимикробным препаратам в виде суспензий и растворов. Предлагаемый способ дает возможность ветеринарным врачам хозяйств определиться в выборе того или иного препарата для лечения коров в период лактации и профилактики мастита в период сухостоя с наибольшей эффективностью.
Ключевые слова: крупный рогатый скот, лактация, мастит коров, лечение, микроорганизмы, чувствительность, антибиотикорезистентность, комплексные антимикробные средства, раствор, суспензия, диско-диффузионный метод.
Сведения об авторах:
Семина Людмила Константиновна, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник Вологодского филиала ФГБНУ «Федеральный научный центр -Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук»; 160009, г. Вологда, ул. Чехова, 10; e-mail: viev-mastit@yandex.ru.
Скулябина Зоя Александровна, старший научный сотрудник Вологодского филиала ФГБНУ «Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук»; 160009, г. Вологда, ул. Чехова, 10; e-mail: zengira@mail.ru.
Ответственный за переписку с редакцией: Авдуевская Наталья Николаевна, соискатель, научный сотрудник Вологодского филиала ФГБНУ «Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук»; 160009, г. Вологда, ул. Чехова, 10; e-mail: natali.avduevskaya@mail.ru.
http://vetkuban.com/num2_202108.html