А.Д. 3абережный, Т.В. Гребенникова, Т .И. Aлипер, НПО НАРВАК, Москва
Вирус гриппа А широко распространен в природе, поражает многие виды млекопитающих и птиц, в основном водного и околоводного комплекса, и способен вызывать эпидемии, пандемии и эпизоотии. Вирус гриппа А отличается высокой степенью вариабельности, особенно это касается поверхностных гликопротеинов вириона: гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA). Известно 16 антигенных подтипов гемагглютинина (Н1-Н16) и 9 подтипов нейраминидазы (N1-N9). От диких птиц изолированы вирусы со всеми известными сочетаниями поверхностных белков, при этом инфекция у диких птиц протекает в виде энтерита, без видимых признаков заболевания. Это указывает на высокую степень адаптации вирусов гриппа А к диким птицам, которые являются естественными хозяевами вирусов гриппа. Вирус сохраняется в воде в течение длительного времени (6-8 месяцев), а водно-фекальный путь инфицирования является основным механизмом поддержания персистенции вируса гриппа в природе, откуда вирус проникает в популяции домашних животных.
Отличительной особенностью вируса гриппа является его способность к реассортации, в результате которой появляются новые варианты.
За последние 45 лет описано свыше 30 эпизодов возникновения эпизоотий среди домашних животных в ряде случаев сопровождающихся заболеванием людей, подчас с высокой смертностью.
Вирусы H5N1 периодически выделялись от кур и других видов птиц. В 1997 году в Гонконге отмечена вспышка заболевания, обусловленная прямой передачей вируса гриппа птиц H5N1 от кур человеку. Это был первый подтвержденный случай передачи вируса гриппа от птиц человеку. В результате заболело 18 человек, 6 из которых умерли. В Юго-Восточной Азии с тех пор подтверждены случаи инфицирования людей вирусом гриппа птиц, при этом смертность достигала 85%. Теперь мы видим повторение подобной картины в Турции.
Особо следует отметить отсутствие во всех случаях передачи вирусов от человека к человеку.
Разработка средств молекулярной диагностики для вируса гриппа А
Угроза возникновения новой пандемии, предупреждение заноса и распространения возбудителя высоко патогенных вирусов гриппа на территории нашей страны требует проведения мониторинга среди людей, домашних и диких животных с использованием современных средств диагностики.
Молекулярные методы диагностики являются быстрыми, высокочувствительными и специфичными при определении вируса гриппа А птиц и его подтипов. В НПО НАРВАК разработан комплекс молекулярных методов для определения вируса гриппа А, которые могут явиться источником будущих пандемий, опасных для человека.
Тест-система для определения РНК вируса гриппа А методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)
Разработанная тест-система для определения вируса гриппа А в сыворотках человека и животных методом ПЦР, является универсальной для животных и человека и позволяет определять РНК вируса гриппа А в различных биологических образцах животных и человека.
Тест-система для определения и дифференциации РНК вируса гриппа А подтипов Н5 и Н7 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)
Разработанная тест-система позволяет не только определять РНК вируса гриппа А в биологических образцах, но и дифференцировать Н5 и Н7 от других подтипов вируса гриппа А.
Тест-система для определения РНК вируса гриппа А подтипа Н5 методом ПЦР в реальном времени
Разработанная тест-система "ПЦР В реальном времени" позволяет проводить количественное определение вируса. Кроме того, это чувствительный, быстрый и более технологичный метод, который может быть использован для массового анализа образцов от человека и животных на наличие РНК разных подтипов вируса гриппа А. Метод с успехом апробировался при скрининге полевого материала, что позволяет рекомендовать его для массового изучения образцов, полученных от животных и человека.
Описанные тест -системы успешно прошли Государственные контрольные испытания и имеют сертификационные документы.
Новейшие разработки в области диагностики гриппа
Одной из современных технологий является создание микрочипов (биочипов), основанных на гибридизации нуклеиновых кислот. Данная технология разработана совместно НПО НАРВАК, НИИ вирусологии им. Ивановского РАМН, НИИ молекулярной биологии им. Энгельгарда РАН для определения и дифференциации вируса гриппа А подтипов Н1-Н15, N1-N2. По затратам средств и времени один биочип эквивалентен 17 реакциям (ПЦР). Считывание и документирование происходит с использованием специального прибора, который сравнивает каждый зонд с положительным и отрицательным контролем. В результаты применения микрочипа для анализа образцов из Новосибирской области в 2005 г. сразу было установлено, что это H5N1. Внедрение нового метода требует дополнительных испытаний.
Анализ первичной структуры генома вирусов гриппа (секвенирование)
Вирус гриппа генетически чрезвычайно изменчив и этим опасен. Изменения свойств вируса могут происходить как из-за изменения генов (мутации), так и в ходе обмена генами (реассортация). Генетический материал вируса состоит из 8 несвязанных фрагментов РНК. При попадании в организм двух вирусов гриппа одновременно, они с легкостью обмениваются соответствующими фрагментами РНК, следя лищь за тем, чтоб у каждого вируса был полный набор фрагментов. Поэтому всегда есть угроза появления опасных гибридов: в 1918 г. это был H1N1, а сегодня это может быть H5N1. ДЛЯ лучшего понимания и прогнозирования ситуации, для изучения происхождения и эволюции штаммов вируса гриппа применяют метод секвенирования, Т.е. молекулярного "чтения" вирусных генов. Метод появился на рубеже 70-80х годов 20 века. Сегодня секвенирование фрагментов вирусного генома является уже почти обязательным требованием при возникновении новых или спорных вирусных вариантов. Для вируса гриппа установлено, что его патогенность связана с последовательностью аминокислотных остатков в Т.Н. "сайте разрезания" гемагглютинина (Н). Поэтому сегодня этот сай,Т всегда определяют у выделяемых вирусов гриппа. Раньше у птиц на территории России находили вирус подтипа Н5 с "сайтом разрезания" как у низко патогенных штаммов. Сегодняшний возмутитель спокойствия (H5N1) имеет "сайт разрезания" такой же как у высоко патогенных штаммов. Неудивительно, что он оказывается патогенным для домашней птицы.
Грипп остается непредсказуемой и опасной инфекцией. Имея своим природным резервуаром дикую водоплавающую птицу, он неизбывно будет пребывать в соседстве с человеком. Поэтому задача сегодняшнего и завтрашнего дня - опередить инфекцию и защититься от нее раньше, чем она примет новые формы.
http://vetkuban.com/num1_20061.html