УДК579.62:619.57.083.1
Дрошнев А.Е., Завьялова Е.А., Гулюкин М.И. ФГБНУ ВИЭВ, г. Москва
Введение. Вибриоз является массовым бактериальным заболеванием рыб и гидробионтов в морской и солоноватой воде, которое впервые было выявлено у угрей в 1909 году. [13]. Это заболевание встречается у многих видов костистых рыб, моллюсков, ракообразных за рубежом и в России. Возбудителем вибрио-за рыб является Vibrio (Listonella) anguillarum. Заболевание особенно интенсивно развивается в теплое время года, достигая максимума при температуре 19-20°С [2]. Вибриоз в период эпизоотии может привести к 90 % гибели культивируемых лососевых рыб.
Изучение рода Vibrio, в частности вида Vibrio (Listonella) anguillarum необходимо для современной ихтиопатологии. Данный представитель рода повсеместно распространен в солоноватых и морских водах, при этом вызывает у культивируемых рыб острое инфекционное заболевание - вибриоз, - которое характеризуется септицемией, поражением тканей почек, печени, желудочно-кишечного тракта, нарушением водно-солевого обмена и интоксикацией. Известно, что молодь форели радужной и атлантического лосося наиболее восприимчива к заражению V. anguillarum, клинические признаки заболевания проявляются через 30-40 суток после завоза невакцинированной рыбы в морскую воду при температуре 15-20оС, и за короткое время болезнь переходит в острую форму с массовой гибелью. При отсутствии терапии потери достигают 90%. Антибиотикотерапия не позволяет провести 100% деконтаминацию организма рыбы от вибрионов, болезнь переходит в хроническую форму, происходят многократные повторные вспышки [1, 3].
Во всем мире экономический ущерб от вибриоза исчисляется миллионами долларов, лечебные мероприятия не позволяют охватить все поголовье рыбы, тем самым возбудитель персистирует в стаде, а болезнь циклически переходит из острой стадии в хроническую и наоборот. Увеличение объемов производства, и, следовательно, плотностей посадки рыбы и количества хозяйств в локальных акваториях приводит к росту прессинга патогенных микроорганизмов, впоследствии вызывающих эпизоотии. Поэтому, на сегодняшний день мировая практика борьбы с вибриозом заключается в поголовной вакцинопрофилактике и соблюдении ветеринарно-санитарных правил при выращивании.
Существует несколько методов вакцинации рыб: индивидуальные инъекции, погружение в ванны и введение орально. В литературе подробнейшим образом описан ход работы и приводятся результаты исследований ученых [12, 14, 15, 16] в сравнительном аспекте.
Вакцинация купанием применяется для водорастворимых вакцин - время обработки, в зависимости от степени разбавления, составляет от 20 мин до нескольких часов. Это наименее трудоемкий метод, не вызывающий стресс у рыб, однако требующий большого расхода вакцины. Иммерсионный гиперосмотический способ (ванны) эффективен для групповой обработки и рекомендован для ревакцинации при перевозках, при этом по иммуногенности уступает инъекционным формам. Ранее, около 20-ти лет назад, во ВНИРО была разработана инактивированная вакцина для иммерсионного применения [10, 11], но в практике она так и не применялась в связи с указанными выше недостатками (трудоемкость применения, большой расход препарата) и общей незрелостью, неготовностью российской аквакультуры того периода к проведению подобных работ.
В настоящее время многочисленными исследованиями установлено, что наиболее эффективным способом вакцинации является внутрибрюшинный метод введения. Применение анестезирующих препаратов и использование специального оборудования - ручного, полуавтоматического и автоматического - позволяет проводить обработку большого количества рыб в единицу времени и экономно расходовать биопрепарат.
Таким образом, в России сейчас особенно актуальна разработка профилактических средств путем создания вакцинных препаратов из эндемичных штаммов. Данная работа начата нами в 2011 году, в этот период были отобраны штаммы, изучены некоторые биологические свойства вибрионов [8], в частности антигенные и вирулентные, необходимые для конструирования вакцинного препарата [4], подобраны адъюванты, образующие стойкие эмульсии с водным вибриоз-ным антигеном, а также изучены иммуногенные свойства полученных биопрепаратов [5, 6, 7, 9].
В 2016 году изготовлены малые серии вакцины из бактерина (для ванн), в комбинации с масляными и адсорбционными адъювантами (для инъекций). Целью работы стало изучение в сравнении иммуногенности, реактогенности и безвредности полученных биопрепаратов. В данной статье представлены результаты исследования выполненного в промышленных условиях.
Материалы и методы исследования. Для проведения исследования использовали радужную форель около 13 см длиной (средний вес 30 г) и 5 см (средний вес 8 г). Работы проводили в пресной воде в установке замкнутого водоснабжения (УЗВ) в стеклопластиковых емкостях на коммерческой ферме. Температура воды в течение всего эксперимента составляла 13-15°C.
Вакцина из штаммов вибрионов Listonella (Vibrio) anguillarum - «ВБФ», «Бок07», «АФ3/4» - с охарактеризованными ранее биологическими свойствами.
Адъюванты: гидроокись алюминия (ГОА), Montanide ISA 70.
Вакцинировали двумя способами: инъекцией по 0,1 см3 внутрибрюшинно под общей анестезией (в индивидуальной дозе 1*108 м.кл.) и купанием в растворе вакцины с предварительным гиперосмосом (рабочая концентрация 5*108 м.кл.мл).
Иммуногенность опытных серий вакцины изучали в реакции агглютинации.
Результаты исследований. Рыб для исследования разделили на пять групп: 3 опытных и 2 контрольных, содержащихся в том же цехе, с которыми не проводили никаких манипуляций (табл. 1).
Таблица 1. Схема вакцинации радужной форели против вибриоза
| Тип вакцины | Группа № 1 Вакцинация купанием (иммерсия) | Группа № 2 Вакцинация инъекцией, адъювант гидроокись аллюминия (ГОА) | Группа № 3 Вакцинация инъекцией, адъювант MontanidelSA 70 | Группа № 4 - контроль I | Группа № 5 - контроль II |
|---|---|---|---|---|---|
| Размер/вес рыбы (см/г) | 5/8 | 13/30 | 13/30 | 5/8 | 13/30 |
| Количество (шт.) | 100 000 | 130 000 | 120 000 | 100 000 | 10 000 |
Смертность во время проведения вакцинации указанными способами и в течение 30 дней наблюдения после была от минимальной (единичные особи) в группе № 1 до нескольких сотен рыб в день вакцинации и на следующий - в группе № 3. Это связано с тем, что масляные адъюванты переносятся рыбами тяжелее, за счет развития местной аллергической реакции. Однако, через три дня после проведения работ количество погибших рыб не превышало средних нормативных значений по цеху, и даже меньше - так как при вакцинации инъекцией проводилась дополнительная бонитировка - удалялись особи с отклонениями от физиологической нормы (имеющие искривления тела, отсутствующие плавники, жаберные крышки, истощенные) и кондиции, несоответствующие своему возрасту.
Дальнейшие исследования показали различие в титрах вырабатываемых агглютинирующих антител (ТАА) по сравнению с контрольными группами. Максимальный титр агглютинирующих антител наблюдали на 30-50-й день после введения. При этом наиболее высокие значения ТАА были в группе рыб, вакцинированной препаратом с ISA 70 (группа № 3), составили на 10-й и 20-й день - 1:64-1:128, на 30-50-й день - 1:512 - 1:1024. В группах рыб, иммунизированных вакциной на основе ГОА (группа № 2), средний ТАА на 10-20-й день был на уровне 1:64-1:128, а на 30-50-й день - 1:512. Уровень антител сохранялся на протяжении 9-ти месяцев наблюдения.
При иммерсионной иммунизации отмечали хорошую переносимость, безвредность и простоту процедуры. Выработка титров поствакцинальных антител к 20-м суткам соответствовала значениям, как и при инъекционном введении - 1:64-1:128, но в динамике не превышала пределов 1:256. Показатели ТАА к 9-му месяцу составили 1:32-1:64.
Выводы. Недостаточная эффективность введения бактерина без использования адъюванта была показана нами, а ранее многими исследователями, но и применение наиболее распространенных из существующих сейчас вариантов: ГОА и ISA 70 имеет достоинства и недостатки.
Установлено, что одноразовая иммунизация радужной форели препаратом на основе ISA 70 несколько выше и предотвращает гибель до 97% рыб, а препаратом на основе ГОА - 90%.
Однако, существенным недостатком использования вакцин на основе масляных адъювантов является местная воспалительная реакция, приводящая к повышенной смертности рыб в начальный период применения вакцины, а также образованию соединительной ткани между стенками внутренних органов и брюшной полости (фибрин). В месте инъекции образуется черный пигмент (гемосидерин).
Следовательно, для промышленного производства необходимо выбирать компоненты, сочетающие достойный уровень защиты, но не вызывающие побочных эффектов с экономическими последствиями, такие как ГОА.
Список литературы
Резюме. Вибриоз - массовое бактериальное заболевание рыб, моллюсков, ракообразных выращиваемых в солоноватой и морской воде. Увеличение объемов производства, и, следовательно, плотностей посадки рыбы и количества хозяйств в локальных акваториях приводит к росту прессинга патогенных микроорганизмов, впоследствии вызывающих эпизоотии. Эти же факторы не позволяют провести 100% антибиотикотерапию всего поголовья, что приводит к развитию антибиотикорезистентности циркулирующих штаммов и повторным вспышкам эпизоотии. Мировая практика борьбы с вибриозом заключается в поголовной вакцинопрофилактике, для которой сейчас разработано много способов: купание, оральное применение, инъекции. В настоящей статье представлены материалы о применении вакцины против вибриоза на коммерческой ферме. В серии производственных опытов установлено, введение бактерина в виде ванн недостаточно эффективно; применение адъюванта повышает защиту до 90-97% поголовья рыб, но имеет недостатки, например, масляный адъювант тяжело переносится рыбами за счет местной воспалительной реакции. Для промышленного производства рекомендовано выбирать компоненты, сочетающие достойный уровень защиты, но не вызывающий побочных эффектов, такие как гидроокись алюминия.
Ключевые слова: болезни лососевых рыб, радужная форель, вибриоз, вибрион, вакцина, вирулентность, иммуногенность, биопрепарат, антигенная активность, адъювант.
Сведения об авторах:
Дрошнев Алексей Евгеньевич, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории ихтиопатологии ФГБНУ ВИЭВ имени Я.Р. Коваленко; 109428, г. Москва, Рязанский проспект, д. 24, к. 1; тел.: 8-495-995-88-61; e-mail: asdf1961@mail.ru.
Гулюкин Михаил Иванович, доктор ветеринарных наук, профессор, академик РАН, директор ФГБНУ ВИЭВ имени Я.Р. Коваленко; 109428, г. Москва, Рязанский проспект, д. 24, к. 1; тел.: 8-495-970-03-69; e-mail: admin@viev.ru.
Ответственный за переписку с редакцией: Завьялова Елена Александровна, кандидат биологических наук, заведующая лабораторией ихтиопатологии ФГБНУ ВИЭВ имени Я.Р.Коваленко; 109428, г. Москва, Рязанский проспект, д. 24, к. 1; тел.: 8-495-995-88-61; e-mail: aquazeda@mail.ru.
http://vetkuban.com/num2_201708.html